Estudo comparativo dos efeitos do imunomodulador P-MAPA encapsulado em nanopartículas poliméricas mucoadesivas versus imunoterapia com BCG na progressão do câncer de bexiga urinária não músculo invasivo - Gehlen, Ana Claudia da Silva Lima [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2016)
A baixa eficácia dos tratamentos e as altas taxas de recorrência do câncer de bexiga não músculo invasivo (CBNMI) podem estar relacionadas aos baixos efeitos das terapias atuais sobre os mecanismos de reparo tecidual, espécies reativas de oxigênio (EROS) e angiogênese e, dentre essas terapias, a mais eficaz é a imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin) que, entretanto, ocasiona efeitos colaterais de intensidades variadas. Desta forma, o desenvolvimento de novas moléculas ou o melhoramento de fármacos já existentes que reduzam o número de instilações intravesicais, as taxas de recorrência e progressão tumoral e os efeitos colaterais é muito relevante. Diante deste cenário destaca-se o imunomodulador P-MAPA abrindo uma nova perspectiva para o combate de alguns tipos de cânceres, incluindo o CBNMI. Assim, os objetivos principais deste estudo foram caracterizar e comparar os efeitos histopatológicos e moleculares do imunomodulador P-MAPA, estabilizado com quitosana e pluronic com a imunoterapia com BCG no tratamento da progressão do CBNMI induzido em ratos. Para tal, o P-MAPA foi nanonizado utilizando a quitosana e o pluronic como estabilizante nas formulações. A caracterização das formulações se deu por técnicas microscópicas, diâmetro e carga superficial, análises térmicas e de raio X. Para a avaliação da atividade antitumoral do P-MAPA estabilizado comparada com BCG utilizou-se 35 ratas da linhagem Fischer 344. Desses animais, 30 foram submetidos a indução química do CBNMI através da instilação intravesical de 1,5 mg/kg de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) e os outros 5 animais foram considerados como Grupo (controle) e receberam solução fisiológica. Duas semanas após a última dose de MNU, dividiu-se os animais em 6 grupos a saber, grupo câncer (MNU) animais que foram submetidos a instilação intravesical de MNU e receberam solução fisiológica, grupo MNU+BCG, animais que foram tratados com BCG 106 UFC (40 mg), Grupo MNU+P-MAPA-Micro Pluronic, animais que foram tratados com uma dose de 1mg/mL de P-MAPA disperso em solução aquosa de Pluronic F68 (5% m/v), grupo MNU+P-MAPA-Micro Quitosana, animais que foram tratados com uma dose de 1 mg/mL de P-MAPA disperso em solução aquosa de Quitosana (1,33%); grupo MNU+P-MAPA-Nano Pluronic, animais que foram tratados com uma dose de 1mg/mL de P-MAPA nanonizado disperso em solução aquosa de Pluronic F68 e grupo MNU+P-MAPA-Nano Quitosana, animais que foram tratados com uma dose de 1mg/mL de P-MAPA nanonizado disperso em solução aquosa de Quitosana. Todos os tratamentos foram administrados por via intravesical por 6 semanas consecutivas. Após o tratamento, todas as bexigas foram coletadas e submetidas às análises histopatológicas e Western Blotting. O presente estudo comprovou que a utilização do Pluronic como estabilizante para o desenvolvimento de formulações de compostos terapêuticos para o tratamento intravesical de câncer de bexiga mostrou-se eficiente protegendo o produto de alteração ou perdas pela variação do pH urinário. Ainda, nossos resultados demonstraram que as formulações com P-MAPA nano Pluronic e P-MAPA micro Pluronic promoveram ativação equivalente do sistema imune inato e adaptativo mediada pelos receptores Toll-like 2 e 4 em relação ao BCG, resultando no aumento da via de sinalização para interferons, desacelerando o processo de angiogênese, culminando com significativa regressão do CBNMI. Assim, o P-MAPA nanonizado na presença de Pluronic é um potencial candidato para o tratamento do CBNMI.

The low effectiveness of treatments and high recurrence rates of bladder cancer noninvasive muscle (CBNMI) may be related to low effects of current therapies on the mechanisms of tissue repair, oxigen reactive species (EROS) and angiogenesis, and among these therapies, the most effective is immunotherapy with BCG (Bacillus Calmette-Guerin) which, however, causes sides effects of varying intensities. Thus, the development of new molecules or improving existing drugs that reduce the number of intravesical instillations, recurrence rates and tumor progression and side effects is very important. This scenario highlights the P-MAPA immunomodulator opening a new perspective to fight some types of cancers, including CBNMI. Thus, the aims of this study were to characterize and compare the histopathologic and molecular effects of immunomodulator P-MAPA, stabilized with chitosan and pluronic with immunotherapy with BCG in the treatment of progression of CBNMI induced in rats. To this end, the P-MAPA was nanosized using chitosan and pluronic as a stabilizer in the formulations. Characterisation of the formulations are given by microscopic techniques, diameter, surface charge, thermal analysis and X-ray. To evaluate the antitumor activity of P-MAPA stabilized compared with BCG was used 35 female Fisher-344 rats. Of these animals, 30 underwent chemical induction CBNMI by intravesical instillation of 1.5 mg / kg of N-methyl-N-Nitrosourea (MNU), and the other 5 animals were considered Group (control) and received physiological solution. Two weeks after the last dose of MNU, divided animals into 6 groups namely cancer group (MNU) animals underwent intravesical instillation of MNU and received physiological solution, MNU + BCG group animals were treated with BCG 106 CFU (40 mg) group MNU + P-MAPA Micro Pluronic, animals were treated with a dose of 1mg / mL P-MAPA dispersed in aqueous solution of Pluronic F68 (5% w / v), group MNU + P-MAPA Micro Chitosan, animals were treated with a dose of 1mg / mL P-MAPA dispersed in aqueous solution of chitosan (1.33%); Group MNU + P-MAPA-Nano Pluronic, animals were treated with a dose of 1mg / mL P-MAPA nanosized dispersed in aqueous solution of Pluronic F68 and Group MNU + P-MAPA-Nano Chitosan, animals were treated with a dose of 1mg / mL P-MAPA nanosized dispersed in aqueous solution of chitosan. All treatments were administered via intravesical for 6 consecutive weeks. After treatment, all bladders were collected and subjected to histological analysis and Western Blotting. This study showed that the use of Pluronic as a stabilizer for the development of therapeutic compounds formulations for intravesical treatment of bladder cancer was efficient protecting the product change or loss by varying the urine pH. Furthermore, our results demonstrated that formulations P-MAPA nano Pluronic and P-MAPA micro Pluronic promoted equivalent activation of the innate and adaptive immune system mediated by Toll-like receptors 2 and 4 compared to BCG, resulting in increased signaling pathway to interferons, slowing the process of angiogenesis, culminating in significant regression of CBNMI. Thus, nanosized P-MAPA in the presence of Pluronic is a potential candidate for treatment of CBNMI.
Comparative study of the immunomodulator effects of P-MAPA encapsulated in mucoadesive polymeric nanoparticles versus BCG imunotherapy in progression of urinary bladder cancer no invasive muscle
Keywords: Câncer de bexiga; P-MAPA; Imunoterapia; Nanotecnologia; Urologia