Ocorrência de Clostridioides difficile em bezerros: caracterização fenotípica e genotípica dos isolados toxigênicos - Cerri, Fabricio Moreira [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
O Clostridioides difficile é uma das principais causas de diarreia em seres humanos em animais. A participação deste agente como causador de diarreia neonatal bovina não é completamente elucidada. O objetivo do presente estudo foi determinar a ocorrência de C. difficile em bezerros. Para isso, colheram-se amostras (n=300) de fezes de bezerros em fase de amamentação (diarreicos n=78 e não diarreicos =222), provenientes de vinte propriedades diferentes. Estas foram cultivadas em condições de anaerobiose (10% CO2, 5% H2 e 85% N2), as colônias foram consideradas positivas de acordo com as características morfológicas. Realizou-se a extração de DNA e a PCR multiplex para detecção dos genes 16S RNA, tcdA, tcdB, cdtA e cdtB. As amostras toxigênicas foram submetidas à ribotipagem e ao teste de susceptibilidade a antimicrobianos. Cinco amostras foram selecionadas para realização do sequenciamento do genoma completo para determinação da MLST (tipo de sequência/clado) e dos genes de resistência a antimicrobianos. O C. difficile foi isolado em 29,33% (88/300) dos animais, sendo 80,7% (71/88) de cepas não toxigênicas e 19,3% (17/88) de cepas toxigênicas (A+B+ cdtA/B- e A+B+ cdtA/B+). Os ribotipos (RT) identificados foram 046 (13/17- 76,47%) e 126 (4/17 – 23,53%). Em relação à cgMLST, as cepas selecionadas pertencentes ao RT046 (bezerros 38,182 e 243) foram classificadas como ST35 (clado 1), e RT126 (bezerros 40 e 49) como ST11 (clado 5). O perfil de resistência a antimicrobianos observado foi: vancomicina 0%, metronidazol 0%, rifamicina 52,9%, moxifloxacino 70,60%, tetraciclina 76,47% e eritromicina 100%. Não foram observadas correlações estatísticas entre os dados epidemiológicos e o isolamento do C. difficile. Os bezerros são fonte de cepas toxigênicas com perfil de multirresistência a antimicrobianos observado em seres humanos e outros animais.

The objective of the present study was to determine the occurrence of C. difficile in calves. For this purpose, samples (n=300) of feces from nursing calves (diarrheic n=78 and non-diarrheic calves =222) were collected from twenty different properties. These samples were cultivated under anaerobic conditions (10% CO2, 5% H2, and 85% N2), colonies were considered positive based on morphological characteristics. DNA extraction and multiplex PCR were performed to detect genes 16S RNA, tcdA, tcdB, cdtA, and cdtB. Toxigenic samples underwent ribotyping and antimicrobial susceptibility testing. Five samples were selected for whole-genome sequencing to determine cgMLST (sequence type/clade) and antimicrobial resistance genes. C. difficile was isolated in 29.33% (88/300) of the animals, with 80.7% (71/88) being non-toxigenic strains and 19.3% (17/88) toxigenic strains (A+B+ cdtA/B- and A+B+ cdtA/B+). The identified ribotypes (RT) were 046 (13/17 - 76.47%) and 126 (4/17 – 23.53%). Regarding cgMLST, selected strains belonging to RT046 (calves 38, 182, and 243) were classified as ST35 (clade 1), and RT126 (calves 40 and 49) as ST11 (clade 5). The observed antimicrobial resistance profile was vancomycin 0/17 (0%), metronidazole 0/17 (0%), erythromycin 17/17 (100%), moxifloxacin 12/17 (70.60%), rifampicin 9/1 (52.9%), and tetracycline (13/17 - 76.47%). Most toxigenic strains (16/17 – 97.41%) were classified as multidrug-resistant to the tested antimicrobials. C. difficile can be isolated in the feces of nursing calves. No statistical correlations were observed between epidemiological data and C. difficile isolation. Calves are a source of toxigenic strains with a multidrug-resistant profile observed in humans and other animals.
Occurrence of Clostridioides difficile in calves: phenotypic and genotypic characterization of toxigenic isolates
Keywords: Bezerros; Cattle; Diarreia; RT126; ST35; MLST; Diarrhea