Efeito do fator de necrose tumoral (TNF) sobre a ativação e expressão de receptores TNFR1 e TNFR2 por subpopulações de linfócitos Th17 e Treg de mulheres saudáveis - Checco, Giovana [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
Introdução: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez caracterizada por níveis plasmáticos elevados de citocinas pró-inflamatórias, como o fator de necrose tumoral (TNF) que desempenha papel importante na fisiopatologia da doença. A ligação de TNF com os receptores TNFR1 e TNFR2 ativa diferentes vias de sinalização; o TNFR1 é importante para o desenvolvimento de células T efetoras, enquanto o TNFR2 é predominantemente expresso por células T reguladoras CD4+/FoxP3+. Embora o desbalanço da relação Treg/Th17 já esteja bem descrito na PE, o entendimento da ação do TNF na modulação dos receptores TNFR1 e TNFR2 nas subpopulações de linfócitos T poderá trazer novos conhecimentos para a compreensão da resposta inflamatória sistêmica e o desbalanço das subpopulações de células T nessa patologia. Objetivos: Este estudo teve como objetivo avaliar a ação do TNF humano recombinante (hrTNF) na ativação de subpopulações de linfócitos T CD4+ de mulheres saudáveis não-grávidas pela indução de receptores de TNF na membrana dessas células. Sujeitos e Métodos: Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram obtidas de 10 mulheres saudáveis, não grávidas e cultivadas in vitro por 18 h na presença ou ausência de 20 pg/mL, 50 pg/mL e 100 pg/mL de hrTNF. Após o cultivo, a expressão de TNFR1 e TNFR2 foi determinada na membrana das células por citometria de fluxo. A concentração dos receptores solúveis de TNF (sTNFR1 e sTNFR2) foi determinada no sobrenadante da cultura dessas células pela técnica de ELISA. Os resultados foram analisados por testes não paramétricos com nível de significância de 5%. Resultados: O emprego de TNF recombinante, nas diferentes concentrações utilizadas, não induziu efeito tóxico sobre as células, nem apoptose, não interferindo com a viabilidade da cultura. O cultivo com hrTNF induziu expressão de TNFR1 tanto em células Th17 quanto Treg e de TNFR2 em células Treg, sendo o efeito mais evidente na concentração de 50 pg/mL. Entretanto, essa citocina mostrou efeito inibidor sobre a expressão de TNFR2 em células Th17. A determinação dos receptores sTNFR1 e sTNFR2 no sobrenadante das culturas estimuladas mostrou que o TNF induziu aumento das concentrações de sTNFR1, mas não modulou os níveis de sTNFR2 em relação à cultura controle, não estimulada. Conclusão: Os resultados obtidos mostram que o cultivo de linfócitos do sangue periférico de mulheres saudáveis com hrTNF em concentrações observadas no plasma de gestantes portadoras de PE induz a expressão de receptores de TNF por células Th17 e Treg. Entretanto, mais estudos devem ser realizados para compreender o mecanismo envolvido na expressão e liberação desses receptores.

Introduction: Preeclampsia (PE) is a pregnancy-specific syndrome characterized by elevated plasma levels of pro-inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor (TNF), which plays a key role in the pathophysiology of the disease. The binding of TNF to its receptors TNFR1 and TNFR2 activates different signaling pathways; TNFR1 is crucial for the development of effector T cells, whereas TNFR2 is predominantly expressed by CD4+/FoxP3+ regulatory T cells. Although the imbalance of the Treg/Th17 ratio is well described in PE, understanding TNF's role in modulating TNFR1 and TNFR2 receptors on T lymphocyte subpopulations could provide new insights into the systemic inflammatory response and the imbalance of T cell subpopulations in this pathology. Objectives: This study aimed to evaluate the action of recombinant human TNF (hrTNF) on the activation of CD4+ T lymphocyte subpopulations from healthy non-pregnant women by inducing TNF receptors on these cells membranes. Subjects and Methods: Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were obtained from 10 healthy, non-pregnant women and cultured in vitro for 18 hours in the presence or absence of 20 pg/mL, 50 pg/mL, and 100 pg/mL of hrTNF. After culture, the expression of TNFR1 and TNFR2 on cell membranes was determined by flow cytometry. The concentrations of soluble TNF receptors (sTNFR1 and sTNFR2) were measured in the culture supernatants using the ELISA technique. The results were analyzed using non-parametric tests with a significance level of 5%. Results: The use of recombinant TNF at the tested concentrations did not induce toxic effects or apoptosis in the cells, maintaining culture viability. Cultivation with hrTNF induced TNFR1 expression on both Th17 and Treg cells and TNFR2 expression on Treg cells, with the effect being more pronounced at 50 pg/mL. However, this cytokine exhibited an inhibitory effect on TNFR2 expression in Th17 cells. Determination of sTNFR1 and sTNFR2 receptors in the supernatant of stimulated cultures revealed that TNF increased sTNFR1 concentrations but did not modulate sTNFR2 levels compared to the unstimulated control culture. Conclusion: The results show that culturing peripheral blood lymphocytes from healthy women with hrTNF at concentrations observed in the plasma of PE-affected pregnant women induces TNF receptor expression on Th17 and Treg cells. However, further studies are needed to understand the mechanisms involved in the expression and release of these receptors.
Effect of tumor necrosis factor (TNF) on the activation and expression of receptors TNFR1 and TNFR2 by Th17 and Treg subsets from healthy women
Keywords: Pré-eclâmpsia; Linfócitos; TNF; Receptores de TNF; Citometria de fluxo