Estudo in vitro da ação do composto Berbamina como antiviral contra o MAYV - Sanches, Bruna Cheregatti [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
O vírus Mayaro (MAYV) é um arbovírus que pertence ao gênero Alphavírus (família Togaviridae) e ocasiona uma doença viral emergente negligenciada transmitida por vetores artrópodes. O aumento crescente no número de casos pelo MAYV pode estar associado a determinantes socioambientais, como as mudanças climáticas onde os vetores se adaptam a novas condições ambientais, o processo de urbanização desenfreada e o desmatamento que ocasiona a saída desses mosquitos de seu habitat natural e a entrada dos vetores em regiões urbanas. Até o presente momento não se tem antiviral específico contra o MAYV e o indivíduo com a doença causada por esse vírus apresenta sintomas como a artralgia que podem se tornar debilitantes e apenas o tratamento para os sintomas clínicos é recomendado. No cenário dos antivirais, as plantas medicinais, utilizadas há milênios no tratamento e prevenção de doenças, oferecem uma alternativa mais econômica e simples, ao passo que se encontram acessíveis na natureza. Nesse sentido, o objeto de estudo deste projeto é o alcalóide Berbamina (BBM), extraído das raízes da planta Berberis amurensis, que foi recentemente estudada contra Alfavírus como o CHIKV e o SINV, e, o objetivo deste projeto consiste em analisar a atividade antiviral da Berbamina in vitro contra o ciclo de replicação do MAYV. Para isto foram utilizadas células BHK-21 e os compostos utilizados nos ensaios antivirais consistiram no Dicloridrato de Berbamina e o galato de (-)-epigalocatequina (EGCG) como controle positivo. O vírus utilizado foi o plasmídeo MAYV CMV NLuc. A citotoxicidade foi determinada a partir do método de MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) em concentrações que variaram de 200 μM a 1,562 μM no período de incubação de 24 horas. Para a análise do efeito do composto BBM contra o ciclo replicativo do MAYV, foi adicionado o MAYV CMV NLuc a um MOI 0,1 juntamente a máxima concentração não tóxica estabelecida. Por fim, foi realizado o ensaio de dose dependência a qual concentrações que variaram de 200 μM a 1,562 μM foram incubadas juntamente ao MAYV CMV NLuc a um MOI 0,1. As análises estatísticas dos ensaios foram realizadas no software GraphPad Prism 8.0. Como resultado o composto demonstrou baixa toxicidade às células, efeito antiviral satisfatório contra o ciclo replicativo do MAYV e comportamento dose-dependente. A partir dos resultados obtidos, o dicloridrato de berbamina apresenta potencial anti-MAYV promissor, sendo um composto excelente para mais pesquisas futuras.

Mayaro virus (MAYV) is an arbovirus that belongs to the Alphavirus genus (Togaviridae family) and causes a neglected emerging viral disease transmitted by arthropod vectors. The increasing number of cases of MAYV may be associated with socio-environmental determinants, such as climate change, where vectors adapt to new environmental conditions, the process of unbridled urbanization and deforestation that causes these mosquitoes to leave their natural habitat and vectors to enter urban areas. To date, there is no specific antiviral against MAYV, and individuals with the disease caused by this virus present symptoms such as arthralgia that can become debilitating, and only treatment for clinical symptoms is recommended. In the scenario of antivirals, medicinal plants, used for millennia in the treatment and prevention of diseases, offer a more economical and simple alternative, as they are available in nature. In this sense, the object of study of this project is the alkaloid Berbamine (BBM), extracted from the roots of the plant Berberis amurensis, which has been recently studied against Alphaviruses such as CHIKV and SINV, and the objective of this project is to analyze the antiviral activity of Berbamine in vitro against the replication cycle of MAYV. For this, BHK-21 cells were used and the compounds used in the antiviral assays consisted of Berbamine Dihydrochloride and (-)-epigallocatechin gallate (EGCG) as a positive control. The virus used was the MAYV CMV NLuc plasmid. Cytotoxicity was determined using the MTT method (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) at concentrations ranging from 200 μM to 1.562 μM in the 24-hour incubation period. To analyze the effect of the BBM compound against the MAYV replicative cycle, MAYV CMV NLuc was added at an MOI of 0.1 together with the maximum established non-toxic concentration. Finally, the dose-dependence assay was performed in which concentrations ranging from 200 μM to 1.562 μM were incubated together with MAYV CMV NLuc at an MOI of 0.1. Statistical analyses of the assays were performed using GraphPad Prism 8.0 software. As a result, the compound demonstrated low toxicity to cells, satisfactory antiviral effect against the MAYV replicative cycle and dose-dependent behavior. From the results obtained, berbamine dihydrochloride shows promising anti-MAYV potential, being an excellent compound for further future research.
In vitro study of the action of the compound Berbamine as an antiviral against MAYV
Keywords: Arboviroses; Virologia; Biotecnologia; Agentes antivirais; Biotechnology; Dihydrochloride Berbamine; Viral Inhibition; Mayaro