Teses - Reabilitação Oral - FOAR

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https://hdl.handle.net/11449/76995

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Avaliação tridimensional de fatores que influenciam na exatidão do escaneamento intraoral em arcadas parcialmente dentadas com implantes: estudo in vitro
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-23) Tinajero Aroni, Mônica Estefanía; Mollo Júnior, Francisco de Assis [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
As moldagens digitais são uma alternativa viável quando comparado às técnicas convencionais devido às limitações, como alterações dimensionais do material, tempo de cadeira e desconforto do paciente. No entanto, a literatura ainda carece de um consenso sobre a precisão dos escâneres intraorais em arcadas com implantes. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar, diversos fatores que podem influenciar na veracidade e precisão do escaneamento intraoral de arcadas parcialmente dentadas com implantes instalados. Um modelo mestre de uma maxila parcialmente dentada com cinco implantes, nas regiões dos dentes 14, 16, 22, 23 e 24, foi escaneado com um escâner de bancada R700 3Shape, para ser utilizado como imagem STL (estereolitografía) referência. Foram realizadas digitalizações, alternando as variáveis de padrões de escaneamento de acordo com os grupos: CH: continuo horizontal; CV: continuo vertical; SH: segmentado horizontal; SV: segmentado vertical; além disso, foi avaliada a extensão da digitalização de acordo com os grupos: DPD (parcial direita), DPE (parcial esquerda) e DT (total) e tipo de espaço protético de acordo com os grupos, implante/implante e implante/dente, com digitalizações parciais de cada lado do modele mestre. As digitalizações foram feitas com o escâner intraoral Cerec Omnicam para cada grupo (n=10). Para avaliação da veracidade e precisão do sistema, os STLs foram exportados para um software (Geomagic Control X) para posterior sobreposição das imagens de estudo. Os dados de desvio foram submetidos ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk com teste não paramétrico de Kruskall-Wallis complementado pelo teste de Dunn. O software GraphPad Prism 8 foi utilizado com nível de significância de 5 %. Os resultados mostraram que o padrão CH foi o que apresentou maior veracidade, com um valor de 0,06 mm. Para a extensão de digitalização o grupo de escaneamento parcial foi o mais satisfatório em relação ao total com um valor de 0,05 e 0,06 mm respectivamente. Quando comparados os diferentes espaços protéticos, o grupo implante/dente teve menores desvios quando comparado ao lado implante/implante. Em conclusão, os escâneres intraorais podem ser utilizados para a digitalização de arcos parcialmente dentados com implantes. Todavia, deve ser considerado que os diferentes padrões de escaneamento, o tipo de espaço protético e a extensão da digitalização influenciam na veracidade e precisão dos escâneres intraoral Cerec Omnicam.
Avaliação do desempenho mastigatório, autopercepção de saúde bucal, qualidade de vida e estado nutricional de pacientes idosos submetidos a diferentes tratamentos reabilitadores: um estudo observacional
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-25) Jabr, Camila Luiz; Arioli Filho, João Neudenir [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Neste estudo transversal, avaliou-se as variáveis: desempenho mastigatório (DM), qualidade de vida (QV) relacionada a saúde bucal, autopercepção de saúde bucal, perfil socioeconômico (PS) e o estado nutricional (EN) de idosos desdentados totais que foram submetidos a diferentes reabilitações bucais. A amostra (N=40), foi dividida em grupos de acordo com o tratamento reabilitador (n=20): (G1) próteses totais bimaxilares convencionais e (G2) prótese total fixa implantossuportada mandibular e prótese total maxilar. A avaliação do desempenho mastigatório (DM) foi feita utilizando amêndoas como alimento teste, pelo método das peneiras, nos ciclos mastigatórios estabelecidos (10, 20 e 40 ciclos). Foram aplicados quatro questionários: Geriatric Oral Health Assessment Index – GOHAI, Oral Health Impact Profile Edent – OHIP- Edent, Critério de classificação econômica brasileira – ABEP e Avaliação Nutricional dos idosos- MNA, para avaliar a autopercepção de saúde bucal, QV, PS e EN dos idosos, respectivamente. Após a avaliação dos pressupostos estatísticos, foi aplicado o teste de Mann-Whitney para comparar os grupos quanto ao DM, QV, PS e EN. O teste de correlação de Spearman foi realizado para verificar correlação entre o DM e a QV, autopercepção de saúde bucal e o EN dos participantes. Para ambos os testes, um nível de significância de 5% foi considerado. Os participantes do G2 apresentaram melhor DM do que os participantes do G1 (p<0,05) em todos os ciclos mastigatórios. De acordo com os resultados do OHIP-EDENT, os participantes do grupo G2 também apresentaram melhor QV do que os participantes do G1 (p<0,05). De acordo com o GOHAI, a autopercepção de saúde bucal dos participantes não diferiu entre os grupos (p<0,05). Encontrou-se uma correlação negativa moderada entre desempenho mastigatório e QV para 40 ciclos mastigatórios para ambos os grupos (r2=-0,513; p=0,001), contudo não foi encontrada uma correlação entre DM e EN (p>0,05), assim como DM e autopercepção de saúde bucal (p>0,05). Com relação ao EN, os participantes de G2 apresentaram melhor estado nutricional, do que os participantes de G1. Os indivíduos reabilitados com próteses totais fixas implantossuportadas mandibulares (G2) apresentaram uma renda familiar mensal média maior e comportamento superior no DM, QV, além de menor risco de desnutrição quando comparados com os usuários de próteses totais bimaxilares convencionais. A reabilitação com próteses totais fixas implantossuportadas mandibulares foi capaz de favorecer a função mastigatória do indivíduo desdentado total quando comparado ao tratamento com próteses totais convencionais.
