Influência de marcadores de hipóxia e da síntese de óxido nítrico no processo hemolítico em anemia falciforme (Hb SS) e malária por Plasmodium vivax. - Nascimento, Patricia Pereira do [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2018)
A hemólise, processo caracterizado pela degradação de eritrócitos senescentes ou defeituosos, pode estabelecer-se de modo fisiopatológico em diferentes doenças. A ruptura do eritrócito com consequente liberação da hemoglobina (Hb) plasmática, desencadeia eventos como hipóxia e a diminuição da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO), os quais influenciam no estabelecimento de manifestações clínicas em doenças hemolíticas. Apesar das distintas etiologias, o processo de hemólise está presente tanto entre os eventos fisiopatológicos da anemia falciforme (AF), uma anemia hemolítica caracterizada por hemólise crônica e fenótipos heterogêneos entre os indivíduos; quanto na malária por Plasmodium vivax (P. vivax), uma parasitose que apresenta, durante o ciclo intra-eritrocítico da doença, episódios de hemólise aguda. Assim, nosso objetivo foi avaliar a associação de marcadores bioquímicos e genéticos, envolvidos com as vias hemolíticas e da hipóxia, com o estabelecimento de diferentes perfis etiológicos de hemólise. Para isso, o grupo de estudo foi formado por indivíduos de ambos os gêneros, sendo 300 indivíduos com AF e 119 indivíduos com malária por P. vivax. O perfil hemolítico nesses indivíduos foi estabelecido por meio de parâmetros hematológicos e hemolíticos, comumente utilizados na rotina laboratorial. As relações entre os marcadores de hemólise, e desses com os níveis de hemoglobina plasmática (Hb plasmática), utilizada no estudo como marcador específico de hemólise intravascular, e com a proteína HIF1A, utilizada como marcador de hipóxia, foram também estabelecidas. Os marcadores genéticos foram investigados por meio da a associação entre o SNP rs7203560 do gene NPRL3, a VNTR rs61722009 (4a4b) e o SNP rs1799983 (894G>T) do gene eNOS, com o perfil hemolítico, além da associação do SNP rs11549465 (1772C<T) do gene HIF1A, com o perfil hipóxico. Os resultados mostraram diferentes relações entre os marcadores para cada grupo de estudo. Nos indivíduos com AF, embora os marcadores de hemólise (Ret. Rel, Ret. Abs, LDH, AST e BI) estivessem correlacionados entre si, nenhum deles esteve relacionado com os níveis de Hb plasmática. Correlações positivas foram observadas entre LDH e os outros marcadores, sendo essa, a única enzima relacionada, embora negativamente, com os valores de HIF1A. Nos indivíduos com malária, os marcadores hemolíticos (AST e BI) não estiveram correlacionados entre si, mas sim com a Hb plasmática, sugerindo maior influência da hemólise intravascular no perfil hemolítico dos indivíduos com malária do nosso grupo de estudo. Quanto as mutações investigadas como marcadores genéticos, apenas o SNP rs1799983 (894G>T) do gene eNOS apresentou maior frequência genotípica e alélica, sendo o alelo (T) assim como o genótipo homozigoto mutante (TT), mais frequente entre os indivíduos com AF. Esse SNP também esteve relacionado com o perfil hemolítico em ambos os grupos de estudo, uma vez que os indivíduos com AF e malária, com genótipos GG e GT, apresentaram aproximadamente 1,3 vezes mais Hb plasmática. A mutação VNTR rs61722009 (4a4b), também do gene eNOS, esteve relacionada com o perfil hemolítico apenas nos indivíduos com AF, sendo níveis de Hb plasmática 1,2 vezes menores no grupo de indivíduos com genótipos homozigoto mutante (4b4b). Assim, as diferentes relações dos marcadores bioquímicos e genéticos, com o perfil hemolítico e hipóxico dos indivíduos com AF e malária por P. vivax, evidenciam que as diferentes etiologias hemolíticas das doenças, devem ser consideradas para a caracterização do processo de hemólise. Por fim, os marcadores bioquímicos laboratoriais de hemólise, comumente adotados na rotina laboratorial para a caracterização do perfil hemolítico desses indivíduos, demonstraram ser importante biomarcadores para essas doenças.

