Comparação entre o uso de sutura e sutura associada ao selante de fibrina (CEVAP) na interação neuromuscular após Lesão Nervosa Periférica - Leite, Ana Paula Silveira [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2018)
Os nervos periféricos são comumente acometidos por lesões que acarretam interrupção do impulso nervoso. Dentre as causas mais comuns, estão: traumas, estiramento, pinçamento, compressão e esmagamento, resultando em comprometimento do sistema neuromuscular. A recuperação tanto morfológica quanto funcional após este tipo de lesão raramente é completa, sendo um desafio para clínica médica. A maior parte da literatura tem como foco o estudo da recuperação nervosa e muscular, havendo poucas referências em relação às junções neuromusculares (JNM). Além disso, outros procedimentos vêm sendo testados como uma forma de minimizar os danos causados pelo uso da sutura. Dentro desta proposta este estudo teve como objetivo avaliar o uso do selante de fibrina (CEVAP) associado ao número reduzido de pontos (1 ponto), quando comparado a sutura convencional (3 pontos), após lesão do nervo isquiático. Foram utilizados 36 ratos Wistar machos adultos, divididos em 4 grupos experimentais: Controle (C), Desnervado (D); Sutura (S) e Sutura + Selante de Fibrina (SFS). No grupo C, foi realizada apenas incisão superficial no antímero direito, afastamento da musculatura e localização do nervo isquiático. No grupo D foi realizada neurotmese do nervo isquiático (gap de 6 mm). No grupo S foi realizada transecção completa do nervo isquiático direito e após 7 dias foi efetuada anastomose epineural do mesmo. No grupo SFS, a reconstrução nervosa foi realizada com um ponto de sutura, seguida da aplicação do selante de fibrina CEVAP (Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos) - UNESP – Botucatu. Antes da realização dos procedimentos cirúrgicos e nos 15°, 30°e 60° dia após a secção e sepultamento nervoso foi realizada análise no Catwalk de todos os animais de acordo com os grupos experimentais. Decorrido o período experimental (60° dia) os animais foram anestesiados para análise eletroneuromiografica e a seguir eutanasiados. Os nervos isquiáticos, ramos musculares do nervo tibial para o músculo sóleo e os músculos sóleos dos antímeros direitos, foram coletados e submetidos a: a) análise morfológica (esterase inespecífica) e morfométrica das JNMs através de microscopia de luz e de transmissão; b) análise morfológica e morfométrica das fibras musculares (HE); c) frequência dos tipos de fibra muscular (Fast e Slow); c) quantificação da porcentagem de colágeno no tecido muscular; d) expressão proteica: PaX7 e PCNA (Western Blotting); e) análise morfológica e morfométrica dos nervos(tetróxido de ósmio). As análises eletroneuromiográficas revelaram que os valores de amplitude e latência dos grupos S e SFS foram semelhantes entre si, sendo indicativos de regeneração. As análises do Catwalk indicaram que houve déficit funcional em todos os grupos lesão (D, S e SFS), ao final do período experimental. A análise morfológica do ramo muscular do nervo tibial mostrou que os grupos S e SFS se aproximaram do C, e os valores da razão G se mantiveram dentro do padrão de normalidade. A mesma análise no nervo isquiático mostrou valores superiores referentes á área e diâmetro dos axônios e fibras nervosas no grupo SFS em relação ao grupo S, com todos os grupos apresentando também a razão G dentro da faixa de normalidade. Nos grupos S e SFS houve aumento do peso muscular, da área das fibras musculares e diminuição da porcentagem de colágeno em relação ao grupo D. Nas JNMs houve restabelecimento dos botões sinápticos e indicativo de aumento da área das mesmas. Houve aumento da frequência de fibras Fast nos grupos lesão, havendo também presença de “type grouping” nos mesmos. A quantificação das proteínas PaX7 e PCNA não mostrou diferença entre os grupos. Os resultados do nosso estudo permitiram concluir que houve um restabelecimento do impulso nervoso, além da regeneração axonal, que foi tão eficiente no grupo SFS quando comparado ao grupo S, com valores superiores no grupo SFS na área da lesão (nervo isquiático). Sendo indicativo de um efeito protetor no local da lesão devido ao uso de selante de fibrina heterólogo. Pode-se considerar que o uso deste selante permite a diminuição do número de pontos reduzindo o trauma causado pela agulha, e acelerar a prática cirúrgica. Portanto, o selante de fibrina heterólogo deve ser considerado na reconstrução nervosa após a lesão do nervo periférico.