Efetividade de soluções desinfetantes associadas ou não à escovação no controle do biofilme de uma resina impressa para base de prótese total
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-10) Nunes, Thaís Soares Bezerra Santos; Pero, Ana Carolina [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A formação de biofilme nas bases das próteses é um problema clínico frequente, favorecendo o desenvolvimento da estomatite protética. Entretanto não há estudos avaliando um protocolo de higiene adequado para próteses totais confeccionadas com uma resina impressa para base de dentadura. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da imersão em hipoclorito de sódio 0,25%, clorexidina 2% e peróxido alcalino, associada ou não à escovação em solução de sabonete, no controle do biofilme formado sobre uma resina para base de dentadura confeccionada pela impressão 3D. Espécimes circulares (10 mm diâmetro x 1,2 mm espessura) de duas resinas [Cosmos (COS-grupo experimental) e Clássico (CLA- grupo controle)] foram contaminados in vitro com cepas de Candida albicans para formação de biofilme de 48 horas, em seguida foram submetidos aos protocolos de higiene envolvendo a imersão em soluções desinfetantes (hipoclorito de sódio 0,25%, clorexidina 2%, peróxido alcalino e PBS- controle) associados ou não com a escovação mecânica com solução de sabonete Lifebuoy 0,78%. A efetividade desses protocolos foi avaliada por meio da contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL, n=9), avaliação do metabolismo celular (ensaio de XTT, n=9), MEV (n=4) e microscopia confocal a laser (n=2) para avaliar arquitetura dos biofilmes sobre os espécimes. A rugosidade foi avaliada antes e após os protocolos de higiene (imersão + escovação) por meio de um rugosímetro digital (n=9). Todos os dados foram analisados pelos testes de T de student, ANOVA/Welch e pos-hoc de Tukey/Gomes-Howell (α = 0,05), exceto as imagens de MEV e microscopia confocal, que foram avaliadas de maneira descritiva. Sem ser exposto as técnicas de higiene, a resina COS apresentou um biofilme mais espesso e com maior quantidade de hifas em relação a CLA. A rugosidade superficial da COS foi inferior à CLA, entretanto foi observado um comportamento recorrente de maior UFC/mL na resina COS. Imersão em hipoclorito 0,25% e clorexidina 2%, associado ou não com a escovação, apresentaram significativa redução metabólica (XTT) e redução completa de UFC/mL. Apenas a imersão em peróxido alcalino conseguiu reduzir inicialmente o metabolismo (XTT), mas não a redução de UFC/mL, a redução de UFC/mL só foi possível quando associada à escovação. Com relação a rugosidade após os ciclos de escovação e imersão, a CLA aumentou sua rugosidade superficial, já a COS não. Após os ciclos de escovação e imersão a COS manteve um biofilme mais espesso, com maior número de células vivas e maior presença de hifas em relação à CLA. Imersão em hipoclorito 0,25%, associada ou não a escovação, foi o melhor protocolo de higiene, além de eliminar as UFC/mL, removeu, quase que completamente, as células mortas sobre os espécimes. Para próteses removíveis com a presença de estrutura metálica, o protocolo mais indicado é a imersão em clorexidina 2%, associada ou não a escovação, em seguida a imersão em peróxido alcalino associado à escovação. Apesar da resina COS obter uma boa resposta aos protocolos de higiene, o maior número de hifas de C. albicans aderidos a sua superfície é um fato que merece atenção e futuras investigações
Propriedades mecânicas, físicas e microbiológicas de materiais para base protética e dentes artificias utilizados na técnica de impressão 3D
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-14) Silva, Marcela Dantas Dias da; Pero, Ana Carolina [UNESP]; Souza, Raphael Freitas de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A confecção de próteses removíveis atualmente compreende a utilização de novas resinas e tecnologias por meio de impressão 3D, o que representa uma técnica inovadora. A impressão por projeção de luz digital (DLP) é um método de fabricação digital aditiva ágil e com um aumento gradativo de aplicação na odontologia. A investigação das propriedades de diferentes resinas para próteses removíveis digitais/ impressão 3D pelo método DLP é necessária para consolidar sua aplicação clínica, sendo compreendidas suas vantagens e limitações frente aos materiais convencionais. O objetivo dos estudos foi: (I) avaliar propriedades de superfície e adesão/formação de biofilme por Candida albicans em resinas à base de próteses usadas em impressão DLP; (II) avaliar a resistência à abrasão e rugosidade de superfície de resinas impressas em DLP após escovação simulada, representando até cinco anos de uso de próteses. Três resinas de base [NextDent Denture 3D+, Cosmos Denture, Lucitone 550 (controle)] foram avaliadas em ambos estudos (I e II) e duas resinas de dentes [Cosmos TEMP e Duralay 62 (controle)] foram avaliadas apenas no estudo II. No estudo I, os espécimes foram analisados quanto a rugosidade de superfície (Ra), energia livre de superfície (erg cm-2) e ensaios microbiológicos (Contagem de colônias, metabolismo celular e análise por microscopia confocal a laser) de adesão e formação de biofilme por C. albicans. No estudo II, foram avaliadas a perda de massa (g) e rugosidade de superfície (Ra e Rz, em µm) em espécimes submetidos à escovação in vitro por períodos que representam seis meses, 1, 3 e 5 anos. Os dados foram analisados por meio de testes paramétricos e não paramétricos (α=0,05). No estudo I, Lucitone 550 apresentou maior rugosidade de superfície que NextDent Denture 3D+, mas ambos foram semelhantes ao Cosmos Denture. Lucitone 550 apresentou menor energia livre de superfície que Cosmos Denture e NextDent Denture 3D+. As resinas Cosmos Denture e NextDent Denture 3D+ apresentaram maior colonização e metabolismo celular por C. albicans do que Lucitone 550 nos períodos de 90 min e 48 horas. No estudo II, todas resinas impressas 3D apresentaram menor perda de peso do que as resinas dos grupos controle, independentemente do período, embora todas as resinas tenham perdido peso ao longo do tempo. Ra para Cosmos Denture e NextDent Denture 3D+ aumentou significativamente apenas após 3 anos de escovação, enquanto Cosmos TEMP aumentou apenas após 5 anos. Rz permaneceu semelhante a Cosmos Denture e Cosmos TEMP mesmo após 5 anos de escovação, mas aumentou para NextDent Denture 3D+ após 3 anos. Lucitone 550 apresentou maiores Ra e Rz para todos os períodos em relação à NextDent Denture 3D+ e Cosmos Denture. Para Duralay 62 e Cosmos TEMP, Ra e Rz mostraram diferença somente após 3 anos de escovação. Pode-se concluir que as resinas de base de próteses impressas em 3D são mais propensas à colonização por C. albicans, e que sua energia livre de superfície está diretamente associada a essa colonização. Além disso, bases de próteses impressas em DLP e resinas de dentes artificiais apresentam maior resistência à abrasão à escovação do que os materiais convencionais.
