Efeito de eIF5A no Perfil Traducional de Saccharomyces cerevisiae - Demarqui, Fernanda Manaia [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020)
Os mecanismos essenciais da tradução ocorrem em associação com o ribossomo e são subdivididos em quatro etapas: iniciação, elongação, terminação e reciclagem ribossomal. Em cada fase, além de ribossomos, mRNAs e tRNAs carregados, são necessários também fatores proteicos que auxiliam o desenvolvimento do processo. eIF5A é um desses fatores presentes na tradução. Uma proteína altamente conservada em arqueas e eucariotos que sofre uma modificação pós-traducional exclusiva, chamada hipusinação, a qual é essencial para sua função. O uso de técnicas de perfil de expressão gênica em larga escala associadas à técnica de perfil polissomal possibilitam comparações quantitativas dos níveis de mRNA recrutados para a tradução. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão gênica global nos níveis de mRNA total e de mRNAs recrutados para a tradução de mutantes de Saccharomyces cerevisiae com função diminuída de elF5A (depleção de eIF5A ou bloqueio da hipusinação). Inicialmente constatou-se que o perfil traducional analisado neste trabalho é equivalente ao perfil traducional obtido por outras técnicas. Em relação aos resultados biológicos, foi observado que o bloqueio da hipusinação leva a um aumento na formação de polissomos em ORFs mais longas e que possuem menor taxa de iniciação. Ainda, os resultados mostram uma relação íntima entre a falta de hipusinação e a via de biossíntese de poliaminas já que a mutação no gene DYS1 induz respostas celulares semelhantes a situações de aumento nos níveis intracelulares de poliaminas

The essential mechanisms of translation occur in association with the ribosome and are subdivided into four stages: initiation, elongation, termination and ribosomal recycling. In each phase, besides ribosomes, mRNAs and loaded tRNAs, protein factors that favor the development of the process are also required. eIF5A, one of these factors present in translation, is a highly conserved protein in archaea and eukaryotes that undergoes a unique post-translational modification called hypusination, which is essential for its function. The use of large-scale gene expression profiling techniques associated with the polysomal profiling technique enables quantitative comparisons of mRNA levels recruited for translation. Thus, the aim of this work was to analyze the overall gene expression in the transcriptional and traslational profiles of Saccharomyces cerevisiae mutants with decreased elF5A function (eIF5A depletion or blockade of hypusination). It has been observed that blockade of hypusination leads to an increase in polysome formation in longer ORFs with lower initiation rate. Moreover, the results show a close relationship between lack of hypusination and the polyamine biosynthesis pathway since the mutation in DYS1 gene induces cellular responses similar to situations of elevation in intracellular polyamine levels.
Effect of eIF5A on the translational profile in Saccharomyces cerevisiae
Keywords: eIF5A; RNAseq; Tradução; Hipusinação; Microarray