Avaliação do efeito antinociceptivo e anti-inflamatório do citral em camundongos C57BL/6J adultos machos obesos - Aquino, Maria Luiza Alves [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2025)
A obesidade é condição complexa relacionada a um quadro inflamatório crônico e sistêmico, e vem se mostrando cada vez mais alarmante dado sua crescente incidência e sua relação com graves comorbidades como a dor crônica, que atinge diretamente a qualidade de vida da população. Atualmente, buscam-se formas terapêuticas alternativas aos fármacos anti-inflamatórios, considerando os efeitos adversos graves e potencialmente fatais decorrentes de seu uso contínuo. O citral é um monoterpeno com efeitos analgésicos e anti-inflamatórios amplamente estudados. A partir disso, este trabalho avaliou o efeito antinociceptivo e anti-inflamatório do citral em camundongos adultos machos C57BL/6J obesos. Os animais (CEUA nº 6856030723) foram divididos em dois grupos, um alimentado com dieta padrão (SD) (n = 65) e outro alimentado com dieta hiperlipídica (HFD) (n = 71) por 12 semanas. A evolução da massa corporal desses animais foi avaliada semanalmente e a indução da obesidade no grupo HFD foi comprovada com um teste de tolerância oral à glicose (OGTT). O teste de nocicepção induzido por formalina foi conduzido para avaliar a nocicepção nos animais tratados com citral (100 mg/kg ou 300 mg/kg), veículo (1% Tween 80, 10 mL/kg) ou morfina (5 mg/kg), observando a nocicepção nas fases de dor neurogênica (0-5 min) e de dor inflamatória (15-30 min). O teste da placa quente foi realizado para avaliar a nocicepção térmica nos animais. Para avaliação da atividade anti-edematogênica do citral, o teste de edema de pata foi realizado com injeção intraplantar de carragenina 5% ou salina 0,9% na pata traseira direita nos animais tratados com citral, veículo e Piroxicam (30 mg/kg) ou salina 0,9% na pata contralateral para controle do volume em todos os grupos. O volume das patas foi obtido por um pletismômetro digital em 1h, 2h, 3h, 4h e 6h após injeção de carragenina. Ao final, os animais foram eutanasiados e foram coletadas as patas para aferição do volume de edema e avaliação dos parâmetros inflamatórios e de estresse oxidativo. O grupo HFD apresentou massa corporal significativamente maior em comparação com o grupo SD a partir da metade da primeira semana da introdução da dieta e, ao fim da 12ª semana, a média de massa corporal foi quatro vezes maior nos animais HFD, em relação aos animais SD. No OGTT, observou-se que o nível glicêmico foi mais elevado no grupo HFD em relação ao grupo SD, evidenciado pela diferença significativa das áreas sob as curvas de glicemia. Diante da injeção de formalina, observou-se redução significativa da resposta nociceptiva no grupo tratado com citral 300 mg/kg comparado ao grupo veículo. Além disso, o tratamento dos animais com citral 300 mg/kg resultou em efeito antinociceptivo mais pronunciado no grupo HFD, em comparação com SD. Não foi observada diferença significativa nos testes da placa quente e de edema induzido por carragenina após tratamento com citral em qualquer um dos grupos de dieta, assim como não houve diferença significativa nos marcadores de estresse oxidativo na pata dos animais. Em conclusão, o tratamento com citral não produziu efeito antiedematogênico ou antinociceptivo frente à estímulo térmico nos modelos selecionados para este trabalho, entretanto foi eficiente na antinocicepção frente à estímulo químico tanto na fase de dor neurogênica, quanto na fase inflamatória do teste, quando comparado ao tratamento com veículo. Além disso, este efeito antinociceptivo foi mais pronunciado em animais alimentados com HFD do que SD. Esses achados sugerem o citral como potencial terapêutico na modulação da dor, alternativo aos fármacos atuais, e reforçam a importância da investigação acerca de seus mecanismos de ação no contexto da dor na obesidade.

Obesity is a complex condition related to chronic and systemic inflammation, and it is becoming increasingly alarming given its growing incidence and its relationship with serious comorbidities such as chronic pain, which directly affects the quality of life of the population. Currently, alternative therapies to anti-inflammatory drugs are being sought, considering the serious and potentially fatal adverse effects resulting from their continuous use. Citral is a monoterpene with widely studied analgesic and anti-inflammatory effects. Based on this, this study evaluated the antinociceptive and anti-inflammatory effects of citral in obese adult male C57BL/6J mice. The animals (CEUA No. 6856030723) were divided into two groups, one fed a standard diet (SD) (n = 65) and the other fed a high-fat diet (HFD) (n = 71) for 12 weeks. The evolution of the body mass of these animals was evaluated weekly, and the induction of obesity in the HFD group was confirmed with an oral glucose tolerance test (OGTT). The formalin-induced nociception test was conducted to evaluate nociception in animals treated with citral (100 mg/kg or 300 mg/kg), vehicle (1% Tween 80, 10 mL/kg) or morphine (5 mg/kg), observing nociception in the neurogenic pain (0-5 min) and inflammatory pain (15-30 min) phases. The hot plate test was performed to assess thermal nociception in the animals. To evaluate the anti-edematogenic activity of citral, the paw edema test was performed with intraplantar injection of 5% carrageenan or 0.9% saline in the right hind paw in animals treated with citral, vehicle, and Piroxicam (30 mg/kg) or 0.9% saline in the contralateral paw to control the volume in all groups. The volume of the paws was obtained by a digital plethysmometer at 1h, 2h, 3h, 4h, and 6h after carrageenan injection. At the end, the animals were euthanized, and the paws were collected to measure the volume of edema and evaluate inflammatory and oxidative stress parameters. The HFD group had significantly higher body mass compared to the SD group from the middle of the first week of diet introduction, and at the end of the 12th week, the average body mass was four times higher in HFD animals than in SD animals. In the OGTT, it was observed that the glycemic level was higher in the HFD group compared to the SD group, evidenced by the significant difference in the areas under the glycemic curves. Upon formalin injection, a significant reduction in the nociceptive response was observed in the group treated with 300 mg/kg citral compared to the vehicle group. In addition, treatment of animals with citral 300 mg/kg resulted in a more pronounced antinociceptive effect in the HFD group compared to SD. No significant difference was observed in the hot plate and carrageenan-induced edema tests after treatment with citral in any of the diet groups, nor was there a significant difference in oxidative stress markers in the animals' paws. In conclusion, treatment with citral did not produce an anti-edematogenic or antinociceptive effect against thermal stimulation in the models selected for this study, but it was effective in antinociception against chemical stimulation in both the neurogenic pain phase and the inflammatory phase of the test, when compared to treatment with vehicle. In addition, this antinociceptive effect was more pronounced in animals fed HFD than SD. These findings suggest citral as a potential therapeutic agent in pain modulation, alternative to current drugs, and reinforce the importance of investigating its mechanisms of action in the context of pain in obesity.
Evaluation of the antinociceptive and antiinflammatory effect of citral on obese male adult C57BL/6J mice
Keywords: Camundongos; Dieta hiperlipídica; Nocicepção; Inflamação; Citral; Mice; Diet, high fat; Nociception test; Inflammation