Desenvolvimento, caracterização e efeitos fotodinâmicos de Curcumina em micela copolimérica fotoativada para Terapia Fotodinâmica antimicrobiana
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-12-17) Trigo‐Gutierrez, Jeffersson Krishan [UNESP]; Mima, Ewerton Garcia de Oliveira [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Os nanocarregadores tém sido utilizados com sucesso para a veiculação de curcumina (CUR). No entanto, a demorada liberação do composto limita seu uso tópico como fotossensibilizador (FS) para Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), na qual ainda são necessários longos tempos de pré-iluminação e iluminação. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver um sistema micelar fotoativado para liberação de CUR. As micelas foram sintetizadas pelo método de adição direta utilizando o polímero fotossensível formado por poli-etileno glicol como polímero e ácido 3-nitro-4-bromometilbenzoico como cromóforo e ácido fenoxiacético como extremo apolar (PEG-ANB-AFA), denominado polímero fotossensível (PFS). Adicionalmente, como controles, foram sintetizadas micelas convencionais de Pluronic® F127 ou P123. Os testes de caracterização por espectroscopia de absorção e fluorescência incluíram: determinação da Concentração Micelar Crítica, constante de ligação e supressão de fluorescência. As micelas de PFS apresentaram maior eficiência de encapsulamento (88,79%), enquanto que, para as micelas convencionais, foram observados valores de 77,52% para F127 e 72,58% para micelas de P123. O PFS apresentou fotodegradação gradativa com irradiação UV a 355 nm, fato que facilitou a liberação da CUR de dentro das micelas, o que melhorou a demorada liberação do sistema convencional. Os tamanhos na faixa nanométrica de 40,42; 22,90 e 20,78 nm para as micelas de PFS, F127 e P123 respectivamente, e índice de polidispersão de até 0,392 u.a. foram determinadas por meio da técnica de espalhamento dinâmico da luz, e por Microscopia Eletrônica de Varredura com Emissão de Campo foram observadas micelas esféricas. A potêncial zeta aniônico (de -0,139 a -0,613 mV) dos três sistemas foi determinada por meio do potencial zeta. Os efeitos fotodinâmicos do FS na micela fotoativada bem como em micelas convencionais e CUR livre em aPDT contra culturas planctônicas de Candida albicans e Pseudomonas aeruginosa demonstraram diminuição de 1 Log10 comparado com os respectivos grupos controle (diferença significativa p<0,05). Já em culturas planctônicas Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) a micela fotoativada demostrou maior efeito fotodinâmico antimicrobiano que os sistemas convencionais diminuindo a contagem de colônias 2 Log10 comparado com o grupo controle (diferença significativa p<0,05). Adicionalmente, a aPDT promoveu diminuição da biomassa dos biofilmes de MRSA e C. albicans, comparados com seus respetivos grupos controle (diferença significativa p<0,05). Finalmente, as micelas foto-ativadas não apresentaram toxicidade em queratinócitos orais. Desta forma, a aPDT mediada pela CUR em micelas foto-ativadas pode ser uma alternativa para o tratamento de infecções microbianas.
