Identificação de Candida spp. em próteses totais por um método molecular - Bonani, Abraão [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
A estomatite protética (EP) é uma doença inflamatória crônica da mucosa palatina associada a Candida spp. O diagnóstico da EP é feito clinicamente sem levar em consideração a presença de Candida spp. Métodos de cultura e ensaios bioquímicos são usados para detecção de Candida spp. em amostras clínicas, e algumas investigações relatam o uso de métodos moleculares para detectar espécies fúngicas recuperadas de infecções, como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) associada à curva de melting (CM). No entanto, até onde sabemos, nenhum outro estudo relatou o uso desse método para identificação de Candida spp. em próteses totais. Assim, neste estudo utilizamos PCR-CM para identificação de Candida spp. em próteses totais e possível diagnóstico de EP. Amostras microbiológicas foram coletadas de pacientes com e sem EP (n = 20 cada) e culturas em meios de cultura específicos, isolamento de DNA e PCR-CM. Cepas de ATCC foram submetidas aos mesmos procedimentos e utilizadas como referência para identificação, bactérias e DNA de mamíferos foram utilizados como controles. Quando a identificação das amostras clínicas por PCR-CM não foi possível, as colônias cultivadas das amostras clínicas foram submetidas aos mesmos métodos moleculares. A concordância entre a identificação presuntiva por CHROMAgar Candida e PCR-CM foi realizada pelo índice kappa de Cohen (k) e os parâmetros de diagnóstico (sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos) foram determinados. PCRCM identificou diretamente de amostras clínicas 11, 10 e 4 espécies de C. albicans (Ca), C. glabrata (Cg) e C. tropicalis (Ct), com sensibilidade de 100% para Ca e Ct e especificidade de 100% para Cg. O CHROMAgar Candida demonstrou que 35% das colônias de cada grupo eram verdes, presumivelmente identificadas como Ca ou C. dubliniensis (Cd), e a PCR-CM identificou 11 amostras clínicas (9 Ca e 2 Ct). No entanto, não foi possível identificar diretamente 5 e 4 amostras clínicas identificadas presuntivamente como Ca e Ct e amostras com espécies mistas. A identificação de colônias dessas amostras clínicas submetidas à PCR-CM identificou 22 amostras como Ca, Cg, Ct e Cd, mas 7 amostras (1 espécie única e 6 espécies mistas) ainda não foram identificadas. A concordância foi substancial (k=0,826) entre os métodos, sendo que o CHROMAgar Candida apresentou sensibilidade de 100% para Ca e especificidade de 100% para Ct e 97% para Cg. Como conclusão, PCR-CM foi uma ferramenta potencial para identificação de Ca e Ct de próteses sem cultivo prévio, enquanto amostras com Cg, Cd e espécies mistas necessitaram de cultivo prévio ao PCR-CM.

Denture stomatitis (DS) is a chronic, inflammatory disease of the palatal mucosa associated to Candida spp. The diagnosis of DS is performed clinically without taking into consideration the presence of Candida spp. Culture methods and biochemical assays are used for detection of Candida spp. in clinical samples, and some investigations report the use of molecular methods to detect fungal species recovered from infections, such as the Polymerase Chain Reaction (PCR) associated with melting curve (MC). However, to the best of our knowledge, no other study reported the use of this method for Candida spp. identification in complete dentures. Thus, in this study we used PCR-MC for identification of Candida spp. in complete dentures and possible diagnosis of DS. Microbiological samples were collected from patients with and without DS (n = 20 each) and cultures in specific culture media, DNA isolation, and PCR-MC. ATCC strains were submitted to the same procedures and used as reference for identification, and bacteria and mammalian DNA were used controls. When the identification of clinical samples by PCR-MC was not possible, the colonies cultivated from the clinical samples were submitted to the same molecular methods. The concordance between the presumptive identification by CHROMAgar Candida and PCR-MC was performed by Cohen’s kappa index (k) and the diagnosis parameters (sensitivity, specificity, positive and negative predictive values) were determined. PCRMC identified directly from clinical samples 11, 10 and 4 species of C. albicans (Ca), C. glabrata (Cg) and C. tropicalis (Ct), with sensitivity of 100% for Ca and Ct and 100% specificity for Cg. The CHROMAgar Candida demonstrated that 35% of colonies from each groups were green, presumptively identified as Ca or C. dubliniensis (Cd), and PCR-MC identified 11 clinical samples (9 Ca and 2 Ct). However, it was not possible to identify directly 5 and 4 clinical samples presumptively identified as Ca and Ct and samples with mixed species. The identification of colonies from these clinical samples submitted to PCR-MC identified 22 samples as Ca, Cg, Ct, and Cd, but 7 samples (1 single-species and 6 mixed-species) were not identified yet. The concordance was substantial (k=0.826) between the methods, and CHROMAgar Candida showed sensitivity of 100% for Ca and specificity of 100% for Ct and 97% for Cg. As conclusion, PCR-MC was a potential tool for identification of Ca and Ct from dentures without previous cultivation, while samples with Cg, Cd, and mixed-species required cultivation previous to PCR-MC.
Identification of Candida spp. in complete dentures by a molecular method
Keywords: Candidíase; Reação em cadeia da polimerase; Estomatite sob prótese; Candidiasis; Polymerase chain reaction; Stomatitis denture