Perfil de receptores de TNF-α expressos em linfócitos CD4+ Th17 no sangue periférico de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia - Silva, Patrícia Braga da [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
Introdução: Gestantes portadoras de pré-eclâmpsia (PE) apresentam desvio da resposta imune para perfil inflamatório. A ativação de monócitos do sangue periférico, com produção exacerbada de citocinas inflamatórias como fator de necrose tumoral (TNF) e outros mediadores inflamatórios pode causar ativação de células da imunidade adaptativa, gerando células T CD4+ inflamatórias. O TNF pode exercer diferentes efeitos funcionais sobre as subpopulações de linfócitos T CD4+ através da interação com os receptores de TNF (TNFR1 e TNFR2). A ligação de TNF a esses dois receptores ativa diferentes vias de sinalização. O TNFR1 induz morte celular por apoptose ou necrose e é também importante para o desenvolvimento de células T efetoras inflamatórias, enquanto o TNFR2 é preferencialmente expresso por células T reguladoras (Treg). Já é conhecido que na PE a resposta de linfócitos T está desviada para perfil inflamatório Th1 e Th17 em detrimento de perfil regulador, podendo esse balanço entre células Treg e Th17 ser crítico para a tolerância ao feto e para a prevenção da doença. Objetivos: O presente projeto teve por objetivo comparar a expressão de receptores de TNF (TNFR1 e TNFR2) em células CD4+ Th17 de sangue periférico e sua associação com níveis plasmáticos de TNF e da forma solúvel desses receptores (sTNFR1 e sTNFR2) por gestantes portadoras de PE e gestantes normotensas (NT). Métodos: Foram avaliadas 36 gestantes, sendo 20 portadoras de PE e 16 NT, pareadas pela idade gestacional. O plasma obtido foi analisado pela técnica de ELISA. Foram avaliadas a percentagem de células CD4+ Th17 pela expressão do fator de transcrição RORγt, a expressão dos receptores de TNF (TNFR1 e TNFR2) nessa subpopulação, além da expressão intracitoplasmática de TNF, IL-17A por citometria de fluxo. Os resultados foram analisados por meio de testes não-paramétricos com nível de significância de 5%. Resultados: A expressão do receptor TNFR1 apresentou-se aumentada e a do receptor TNFR2 diminuída em linfócitos T CD4+, assim como em linfócitos de perfil Th17, de gestantes com PE quando comparadas com gestantes NT. Além disso, a expressão do fator de transcrição RORγt e das citocinas intracitoplasmáticas TNF e IL-17A também se mostraram elevados no grupo PE em relação ao grupo NT. Observou-se correlação positiva entre a expressão de TNFR2 por linfócitos CD4+/Th17 e a concentração plasmática de sTNFR2 em gestantes pré-eclâmpticas (r =0,5397; p=0,0171) enquanto não se observou correlação entre esses marcadores em gestantes NT. Houve correlação positiva entre as concentrações plasmáticas de sTNF e sTNFR1 em gestantes com PE (r =0,5112; p=0,0257) e em gestantes normotensas (r =0,5604; p=0,0365). A comparação entre sTNFR1 e sTNFR2 mostrou correlação positiva tanto em gestantes com PE (r =0,4500; p=0,349) como em gestantes NT (r =0,5818; p=0,0302). Conclusão: Os resultados confirmam que gestantes portadoras de PE apresentam uma inflamação sistêmica, com células CD4+ direcionadas para um perfil inflamatório, devido à alta expressão de TNFR1 por linfócitos Th17/RORγt+ e também pelo aumento de citocinas inflamatórias, como TNF e IL-17A, produzidas por essas células. A maior expressão de TNFR1 em células Th17 e a concentração elevada desse receptor no plasma sugerem seu papel na patogênese da PE. Estudos futuros sobre a expressão de marcadores anti-inflamatórios em células Treg/FoxP3+ poderão contribuir para o conhecimento do papel dessas células no balanço Th17/Treg observado na PE.

Introduction: Pregnant women with pre-eclampsia (PE) have a shift in the immune response towards an inflammatory profile. The activation of peripheral blood monocytes, with exacerbated production of inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor (TNF) and other inflammatory mediators, can cause activation of adaptive immunity cells, generating inflammatory CD4+ T cells. TNF can exert different functional effects on CD4+ T lymphocytes subpopulations through interaction with TNF receptors (TNFR1 and TNFR2). TNF binding to these two receptors activates different signaling pathways. TNFR1 induces cell death by apoptosis or necrosis and is also important for the development of inflammatory effector T cells, whereas TNFR2 is preferentially expressed by regulatory T cells (Treg). It is already known that in PE the T lymphocytes response is skewed towards the Th1 and Th17 inflammatory profile to the detriment of the regulatory profile, and this balance between Treg and Th17 cells may be critical for tolerance to the fetus and for disease prevention. Objectives: This project aimed to compare the expression of TNF receptors (TNFR1 and TNFR2) in peripheral blood CD4+ Th17 cells and their association with plasma levels of TNF and the soluble form of these receptors (sTNFR1 and sTNFR2) by pregnant women with PE and normotensive pregnant women (NT). Methods: 36 pregnant women were evaluated, 20 with PE and 16 with NT, matched by gestational age. The blood collected from these pregnant women was centrifuged, the plasma separated and stored at -80°C for measurement of TNF and soluble receptors sTNFR1 and sTNFR2 using the ELISA technique. The percentage of CD4+ Th17 cells was evaluated by the expression of the RORγt transcription factor, the expression of TNF receptors (TNFR1 and TNFR2) in this subpopulation and, the intracytoplasmic expression of TNF, IL-17A by flow cytometry. The results were analyzed using non-parametric tests with a significance level of 5%. Results: The expression of the TNFR1 receptor was increased in CD4+ T lymphocytes, as well as in Th17 profile lymphocytes, from pregnant women with PE when compared to NT pregnant women. In addition, the expression of the transcription factor RORγt and the intracytoplasmic cytokines TNF and IL-17A were also elevated in the PE group compared to the NT group. A positive correlation was observed between the expression of TNFR2 by CD4+ lymphocytes and the plasmatic concentration of sTNFR2 in preeclamptic pregnant women (r =0.5397; p=0.0171) while no correlation was observed between these markers in NT pregnant women. There was a positive correlation between plasma concentrations of sTNF and sTNFR1 in pregnant women with PE (r =0.5112; p=0.0257) and in normotensive pregnant women (r =0.5604; p=0.0365). The comparison between sTNFR1 and sTNFR2 showed a positive correlation both in pregnant women with PE (r =0.4500; p=0.349) and in NT pregnant women (r =0.5818; p=0.0302). Conclusion: The results confirm that pregnant women with PE have systemic inflammation, with CD4+ cells directed towards an inflammatory profile, due to the high expression of TNFR1 by Th17/RORγt+ lymphocytes and also by the increase of inflammatory cytokines, such as TNF and IL-17A, produced by these cells. The greater expression of TNFR1 in Th17 cells and the high concentration of this receptor in plasma suggest its role in the pathogenesis of PE. Future studies on the expression of anti-inflammatory markers in Treg/FoxP3+ cells may contribute to the understanding of the role of these cells in the Th17/Treg balance observed in PE.
Profile of TNF-α receptors expressed in Th17 CD4+ lymphocytes in the peripheral blood of pregnant women with preeclampsia
Keywords: Pré-eclâmpsia; Th17; TNF; TNFR1; TNFR2; IL-17A; Pre-eclampsia