Colonização de Candida spp. no palato de ratos induzida por dispositivo acrílico intrabucal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-12-18) Sakima, Vinicius Tatsuyuji; Mima, Ewerton Garcia de Oliveira [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O presente estudo teve como objetivo avaliar a candidíase bucal em palato de ratos induzida por dispositivo acrílico intrabucal (DAI-B) e Candida spp. Os DAI-Bs adaptáveis à mucosa palatina foram confeccionados a partir da moldagem individual da maxila de cada rato, sendo retidos por cimentação nos molares superiores. Um total de 84 ratos Wistar machos e fêmeas foram divididos em 9 grupos (n=5) com a utilização ou não dos DAI-B’s (Controle negativo, CN, n=2) e com a presença ou não (Controle Dispositivo, CD) de inoculação simples ou mista de C. albicans (Ca), C. glabrata(Cg) e/ou C. tropicalis (Ct). Após 35 dias de uso do DAI-B, o palato dos animais foi fotografado (analise macroscópica), os microrganismos da mucosa do palato e dos DAI-B foram cultivados para contagem de colônias (UFC/mL) e o sangue foi coletado por punção da artéria renal (para análise de leucócitos, neutrófilos e linfócitos). A mucosa foi removida para avaliação histopatológica e então os animais foram eutanasiados. Os dados de UFC/mL e contagem de células presentes no sangue foram submetidas a uma análise estatística inferencial. As imagens histopatológicas e macroscópicas foram analisadas descritivamente. Os valores recuperados da cavidade oral dos animais machos do grupo para CD, Ca, Cg, Ct, CaCg, CaCt, CgCt e CaCgCt em meio Saburoud dextrose Agar (SDA) foram 2,02±0,78; 3,75 ±0,71; 4,14 ±0,2; 2,93 ±0,36; 3,37 ±0,81; 2,71 ±0,46; 2,52 ±0,8; 4,0 ±0,78 Log10(UFC/mL), e para as fêmeas foram 1,7±0,65; 3,31 ±0,7; 3,08 ±0,53; 3,17 ±0,41; 3,40 ±0,97; 3,36 ±0,78; 3,16 ±0,85; 4,33 ±0,75Log10(UFC/mL), respectivamente. Já os valores recuperados nos dispositivos dos animais machos em meio SDA foram 1,93 ±0,67; 4,189 ±0,71; 4,3 ±0,45; 3,15 ±0,45; 3,59 ±0,42; 3,34 ±0,42; 3,38 ±0,9; 4,34 ±0,76 Log10(UFC/mL), e para as fêmeas foram 1,64 ±0,88; 4,29 ±0,65; 3,34 ±0,93; 3,98 ±0,42; 3,78 ±0,52; 3,96 ±0,31 3,76 ±0,85; 4,2 ±0,52 Log10(UFC/mL) para os grupos CD, Ca, Cg, Ct, CaCg, CaCt, CgCt e CaCgCt, respectivamente. A microbiota total teve um aumento de 0,78 Log10(UFC/mL) para os machos e 0,9 Log10(UFC/mL) para as fêmeas após a utilização do dispositivo. A microbiota fúngica na cavidade do palato teve um valor maior nos animais do grupo Ca, Cg, CaCg, CaCgCt. No dispositivo, o grupo CD apresentou-se menor em relação aos demais grupos. A microbiota recuperada foi semelhante entre os sexos.Na análise macroscópica os animais apresentaram sangramento na região de sulco gengival. Não foi observada a presença de células inflamatórias nem fúngica na análise histopatológica. Na análise de sangue, os animais apresentaram valores similares de leucócitos, neutrófilos e linfócitos entre os grupos, porém diferentes entre os sexos. A estomatite protética não foi induzida nos animais.
Avaliação do efeito combinado da fotobiomodulação e da naringenina na atividade de metaloproteinase da matriz por fibroblastos gengivais
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-12) Miotto, Larissa Natiele; Basso, Fernanda Gonçalves [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A mucosite oral (MO) é uma das principais complicações agudas da quimioterapia ou da radioterapia de cabeça e pescoço podendo ocasionar interrupções e atrasos no tratamento oncológico impactando a qualidade de vida e sobrevida destes pacientes. Seu tratamento ainda é controverso e baseado principalmente em terapias paliativas que apenas reduzem a sintomatologia dolorosa, baseado nisso, torna-se fundamental a avaliação de novas estratégias terapêuticas que atuem prevenindo ou tratando de forma efetiva as lesões. Levando em conta que estudos preliminares sugerem que a aplicação isolada da FBM e dos compostos de NA sobre fibroblastos gengivais resultaram em redução da expressão e síntese de metaloproteinase da matriz (MMP), é esperado que a combinação de ambas as propostas terapêuticas possa resultar em um efeito sinérgico, acelerando o processo de reparo da MO. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi determinar a dose da FBM com LBI necessária para modular a síntese de MMP-2 (estudo 1) e avaliar o efeito combinado da aplicação da NA e da FBM na modulação da síntese e atividade de MMP-2, IL-6 e TIMP-1 por fibroblastos gengivais humanos (HGF), bem como sobre funções celulares relacionadas ao processo de reparo tecidual (estudo 2). Foram utilizadas culturas primárias de HGF que foram obtidas de uma doadora voluntária de acordo com o Comitê de Ética em Pesquisas em Humanos. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) foi utilizado como controle positivo, por induzir a síntese de MMPs em HGF. Para a irradiação com LBI utilizou-se o dispositivo LASERTable (InGaAsP; 780 nm; 0,025 W; estudo 1: 0,5, 2 e 4 J/cm2; estudo 2: 4 J/cm2). Para o estudo 1, a análise da viabilidade celular foi realizada por meio do ensaio colorimétrico de metiltetrazolium (MTT) e avaliação da síntese de MMP-2 foi realizada por meio do imunoensaio ELISA. Para o estudo 2, utilizou-se a NA sintética, na concentração de 10μg/mL, baseado em estudos anteriores. O efeito da combinação da NA e da FBM na proliferação de HGF foi realizado por meio do ensaio PrestoBlue, na migração por meio do ensaio de cicatrização in vitro, na síntese de MMP-2, IL-6 e TIMP-1 por HGF por meio de imunoensaio ELISA e na atividade gelatinolítica de HGF por meio de zimografia in situ. Os dados foram submetidos à análise de normalidade e homocedasticidade para seleção dos testes estatísticos adequados (ANOVA, Tukey). Os dados da atividade gelatinolítica foram avaliados qualitativamente e apresentados de forma descritiva. Todas as inferências estatísticas foram feitas considerando o nível de significância de 5%. Os experimentos foram realizados em duplicatas, com N=6. De acordo com os resultados obtidos do estudo 1, a terapia com FBM 4 J/cm2 aumentou significativamente a viabilidade dos HFG na presença ou ausência de TNF-α em relação ao controle negativo (p<0,05) e os grupos tratados com FBM 2 J/cm2 e 4 J/cm2 associada ou não ao TNF-α apresentaram diminuição significativa da síntese de MMP- 2 em relação ao controle negativo (p<0,05). Sendo assim, a densidade de 4 J/cm2 foi selecionada para o estudo 2. E no estudo 2, a combinação de FBM+NA aumentou a proliferação e a migração dos HFG na presença ou ausência de TNF-α (p<0,05) e promoveu síntese de MMP-2 similar ao controle negativo (p>0,05). Para a síntese de IL-6, FBM+NA foram estatisticamente semelhantes ao controle negativo (p>0,05) e para FBM+NA na presença de TNF-α apresentaram redução significativa da síntese de IL-6 em relação ao controle positivo (TNF-α) (p>0,05). O tratamento de FBM+NA apresentou síntese de TIMP-1 estatisticamente semelhante ao controle negativo (p>0,05). A FBM+NA na presença de TNF-α, promoveu menor intensidade de fluorescência, indicando modulação da atividade gelatinolítica induzida por essas terapias. Dessa forma, a FBM com 4 J/cm2 associado a NA apresenta um potencial sinérgico in vitro resultando em aumento da proliferação e migração celular dos fibroblastos gengivais humanos e menores níveis de síntese de MMP-2 e IL-6, sem alterar a síntese de TIMP-1. E a associação dessas terapias na presença de TNF-α indicou a modulação da atividade gelatinolítica, favorecendo estas funções celulares que estão relacionadas a aceleração do reparo tecidual.