Hemolysis, the process characterized by degradation of senescent or defective erythrocyte, may be established among the a physiopathological events in different diseases. Erythrocytes rupture and subsequent liberation of plasma hemoglobin (Hb) triggers events as hypoxia and declining of nitric oxide bioavailability (NO), which affect in the establishment of clinical manifestations in hemolytic diseases. Despite the distinct etiologies, the hemolysis process as occurs among the physiopathological events of sickle cell anemia (SCA), which is a hemolytic anemia characterized by chronic hemolysis and heterogenic phenotypes among individuals; as in Plasmodium vivax (P. vivax), malaria a parasitosis which presents, during the disease intra-erytrocytic phase of the parasite cycle, events of acute hemolysis. Thus, the aim of this work was to evaluate the association of biochemical and genetic markers involved in hemolytic and hypoxia pathways, with the stablishing the hemolytic profile of diseases with different hemolysis etiological patterns. The study group were formed by patients of both gender, divided in 300 individuals with SCA and 119 individuals with P. vivax malaria. The hemolytic profile of these individuals was stablished by hematological and hemolytic parameters, commonly employed in laboratorial routine. Relations among hemolysis markers, and these with the plasma hemoglobin levels (plasma Hb), used in this study as specific marker of intravascular hemolysis, and with HIF1A protein, used as hypoxia marker, were stablished as well. The genetic markers were investigated by association between the SNP rs7203560 from NPRL3 gene, the VNTR rs61722009 (4a4b) and the SNP rs1799983 (894G>T) from eNOS gene, with the hemolytic profile, besides the association of SNP rs11549465 (1772C<T) from HIF1A gene, with the hypoxic profile. Results revealed different relations between markers for each study group: in individuals with SCA, despite hemolysis markers (Ret. Rel, Ret. Abs, LDH, AST and BI) were correlated among themselves, neither of them were related with plasmatic Hb levels. Positive correlations were observed among LDH and other markers, being this enzyme the only correlated, although negatively, with the HIF1A values. For individuals with malaria, hemolytic markers (AST and BI) were not correlated among themselves, but with plasmatic Hb, suggesting higher influence of intravascular hemolysis in the hemolytic profile from individuals of this study group. Regarding to the investigated mutations as genetic markers, only SNP rs1799983 (894G>T) from eNOS gene presented higher genotypic and allelic frequency, being the allele (T), as well as the mutant homozygote genotype (TT), more frequent among individuals with SCA. This SNP was also related with the hemolytic profile in both study groups, when SCA and malaria individuals with genotypes GG and GT presented 1.3 times more plasma Hb. The VNTR rs61722009 (4a4b) mutation, also from eNOS gene, was related only with hemolytic profile of individuals with SCA, being the plasma Hb level 1.2 times lower in individuals with mutant homozygote genotype (4b4b). Thus, the different relations of biochemical and genetic markers, with hemolytic and hypoxic profiles of individuals with SCA and P. vivax malaria, evidence that the different hemolytic etiology diseases must be considered for the characterization of hemolysis process. That way, biochemical markers of hemolysis, commonly adopted in laboratorial routine for characterization of hemolytic profile from these individuals, demonstrated to be valuable biomarkers for these diseases.
Influence of hypoxia markers and nitric oxide synthesis on the hemolytic process in sickle cell anemia (Hb SS) and Plasmodium vivax malaria individuals
Keywords: Doenças hemolíticas; Malária por Plasmodium vivax; Hemólise intravascular; Marcadores genéticos; Hemolytic diseases; Plasmodium vivax malaria; Intravascular hemolyses; Genetic markers