Biópsias testiculares em série frequentes com agulha tru-cut permitem avaliação do perfil transcricional sem efeitos adversos em carneiros - Pupulim, Antônio Guilherme Roncada [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022)
Os testículos são os órgãos responsáveis pela produção e secreção de esteroides sexuais masculinos e espermatozoides. As gônadas, localizadas na bolsa escrotal, são ligadas ao corpo pelo funículo espermático. Os mecanismos de termorregulação, são controlados pelo sistema nervoso autônomo, que atua sobre as glândulas sudoríparas e túnica dartos na bolsa escrotal, cone vascular e músculo cremaster. Internamente à bolsa escrotal, encontra-se a túnica vaginal parietal, que reveste o escroto, e a visceral, revestindo os testículos e epidídimos. Envolvendo completamente os testículos, a túnica albugínea invade o parênquima gonadal e o divide em lóbulos, onde encontramos os túbulos seminíferos, local de produção dos espermatozoides, que são conduzidos e armazenados no epidídimo, sofrendo o processo de maturação. Na maturidade sexual, os túbulos seminíferos correspondem a 84% do peso testicular, sendo esse representado pela circunferência escrotal, critério utilizado para a seleção de reprodutores. Nos carneiros, a espermatogênese, evento cíclico que culmina na formação dos espermatozoides, dura aproximadamente 47 dias. Histologicamente, os túbulos seminíferos são divididos em compartimento tubular, composto pelas células germinativas e as de Sertoli, além do compartimento intersticial, onde são encontradas às células de Leydig, produtoras de testosterona. A avaliação andrológica afere o potencial reprodutivo masculino e avalia a condição física, qualidade espermática, libido e as características morfológicas do sistema reprodutor. Por permitir a análise ultrassonográfica da histomorfologia testicular, a ultrassonografia tem sido usada como ferramenta complementar ao exame andrológico. O uso da biópsia testicular fornece informações as quais auxilia no prognóstico das funções reprodutivas. Entretanto, são poucos os estudos que detalharam os procedimentos pré- e pós-biópsia voltados a garantir a integridade funcional testicular. Além disso, não há relatos da realização de biópsias sequenciais em pequeno intervalo de tempo. O objetivo deste trabalho foi apresentar as alterações testiculares ao longo do desenvolvimento, principais métodos de avaliação andrológica e testicular, bem como avaliar os efeitos de biópsias sequenciais na qualidade espermática, ultrassonografia e análise dos transcritos. Foram realizadas biopsias testiculares com agulha 16 G Tru-cut em seis carneiros Santa Ines x Dorper, nos momentos 0, 3, 6, 12, 24 e 48 h. Antes do primeiro procedimento os carneiros receberam uma aplicação de benzilpenicilina benzatina (30,000 IU/kg IM) e flunixin meglumine (1.1 mg/kg, uma aplicação ao dia por 3 d). Antes de cada biópsia, realizava aplicação de botão anestésico com 1 ml de lidocaína 2% e antissepsia da pele da bolsa escrotal. Imediatamente após cada biópsia, foi aplicado pressão digital (> 5 min) seguido de compressa de gelo (10 min). As amostras testiculares foram analisadas pelo RT-q PCR para quantificação de transcritos envolvidos na inflamação aguda (TNFα, IL-1), estresse oxidativo (GPX1, SOD2, HSP70) e esteroidogênese (STAR). A coleta de sêmen foi realizada 3 dias antes e 28 dias após a primeira biópsia. As avaliações ultrassonográficas foram realizadas 5 dias após a primeira biopsia e a cada 4 dias até completar 21 dias. Não houve diferença (P > 0,05) nas características do perfil transcricional, seminais e ultrassonográficas. Além disso, não foram encontrados sinais de dor, aumento da temperatura, inchaço ou sangramento até 28 dias. Portanto, biopsias testiculares não causaram alterações inflamatórias macroscópicas na bolsa escrotal e testículos, não afetaram as caraterísticas seminais e ultrassonográficas do parênquima testicular e não alteram o perfil testicular transcricional de genes envolvidos na inflamação, estresse oxidativo e esteroidogênese.

The testes are responsible for the production and secretion of male sex steroids and sperm. The gonads, located in the scrotum, are connected to the body by the spermatic cord. The autonomic nervous system controls the thermoregulation mechanisms, which act on the sweat glands and dartos tunic in the scrotum, vascular cone, and cremaster muscle in the spermatic cord. Internally to the scrotum is the parietal vaginalis tunic, which covers the scrotum, and the visceral vaginal tunic, which covers the testes and epididymis. Completely enveloping the testes, the tunica albuginea invades the gonadal parenchyma and divides it into lobules, where we find the seminiferous tubules, site of sperm production, which are carried and stored in the epididymis, undergoing the maturation process. In an adult ram, the seminiferous tubules correspond to 84% of the testicular weight and the spermatogenesis lasts approximately 47 days. Histologically, the seminiferous tubules are divided into a tubular compartment, composed of the germ and Sertoli cells, and an interstitial compartment, where the Leydig cells, which produce testosterone, are found. Andrological evaluations are performed to determine the male reproductive potential. They consist of a general physical examination and assessment of sperm quality, libido, and morphological characteristics of the reproductive system. This evaluation can be complemented by the ultrasound analysis of testicular parenchyma and testicular biopsies. Despite their use, there are few studies detailing the safety strategies pre and post biopsies and the effects of sequential testicular biopsies performed in a short time interval. This study aimed to review the main testicular developmental changes and methods of assessment of testicular function and the effects of sequential biopsies on sperm quality and testicular ultrasound appearance, and testicular transcripts. Testicular biopsies were performed with a 16 G Tru-cut needle in six Santa Ines x Dorper rams at 0, 3, 6, 12, 24, and 48 h. Before the first procedure, rams received benzathine benzylpenicillin (30,000 IU/kg IM) and flunixin meglumine (1.1 mg/kg, daily for 3 d). Before each biopsy, antisepsis of the skin of the scrotum was performed and an anesthetic button was applied with 1 ml of 2% lidocaine. Immediately after each biopsy, digital pressure was applied (> 5 min), followed by an ice pack (10 min). Testicular tissues samples were analyzed by RT-q PCR to quantify transcripts related to acute inflammation (TNFα, IL-1), oxidative stress (GPX1, SOD2, HSP70), and steroidogenesis (STAR). Semen collection was performed 3 days before and 28 days after the first biopsy. Ultrasound evaluations were performed 5 days after the first biopsy and then every 4 days until 21 days. There was no difference (P > 0.05) in transcriptional, seminal and ultrasonographic profile characteristics. In addition, no signs of pain, increased temperature, swelling or bleeding were found for up to 28 days. Therefore, sequencial testicular biopsies did not cause macroscopic inflammatory changes in the scrotum and testes, no affected seminal and ultrasound characteristics and not altered the testicular transcriptional profile of genes involved in inflammation, oxidative stress, and steroidogenesis
Serial frequent Tru-cut testicular biopsies in rams enable assessment of transcriptional profile without acute adverse effects
Keywords: Desenvolvimento; Gônadas; Andrologia; Ultrassonografia; Expressão gênica; Biópsias