Eficácia de compostos com alvos distintos no controle de biofilmes de Streptococcus mutans e Candida albicans
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-24) Lobo, Carmélia Isabel Vitorino; Furlan, Marlise Inêz Klein [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A doença cárie é um problema de saúde pública mundial, causada por biofilme patogênico modulado por uma dieta rica em açúcares (principalmente, sacarose). A associação de Candida albicans e Streptococcus mutans tem sido encontrada em biofilmes de lesões clínicas de cárie da infância. O biofilme misto dessas duas espécies é mais tolerante à tratamentos tópicos com agentes que controlam e diminuiem a virulência de biofilme simples de S. mutans. Portanto, avaliou-se as atividades antimicrobiana, antibiofilme e citotóxica de seis compostos com possíveis alvos em S. mutans e C. albicans: terpenóide (tt-farnesol ou Far), flavonoide (mirecetina ou Mir), três hidroxichalconas (2’ hidroxichalconas: AGN e R815; 4’ hidroxichalcona: C135) e um agente modulador da síntese de ácido lipoteicóico (composto 1771). Assim, determinou-se o potencial antimicrobiano (antibacteriano e antifúngico) e antibiofilme (modelos em placas de poliestireno: biofilmes iniciais de 24h e pré-formados de 48h) dos compostos isolados contra os microrganismos isolados. Após, combinou-se os compostos e concentrações promissoras entre si e com e sem flúoreto de sódio (F) para avaliação antibiofilme contra biofilmes mistos (iniciais e pré-formados). Posteriormente, avaliou-se a eficácia da aplicação tópica (5 min) dos compostos promissores contra biofilmes mistos formados em discos de hidroxiapatita com película salivar em 28h (expressão gênica) e 43h [população microbiana, biomassa, proteinas na porção insolúvel, componentes da matriz extracelular (exopolissacarídeos solúveis em água e em álcali, eDNA e proteinas), estrutura 3D e microscopia eletrônica de varredura (MEV) do biofilme]. Ainda, determinou-se o efeito citotóxico dos tratamentos usados para a aplicação tópica sobre monocamanda de queratinócitos orais. Os testes estatísticos consideraram α=0,05. Dentre os agentes avaliados, C135, Far, Mir e 1771 foram promissores para as atividades antimicrobiana e antibiofilme sobre biofilme simples de cada espécie (24 e 48h). Esses compostos combinados com e sem flúor foram eficazes contra as duas espécies microbianas (biofilme misto inicial); entretanto C135+Far+Mir, C135+Far+F e todos compostos combinados foram eficazes contra biofilmes mistos pré-formados. Os biofilmes mistos tratados topicamente com C135+Far+F apresentaram menor expressão gênica para genes de C. albicans associados à síntese (BGL2, FKS1) e remodelagem de -glucanos (XOG1, PHR1, PHR2) (componentes da matriz extracelular), estresse oxidativo (SOD1), efluxo de fármacos (CDR1, ERG11) e maior expressão do gene de S. mutans nox1 (tolerância à estresses oxidativo e ácido); já C135+Far resultou em menor quantidade de exopolissacarídeos insolúveis (quantificação bioquímica), biomassa e proteínas na porção insolúvel dos biofilmes, e redução de expressão de BGL2, ERG11, SOD1 e PHR2. A quantificação dos microrganismos e expopolissacarídeos a partir da microscopia confocal mostrou menor biovolume e porcentagem de cobertura da estrutura 3D para C135+F, C135+Far+F e C135; e nas imagens de MEV, C135+Far e C135+Far+F mostraram C. albicans apenas na forma de levedura. A exposição aos tratamentos por 30 min, mostrou citotoxicidade moderada para C135+F e C135 enquanto todos tratamentos contendo Far e a clorexidina (0,12%) foram altamente citotóxicos. Portanto, as formulações avaliadas afetaram alvos distintos dos biofilmes simples e misto de S. mutans e C. albicans; com efeito mais pronunciado contra o fungo em biofilmes mistos.