Peripheral nerves are commonly affected by injuries that lead to interruption of the nerve impulse. Among the most common causes are: trauma, stretching, pinching, compression and crushing, resulting in impairment of the neuromuscular system. Both morphological and functional recovery after this type of injury is rarely complete and a challenge for medical practice. Most of the literature focuses on the study of nerve and muscle recovery, with few references to neuromuscular junctions (NMJs). In addition, other procedures have been tested as a way to minimize the damages caused by the use of suture. The aim of this study was to evaluate the use of fibrin selant (CEVAP) associated to reduced number of stitches (1 point) when compared to conventional suture (3 stitches) after ischiatic nerve injury. Thirtysix male adult Wistar rats were divided into four experimental groups: Control (C), Desnervate (D), Suture (S) and Suture + Fibrin Sealant (SFS). In group C, an only superficial incision was made in the right antimer, followed by distance from the musculature and location of the ischiatic nerve. In group D, ischiatic nerve neurotmesis (6 mm gap) was performed. In group S, a complete transection of the right ischiatic nerve was carried out and after 7 days an epineural anastomosis of the ischiatic nerve was performed. In the SSF group, the nerve reconstruction was performed with one suture point, followed by the application of CEVAP fibrin sealant (Unesp- Botucatu Center for the Study of Venoms and Venomous Animals). Before the surgical procedures and at the 15th, 30th and 60th day after sectioning and nervous burial, Catwalk analysis of all animals was made according to the experimental groups. After the experimental period (60th day) the animals were anesthetized for electromyography and then euthanized. The ischiatic nerves and the tibial nerve-muscle branch to the soleus muscle and the right antimer of soleus muscle were collected and submitted to a) morphological (non-specific esterase) and morphometric analysis of NMJs by light and transmission microscopy; b) morphological and morphometric analysis of muscle fibers (HE); c) quantification of the percentage of collagen in muscle tissue (Picrossirius Red); d) protein expression: PaX7 and PCNA (Western Blotting); e) morphological and morphometric analysis of the nerves (osmium tetroxide). Electromyography analyzes revealed that the amplitude and latency values of the S and SFS groups were similar to each other and were indicative of regeneration. Catwalk analysis indicated that there was a functional déficit in all groups presenting injury (D, S and SFS) at the end of the experimental period. The morphological analysis of the tibial nerve-muscle branch showed that the S and SFS showed to be similar to C group, and the G ratio remained within the normal range. The same analysis in the sciatic nerve showed higher values referring to the area and diameter of the axons and nerve fibers in the SFS group in relation to the S group, with all groups also presenting the G ratio within the normal range. In the S and SFS groups there was an increase in muscle weight, in the area of muscle fibers and a decrease in the percentage of collagen in relation to group D. In the NMJs there was a reestablishment of the terminal boutons and an indication of an increase in its area. There was an increase in the frequency of Fast fibers in the lesion groups, and there was a type grouping pattern of distribution in them as well. Quantification of the PaX7 and PCNA proteins showed no difference between the groups. Our study results allowed us to conclude that there was a reestablishment of the nerve impulse, in addition to axonal regeneration, which was as efficient in the SFS group when compared with the S group, with superior values in the SFS in the lesion area (ischiatic nerve). It is an indicative of a protective effect at the lesion site due to the heterologous fibrin sealant use. It can be considered that the decrease in the number of stitches is able to reduce the trauma caused by the needle, as well as accelerating the surgical practice. So the heterologous fibrin sealant used in nerve reconstruction should be considered after peripheral nerve injury.
Comparison between the use of suture and suture associated with fibrin sealant (CEVAP) in the neuromuscular interaction after Peripheral Nerve Injury
Keywords: Selante heterólogo de fibrina; Junção Neuromuscular; Lesão Nervosa Periférica