Estudo de antagonismo fúngico de extratos de culturas de Candida spp. e Trichophyton spp. contra agentes de onicomicoses - Lemes, Thiago Henrique (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
Onicomicoses são infecções de unhas causadas principalmente por fungos dermatófitos, seguidos de leveduras e fungos filamentosos não dermatófitos (FFNDs). Caracterizam-se por condições clínicas persistentes, de terapêutica prolongada com altas taxas de recorrência, sendo as infecções mistas, responsáveis por quadros de recorrência e recalcitrância. Adicionalmente, o escasso arsenal antifúngico utilizado para o tratamento e a mudança no perfil de suscetibilidade dos agentes etiológicos tem contribuído para o difícil controle das onicomicoses. O presente estudo avaliou a atividade antifúngica dos extratos obtidos de culturas puras e mistas entre dermatófitos e Candida parapsilosis contra linhagens de Trichophyton rubrum e T. mentagrophytes. Foram realizados ensaios de toxicidade, in vivo, com Galleria mellonella, do efeito combinatório dos extratos com fármacos itraconazol, fluconazol e terbinafina, da cinética de morte com ensaio Time kill, investigação de ação dos extratos sobre parede ou membrana além da determinação do perfil químico dos extratos através da técnica de FTIR (infravermelho transformada de Fourier). O antagonismo foi determinado através dos ensaios de microdiluição com resultados de valores de concentração inibitória mínima (CIM) entre 250 e 8000 µg/mL contra as cepas de dermatófitos e leveduras. Na cinética de morte microbiana, as atividades dos extratos resultaram em dados de completa inibição de dermatófitos em 48 horas, comparando-se aos controles. O efeito combinatório dos extratos de cultura com os antifúngicos demonstrou sinergismo, com decréscimo nos valores de CIM: fluconazol de 2 para 0.25 µg/mL; itraconazol de 0.25 para 0.03 µg/mL; terbinafina de 0.01 para 0.002 µg/mL; e extratos de 4000 para 1.9 µg/mL. A estrutura alvo de ação dos extratos foi a membrana citoplasmática fúngica. Os ensaios de toxicidade dos extratos com Galleria mellonella foram negativos. Pode-se inferir que os extratos de cultura obtidos a partir de linhagens clínicas de Candida parapsilosis e dermatófitos, apresentam notáveis metabólitos bioativos atóxicos, capazes de inibir fungos patogênicos, abrindo novas perspectivas terapêuticas.

Onychomycosis is a nail infection caused mainly by dermatophyte fungi, followed by yeasts and non-dermatophyte filamentous fungi (FFNDs). These infections are characterized by persistent clinical conditions, prolonged therapy with high recurrence rates, and mixed infections that are responsible for recalcitrance. Additionally, the scarce arsenal of antifungal therapies used for the treatment and the change in the susceptibility profile of the etiological agents have contributed to the complex control of onychomycosis. The present study evaluated the antifungal activity of extracts from pure and mixed cultures between dermatophytes and Candida parapsilosis against Trichophyton rubrum and T. mentagrophytes strains. Toxicity assays, in vivo, with Galleria mellonella, the combinatorial effect of extracts with the drugs itraconazole, fluconazole, and terbinafine, the time of death with the Time kill assay, an investigation of the action of the extracts on the wall or membrane, in addition to determining the chemical profile using the FTIR technique (infrared Fourier transform), were performed. Antagonism was determined through microdilution assays with minimum inhibitory concentration (MIC) values between 250 and 8000 µg/mL against dermatophyte and yeast strains. In the kinetics of microbial death, the activities of the extracts resulted in data of complete inhibition of dermatophytes in 48 hours, compared to controls. The combinatorial effect of the culture extracts with the antifungals showed synergy, with a decrease in the MIC values: fluconazole from 2 to 0.25 µg/mL; itraconazole 0.25 to 0.003 µg/mL; terbinafine from 0.01 to 0.002 µg/mL; and extracts from 4000 to 1.9 µg/mL. The target structure of action was the fungal cell membrane. The toxicity tests of extracts with Galleria mellonella were negative. It can be inferred that the culture extracts obtained from clinical Candida parapsilosis and dermatophyte strains present remarkable non-toxic bioactive metabolites capable of inhibiting pathogenic fungi, opening new therapeutic perspectives.
Antagonistic interactions between etiological agents of onychomycosis: antifungal activity of extracts of pure and mixed cultures of Candida spp. and Trichophyton spp.
Keywords: Dermatofitose; Candida; Atividade antifúngica; Dermatófito; Onychomycosis; Antagonism; Dermatophytes; Candida spp; Antifungal activity