Avaliação da performance mastigatória, força máxima de mordida e fluxo salivar em pacientes idosos edentados reabilitados com dois tipos de próteses
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-23) Lima, Amanda Laísa de Oliveira; Arioli Filho, João Neudenir [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Considerando a importância da reabilitação bucal na nutrição de pacientes idosos desdentados totais, a performance mastigatória (PM) é um fator resultante à perda de dentes naturais e sua avaliação é importante. Este trabalho é um estudo do tipo observacional, transversal, não analítico. O objetivo foi avaliar a correlação entre PM, força máxima de mordida (FMM) e fluxo salivar (FS) em pacientes idosos edêntulos reabilitados com dois tipos de próteses. Para avaliar a PM, FMM e o FS os participantes foram divididos em dois grupos: G1 - paciente portadores de próteses totais bimaxilares convencional (n=22) e; G2 - pacientes com prótese total superior e prótese total implanto-suportada inferior (n=22). A PM foi avaliada utilizando goma de mascar (Vivident Fruitswing), e após 10, 20 e 40 ciclos a goma foi analisada pelo método digital (software ViewGum©️). Para a FMM um gnatodinamômetro foi utilizado e o FS foi mensurado após os pacientes mastigarem uma goma de parafina. A estatística descritiva e inferencial foi realizada e a comparação da PM entre os indivíduos do G1 e G2 em relação aos ciclos mastigatórios foi realizada com ANOVA de medida repetida mista. A correlação entre PM, FMM e FS foi verificada e um estudo de regressão linear realizado para avaliar o impacto das variáveis na PM dos indivíduos. Utilizando um nível de significância de 5%, foi possível obter como resultado que em ambos os grupos, a PM foi maior quando proposto mastigações com maior número de ciclos mastigatórios, entretanto o G2 apresentou maior PM, qualquer que fosse o número de ciclos mastigatórios, assim como a média da FMM foi superior ao G1. A CM apresentou correlação estatisticamente significativa com FMM. O estudo de regressão apontou que o tipo de prótese foi a variável que mais impactou na CM. Conclui-se que o tratamento reabilitador utilizando implantes associado ao número de ciclos são fatores que influenciam no aumento da PM em indivíduos desdentados totais principalmente naqueles com classe social mais elevada.
O efeito do tratamento térmico regenerativo após desgaste da zircônia na resistência ao cisalhamento e na taxa de liberação de energia de fratura da união zircônia/porcelana de cobertura
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-01) Rimachi Hidalgo, Karem Janeth; Pinelli, Lígia Antunes Pereira [UNESP]; Ferreira, Eduardo Bellini; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia do tratamento térmico regenerativo (TTR) a 1000 °C por 30 min na melhoria da adesão entre cerâmicas bicamadas compostas de porcelana de cobertura (PC) e zircônia (Z), após desgaste prévio da zircônia. Para tanto, a resistência ao cisalhamento e a tenacidade da adesão foram determinadas experimentalmente. A tenacidade foi determinada pela taxa de liberação da energia elástica armazenada, ou energia de fratura (G), em corpos de prova bicamada entalhados e com tração na PC em flexão em quatro pontos. Diferentes geometrias de corpos de prova para testes de cisalhamento foram avaliadas pelo método dos elementos finitos, a partir de 10 modelos virtuais em 3D construídos com o software ANSYS® 19.1, variando-se a altura e a posição da PC na interface com a Z. Tais modelos foram organizados em blocos denominados REFERENCE (PC e Z com mesma altura), TOP (interface coincide no topo, e a altura da PC diminui da base em direção ao topo), MID (altura da PC diminui a partir do topo e da base em direção ao centro da interface com a Z) e DOWN (interface coincide na base, e a altura da PC diminui do topo em direção à base). Em todos os modelos, a Z foi engastada e uma carga de 150 N foi aplicada na PC a uma distância de 0,2 mm da interface. A partir da análise das tensões máximas resultantes, o modelo REFERENCE foi considerado mais adequado para os ensaios de cisalhamento, e essa geometria foi utilizada para confeccionar espécimes de zircônia 3Y-TZP (Lava Plus, 12,5 x 11 x 0,9 mm) distribuídos em 3 grupos (n=15): controle (C), desgastado (D) e desgastado com TTR à 1000 °C por 30 min (DT). O desgaste (0,3 mm) da Z foi realizado em dispositivo padronizador utilizando pedra diamantada MasterCeram® em baixa rotação sem irrigação. O TTR foi realizado em forno convencional de laboratório. A superfície da Z resultante dos tratamentos foi caracterizada por difração de raios X (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e perfilometria óptica. As amostras foram recobertas com PC IPS e.max Ceram (2,5 x 11 x 0,9 mm). Os ensaios de cisalhamento foram realizados com velocidade de deslocamento do atuador de 0,5 mm/min. A taxa de liberação de energia elástica armazenada foi avaliada em espécimes de Z de 40 x 5 x 1,5 mm recobertos com 1,5 mm de espessura de PC, segundo a mesma metodologia utilizada nos espécimes de cisalhamento. Ensaios de flexão em 4 pontos foram realizados com limite de carga de 120 N e velocidade do atuador de 0,5 mm/min. DRX, MEV e perfilometria foram analisados descritivamente. Os resultados dos ensaios de cisalhamento e energia de fratura (G) foram avaliados de acordo com o teste estatístico t adotando-se ∝ = 0,05. O desgaste com pedra diamantada aumentou a rugosidade superficial da zircônia; o tratamento térmico por sua vez retornou os valores de rugosidade para os encontrados no grupo controle. Não houve diferença estatisticamente significante na resistência da união da interface entre procedimentos adotados (desgaste seguido ou não de tratamento térmico, p = 0,37). Também se observou que a taxa de liberação de energia de fratura não se alterou nos grupos desgastado e desgastado seguido de tratamento térmico regenerativo (p = 0,77), em comparação com o grupo controle (p = 0,12). Conclui-se que o tratamento térmico regenerativo a 1000 oC por 30 minutos não influenciou a resistência ao cisalhamento e a taxa de liberação de energia da união zircônia/porcelana de cobertura.
