Suplementação com ácido oleico altera a síntese de prostaglandinas em células trofoblásticas bovinas cultivadas in vitro - Silva, Gabriel Souza da [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
Em bovinos a mortalidade embrionária precoce, ocasionada por falhas no reconhecimento materno-fetal (RMF), é uma das maiores causas de falhas reprodutivas. O ácido oleico (OA) determina modificações na síntese de prostaglandinas que podem favorecer o RMF. A hipótese é que a suplementação com OA, no meio de cultura de CT-1 aumenta a síntese de PGE2, diminui a síntese de PGF2α e aumenta a relação PGE2/PGF2α, sendo tal efeito dose-dependente. O objetivo foi determinar os efeitos da suplementação com OA (Sigma, O1383) no cultivo in vitro de células trofoblásticas bovinas (CT-1) sobre a síntese de prostaglandina E2 (PGE2) e prostaglandina F2α (PGF2α). As CT-1 foram cultivadas por 24 dias, incubadas a 38,5°C em atmosfera umidificada, com 5% de CO2 em garrafas de cultivo. Após essa etapa, as CT-1 foram transferidas para placas de cultivo contendo meio acrescido com 10% de soro fetal bovino (SFB), onde foram cultivadas por 5 dias e, em seguida, receberam meio de cultivo isento de SFB durante 24 horas. Finalmente, as CT-1 foram suplementadas com diferentes concentrações de OA (0, 50, 100, 200, 500 e 1000 µM) durante 48 e 72 horas em meio sem SFB. As concentrações de PGE2 e PGF2α foram determinadas por ensaio de imunoabsorção enzimática. A análise estatística foi realizada pelo PROC MIXED do SAS. A concentração de PGF2α no tempo de 48 horas foi maior (P < 0,0001) nos tratamentos com 50 μM, 100 μM, 200 μM e 500 μM de OA (88,97 ± 7,11; 95,31 ± 7,11; 114,88 ± 7,11 e 107,83 ± 7,11 ng/ml; respectivamente) comparado ao grupo controle (61,52 ± 7,11 ng/ml), o tratamento de 1000 μM de OA (58,44 ± 7,11 ng/ml) não diferiu do grupo controle. A concentração de PGF2α no tempo de 72 horas foi maior (P < 0,0001) nos tratamentos com 50 μM, 100 μM, 200 μM e 500 μM de OA (64,08 ± 2,89; 76,45 ± 2,89; 70,31 ± 2,89 e 59,31 ± 2,89 ng/ml; respectivamente) comparado ao grupo controle (49,40 ± 2,89 ng/ml), no tratamento de 1000 μM de OA (39,41 ± 2,89 ng/ml) foi menor que no grupo controle. As CT-1 suplementadas com 200 μM, 500 μM e 1000 μM de OA apresentaram um aumento (P = 0,0151) na síntese de PGE2 no tempo de 48 horas (20,61 ± 3,39; 20,11 ± 3,39 e 19,11 ± 3,39 ng/ml; respectivamente) comparado ao grupo controle (4,80 ± 2,93 ng/ml). Com 72 horas, houve tendência (P = 0,0872) no aumento da síntese de PGE2 (P = 0,0872), quando as CT-1 suplementadas com 50 μM, 200 μM e 1000 μM de OA (18,60 ± 3,60; 20,20 ± 3,60 e 19,00 ± 3,60 ng/ml; respectivamente) foram comparadas ao grupo controle (5,40 ± 3,60 ng/ml). Nos grupos tratados com OA por 48 horas, a razão PGE2/PGF2α foi menor (P = 0,0460) quando as CT-1 foram suplementadas com 200 μM e 500 μM de OA (0,62 ± 0,06 e 0,56 ± 0,06) comparado ao grupo controle (0,82 ± 0,06 ng/ml). Com 72 horas, houve tendência na diminuição da razão PGE2/PGF2α (P = 0,0834) apenas quando as CT-1 foram suplementadas com 500 μM de OA (0,62 ± 0,10) comparado ao grupo controle (0,93 ± 0,09 ng/ml). Em conclusão, a suplementação de OA na concentração de 1000 µM, diminui a síntese de PGF2α com 72 horas e aumenta a síntese de PGE2 com 48 horas no cultivo in vitro de CT-1.

