Avaliação da função de células endoteliais frente a inibição do inflamasoma NLRP3 em modelo in vitro de pré-eclâmpsia - Santos, Karoliny Nunes [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
A pré-eclâmpsia (PE) é uma doença gestacional multissistêmica, caracterizada por hipertensão arterial, proteinúria e disfunção de órgãos alvo. O conjunto de sintomas e consequências desta patologia podem gerar diversas complicações, como prejuízo ao desenvolvimento neurológico fetal, diminuição da expectativa de vida da mãe e aumento do risco de desenvolvimento de diversas doenças, entre elas doenças cardiovasculares, acidente vascular cerebral e diabetes, tornando-a uma das principais causas de morte materna e fetal no Brasil e no Mundo. Uma das possíveis causas dessa patologia é a disfunção generalizada do endotélio materno, que altera diversas características adaptativas da placenta, como sua resposta imune controlada ao feto, mudanças no fluxo sanguíneo, entre outras adaptações próprias da gestação. Essas mudanças são geralmente mediadas por fatores liberados pela placenta, que uma vez desregulados causam as mais variadas disfunções, como a inflamação sistêmica. Apesar de diversas pesquisas associarem as principais causas da PE à disfunção placentária/endotelial, ainda são necessários estudos para entender mais profundamente a fisiopatologia da doença, auxiliando na busca por prevenções e tratamentos. O presente projeto teve como objetivo avaliar a ação farmacológica de inibidores do inflamassoma NLRP3 em modelo in vitro de PE e as relações com biomarcadores de disfunção endotelial e morte celular. Para isso, foram realizados ensaios com células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) incubadas com plasma de gestantes saudáveis (GS) e gestantes com PE, juntamente com o uso dos inibidores de NLRP3, MCC950 (MCC) e Glibenclamida (GB). As funções das células endoteliais foram analisadas através de ensaios para avaliação da permeabilidade, morte celular por autofagia e piroptose e angiogênese. Os resultados foram avaliados por testes paramétricos ou não paramétricos, dependendo de sua variabilidade, sendo adotado o nível de significância de p<0,05. Este estudo possibilitou melhor elucidação das relações entre inflamação e disfunção endotelial na PE, mostrando que o plasma de PE pode induzir piroptose, pelo aumento de IL-1β e caspase-1, além de aumento permeabilidade endotelial por redução de VE- aderina. Inibidores do NLRP3, MCC e GB, demonstraram eficácia em reverter esses efeitos, podendo restaurar a saúde endotelial. Assim, o presente trabalho amplia o entendimento sobre o papel inflamatório do NLRP3 na PE e propõe estratégias terapêuticas promissoras para esta patologia.

Preeclampsia (PE) is a multisystem gestational disease characterized by high blood pressure, proteinuria, and target organ dysfunction. The set of symptoms and consequences of this pathology can lead to several complications, such as impaired fetal neurological development, decreased maternal life expectancy, and increased risk of developing several diseases, including cardiovascular disease, stroke, and diabetes, making it one of the main causes of maternal and fetal death in Brazil and worldwide. One of the possible causes of this pathology is the generalized dysfunction of the maternal endothelium, which alters several adaptive characteristics of the placenta, such as its controlled immune response to the fetus, changes in blood flow, among other adaptations typical of pregnancy. These changes are generally mediated by factors released by the placenta, which, when unregulated, cause a wide range of dysfunctions, such as systemic inflammation. Although several studies associate the main causes of PE with placental/endothelial dysfunction, studies are still needed to understand the pathophysiology of the disease in greater depth, helping in the search for prevention and treatments. The present project aimed to evaluate the pharmacological action of NLRP3 inflammasome inhibitors in an in vitro model of PE and their relationships with biomarkers of endothelial dysfunction and cell death. For this purpose, assays were performed with human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) incubated with plasma from healthy pregnant women (GS) and pregnant women with PE, together with the use of NLRP3 inhibitors, MCC950 (MCC) and Glibenclamide (GB). The functions of endothelial cells were analyzed through assays to evaluate permeability, cell death by autophagy and pyroptosis and angiogenesis. The results were evaluated by parametric or nonparametric tests, depending on their variability, adopting a significance level of p<0.05. This study allowed better elucidation of the relationships between inflammation and endothelial dysfunction in PE, showing that PE plasma can induce pyroptosis, by increasing IL-1β and caspase-1, in addition to increasing endothelial permeability by reducing VE-cadherin. NLRP3 inhibitors, MCC and GB, have shown efficacy in reversing these effects, being able to restore endothelial health. Thus, the present work expands the understanding of the inflammatory role of NLRP3 in PE and proposes promising therapeutic strategies for this pathology.
Evaluation of endothelial cell function against NLRP3 inflammasome inhibition in an in vitro model of preeclampsia
Keywords: Pré-eclâmpsia; NLRP3; HUVEC; Disfunção endotelia