Microcristais de tungstato de prata, molibdato de prata e vanadato de prata: biocompatibilidade e atividade antifúngica sobre biofilme de Candida albicans
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-10) Pimentel, Bruna Natália Alves da Silva [UNESP]; Vergani, Carlos Eduardo [UNESP]; Barbugli, Paula Aboud; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A presente tese foi dividida em dois estudos que tiveram como objetivos (1) avaliar a citotoxicidade dos microcristais vanadato de prata (α-AgVO3; 3,9 µg/mL e 15,62 µg/mL), tungstato de prata (α-Ag2WO4; 7,81 µg/mL) e molibdato de prata (β-Ag2MoO4; 15,62 µg/mL) sobre células inflamatórias THP-1 e macrófago em monocamada, bem como quantificar a produção de superóxido, citocinas pró-inflamatórias e metaloproteinases de matriz (MMP); (2) avaliar a atividade antifúngica de α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4, sobre biofilme de Candida albicans cultivados sobre modelos de co-cultivo tridimensional (3D). A citotoxicidade e a resposta inflamatória de α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4 foram avaliadas sobre os modelos de co-cultivo 3D. No estudo 1, a viabilidade celular de THP-1 e macrófagos, após 24 horas de contato com α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4, foi determinada a partir do ensaio de alamarBlueTM. A produção da espécie reativa de oxigênio (superóxido) foi quantificada por fluorimetria e visualizada por microscopia de fluorescência confocal. Já a produção de citocinas e metaloproteinases de matriz foi quantificada por citometria de fluxo e ELISA, respectivamente. Os microcristais α-Ag2WO4, β-Ag2MoO4 e α-AgVO3, na concentração fungicida mínima (CFM: 15,62 µg/mL), promoveram pequena diminuição na viabilidade de THP-1 (77,3%, 69,29% e 73,96%, respectivamente). Já em macrófagos, apenas α-AgVO3 (CFM) foi capaz de diminuir a viabilidade celular (70,36%). Em ambas as células foram observadas produção de superóxido. Com relação às citocinas, houve aumento na produção de IL-8 por ambas as células, bem como aumento na produção de IL-1β por macrófagos. A MMP-8 não foi detectada no sobrenadante de THP-1 em nenhuma condição avaliada, enquanto a MMP-9 teve sua produção reduzida nas células THP-1 expostas a α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4. Já os sobrenadantes dos macrófagos apresentaram diminuição de MMP-8 e -9, independente do microcristal ao qual a célula foi exposta. No estudo 2, um modelo de co-cultivo 3D envolvendo três linhagens celulares foi desenvolvido e validado. Nestes modelos foi determinada a citotoxicidade, pelo ensaio colorimétrico MTT, de α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4, nas mesmas concentrações testadas no estudo 1. Foi avaliada também a ação dos microcristais sobre biofilmes de Candida albicans crescidos sobre os modelos 3D, simulando um processo infeccioso. Além disso, a modulação da resposta inflamatória foi verificada a partir da dosagem de citocinas pró-inflamatórias, na ausência e na presença dos microcristais, tanto nos modelos com infecção, quanto nos modelos sem infecção. O modelo de co-cultivo 3D se mostrou adequado para avaliar a biocompatibilidade de biomateriais bem como processos infecciosos. Entre os microcristais avaliados, apenas α-AgVO3 mostrou-se citotóxico, além de não ter sido efetivo contra o biofilme de C. albicans e não ter modulado a resposta inflamatória; α-Ag2WO4 apresentou atividade contra biofilme de C. albicans, com redução de 1,5 log10, semelhante à redução observada no controle com a droga padrão (fluconazol), e induziu a produção de IL-6, IL-8 e IL-1β; β-Ag2MoO4 não apresentou atividade contra o biofilme de C. albicans, pesar de ter sido biocompatível e capaz de diminuir a produção de TNFα nos modelos infectados. Com base nos resultados destes estudos, α-Ag2WO4 foi considerado um material promissor no tratamento de infecções por C. albicans.
Estratégia com tt-farnesol, miricetina e composto 1771 associados à nanopartícula carreadora é eficaz na prevenção de biofilmes cariogênicos formados por Streptococcus mutans e Candida albicans in vitro
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-11-08) Rocha, Guilherme Roncari; Furlan, Marlise Inêz Klein [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O desenvolvimento de terapias eficazes para o controle de biofilme oral é um desafio. Agentes tópicos usados para tratar e/ou prevenir doenças orais causadas por biofilme, geralmente, não são mantidos na boca por um período suficiente para que os mesmos possam exercer seu potencial terapêutico máximo. Assim, foram desenvolvidas nanopartículas carreadoras (NPC) de fármaco que se aderem à hidroxiapatita, à película salivar e aos exopolissacarídeos. As NPC possuem elementos pH sensíveis para a liberação controlada de fármacos em nichos acídicos de biofilmes patogênicos. O tt-farnesol e miricetina podem ser carreados e liberados com sucesso pelas NPC, diminuindo a biomassa de biofilme de Streptococcus mutans. O composto 1771 é um novo fármaco para o controle da síntese de ácidos lipoteicóicos - estruturas da parede celular de espécies Gram-positivas - responsáveis por co-agregação microbiana. O biofilme de S. mutans e Candida albicans é extremamente patogênico levando ao desenvolvimento de lesões cariosas severas em um curto período in vivo. Portanto, o objetivo foi investigar se o composto 1771 consegue ser carreado pela NPC e também o tratamento contendo a associação dos três fármacos (NPC-farnesol-miricetina-1771) consegue prevenir a formação do biofilme cariogênico mono-espécie formado por S. mutans com superfície tratada desde o início da formação (regime de prevenção) e multi-espécie formado por S. mutans e C. albicans sob o regime de prevenção e o biofilme tratado posteriormente a sua formação sobre a superfície (regime de controle) in vitro. Assim, foi necessário sintetizar uma nanopartícula e conferir sua interação com o composto 1771 e caracterizá-la, testando, posteriormente as soluções contra biofilmes cariogênicos. Os testes de caracterização da nanopartícula e da associação da nanopartícula com 1771 incluíram tamanho, carga (potencial zeta), absorbância, fluorescência, cromatografia de permeação em gel e ressonância magnética nuclear. O polímero criado foi formado por dois blocos sendo o bloco 1 (corona) responsável aderir aos exopolissacarídeos e película salivar por ser catiônica e carrear os fármacos: miricetina e composto 1771. O bloco 2 (core) é responsável por carrear fármacos insolúveis como o tt-farnesol, além de ser sensível ao pH, liberando-os principalmente com a queda do pH. Os testes de absorbância e fluorescência confirmaram a forte interação entre NPC com o composto 1771. Os demais testes caracterizaram a carga de superfície da NPC e tamanho de +23 mV e 48,3 d.nm para +32 mV e 48,3 para 75 d.nm pré/pós adição dos fármacos, respectivamente. Os testes microbiológicos foram: concentração antimicrobiana mínima usando culturas planctônicas e foram preparados dois regimes de tratamentos utilizando biofilmes formados sobre discos de hidroxiapatita com película salivar. Foi acompanhado o pH do meio de cultura, biomassa dos biofilmes e população. Foram realizadas microscopias confocal e eletrônica de varredura para caracterizar a estrutura tridimensional dos biofilmes. Menores concentrações dos fármacos carreados inibiram o crescimento bacteriano planctônico, mas não inibiram o crescimento do fungo e a NPC vazia não afetou ambos os microrganismos. A associação dos fármacos carreados previne a formação de biofilmes ao inibir a queda do pH, crescimento da população microbiana e a produção de matriz extracelular, consequentemente, a biomassa. Ocorreu melhor eficácia nos tratamentos NPC-farnesol-1771 e NPC-farnesol-miricetina-1771 no regime de prevenção, mas não controlou no regime de tratamento. Portanto, a associação dos fármacos, especialmente tt-farnesol e composto 1771 associados ao sistema de carreamento preveniu a formação de biofilme multi-espécie sobre a superfície de hidroxiapatita.