In cattle early embryonic mortality, caused by failures in maternal recognition of pregnancy (MRP), is one of the major causes of reproductive failures. Oleic acid (OA) determines modifications in the synthesis of prostaglandins that may favor MRP. The hypothesis is that supplementation with OA in the CT-1 culture medium increases PGE2, decreases PGF2 and increases the PGE2/PGF2 ratio, with this effect being dose-dependent. The objective was to determine the effects of supplementation with OA (Sigma, O1383) in the in vitro culture of bovine trophoblastic cells (CT-1) on the synthesis of prostaglandin E2 (PGE2) and prostaglandin F2α (PGF2α). The CT-1 were cultured for 24 days, incubated at 38.5°C in a humidified atmosphere with 5% CO2 in culture bottles. After this step, the CT-1 were transferred to culture plates containing medium added with 10% fetal bovine serum (FBS), where they were cultivated for 5 days and then received culture medium free of FBS for 24 hours. Finally, CT-1 were supplemented with different concentrations of OA (0, 50, 100, 200, 500 and 1000 µM) for 48 and 72 hours in medium without FBS. PGE2 and PGF2α concentrations were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Statistical analysis was performed using PROC MIXED from SAS. The concentration of PGF2α at 48 hours was higher (P < 0.0001) in treatments with 50 μM, 100 μM, 200 μM and 500 μM of OA (88.97 ± 7.11; 95.31 ± 7.11; 114.88 ± 7.11 and 107.83 ± 7.11 ng/ml; respectively) compared to the control group (61.52 ± 7.11 ng/ml), the 1000 μM OA treatment (58.44 ± 7.11 ng/ml) did not differ from the control group. The concentration of PGF2α at 72 hours was higher (P < 0.0001) in treatments with 50 μM, 100 μM, 200 μM and 500 μM of OA (64.08 ± 2.89; 76.45 ± 2.89; 70.31 ± 2.89 and 59.31 ± 2.89 ng/ml; respectively) compared to the control group (49.40 ± 2.89 ng/ml), the 1000 μM OA treatment (39.41 ± 2.89 ng/ml) was lower than in the control group. CT-1 supplemented with 200 μM, 500 μM and 1000 μM of OA showed an increase (P = 0.0151) in PGE2 synthesis within 48 hours (20.61 ± 3.39; 20.11 ± 3.39 and 19.11 ± 3.39 ng/ml, respectively) compared to the control group (4.80 ± 2.93 ng/ml). At 72 hours, there was a tendency (P = 0.0872), towards an increase in PGE2 synthesis, when CT-1 supplemented with 50 μM, 200 μM and 1000 μM of OA (18.60 ± 3.60; 20.20 ± 3.60 and 19.00 ± 3.60 ng/ml; respectively) were compared to the control group (5.40 ± 3.60 ng/ml). In groups treated with OA for 48 hours, the PGE2/PGF2α ratio was lower (P = 0.0460) when CT-1 was supplemented with 200 μM and 500 μM of OA (0.62 ± 0.06 and 0.56 ± 0.06 ng/ml) compared to the control group (0.82 ± 0.06 ng/ml). At 72 hours, there was a tendency to decrease the PGE2/PGF2α ratio (P = 0.0834) only when the TC-1 were supplemented with 500 μM of OA (0.62 ± 0.10 ng/ml) compared to the control group (0.93 ± 0.09 ng/ml). In conclusion, OA supplementation at a concentration of 1000 µM decreases PGF2α synthesis with 72 hours and increases PGE2 synthesis with 48 hours in the in vitro culture of CT-1.
Oleic acid supplementation alters prostaglandin synthesis in bovine trophoblast cells cultured in vitro
Keywords: Ácido graxo; Trofectoderma; Blastocisto; Fatty acid; Trophectoderm; Blastocyst