Sintomas de sensibilização central e alterações psicossociais interferem na associação entre DTM dolorosa, migrânea e cefaleia atribuída à DTM?
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-09-27) Braido, Guilherme Vinícius do Vale [UNESP]; Gonçalves, Daniela Aparecida de Godoi [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Introdução: A disfunção temporomandibular (DTM) é uma das condições mais frequentes de dor na região orofacial e sua fisiopatologia envolve processos de sensibilização periféricos e centrais. A DTM está frequentemente associada com outras comorbidades, como a migrânea (MIG) e a cefaleia atribuída a DTM (c-DTM). A Sensibilização Central (SC) está frequentemente presente nos quadros envolvendo comorbidades. As alterações somatossensoriais da SC podem ser avaliadas por meio dos testes quantitativos sensoriais (Quantitative Sensory Testing- QST). Objetivos: Investigar se as funções somatossensoriais, os sintomas somáticos relacionados à SC e os aspectos psicossociais diferem de acordo com a presença de MIG ou MIG + c-DTM em indivíduos com DTM dolorosa. Material e métodos: Trata-se de um estudo observacional, do tipo transversal, realizado em uma amostra de indivíduos adultos com 20 a 65 anos de idade. A amostra foi estratificada em três grupos: 1) DTM dolorosa; 2) DTM dolorosa + MIG e 3) DTM dolorosa + MIG + c-DTM. A classificação da DTM foi realizada por meio do Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC/TMD). O Eixo II do RDC/TMD foi utilizado para avaliação das alterações psicossociais relacionadas com a dor. Para a identificação de alterações somatossensoriais foram aplicados os testes de somação temporal da dor (ST), limiar de dor à pressão (algometria - LDP) e modulação condicionada da dor (Conditioned Pain Modulation – CPM). Sintomas de SC foram acessados pelo inventário de SC (Central Sensitization Inventory - CSI). A migrânea foi identificada de acordo com os critérios da Classificação Internacional de Cefaleias– 3ª. Edição (CIC-3). E a c-DTM de acordo com os critérios propostos por Schiffman et al. 2012. Análises descritivas foram realizadas para caracterizar a amostra. Variáveis quantitativas foram avaliadas pelo teste de Kruskall Wallis e as variáveis qualitativas pelo teste de Qui-quadrado e Exato de Fisher. Para análise dos QSTs, CPM e CSI-BP foi aplicado o teste de ANCOVA. Foi considerado o nível de significância de 5%. Resultados: A amostra final foi composta por 92 indivíduos (18 apenas DTM, 38 DTM+MIG e 36 DTM+MIG+c-DTM simultaneamente). Houve diferença significante entre os grupos com relação ao sexo (p=0,028), sendo que as mulheres foram maioria em todos os grupos estudados. Não foram encontradas diferenças entre os grupos para a ST na área trigeminal (Tg) (F=0,661; p=0,520) e na área extratrigeminal (ETg) (F=1,372; p=0,261). Foi encontrada diferença entre os grupos para o teste de LDP na área Tg (F=7,027; p=0,001) e ETg (F=9,641; p<0,001). Com relação ao CPM, não foram encontradas diferenças significativas para as médias absolutas na área Tg (F=0,190, p=0,828) e ETg (F=0,211, p=0,810), e nem para as médias relativas destas mesmas áreas (F=0,009, p=0,471 e F=0,529, p=0,591, respectivamente). Também não houve diferença entre os grupos em relação ao CSI-BP (p=0,099); os sintomas de depressão (p=0,800), e de ansiedade (p=0,918). O grupo DTM + MIG + c-DTM apresentou maior Intensidade de Dor Característica (p=0,001), Pontos de Incapacidade (p=0,045), Graduação Dor Crônica (p=0,007) e maiores escores de somatização (p=0,012), quando comparados com os outros grupos. Conclusão: As medidas do teste de CPM e ST não indicaram diferença entre os grupos, enquanto a hiperalgesia mecânica (LDP) foi mais pronunciada no grupo com DTM, Migrânea e c-DTM. Além disso este grupo apresentou maiores alterações psicossociais (Intensidade de Dor Característica, Pontos de Incapacidade, Graduação de Dor Crônica, Sintomas Físicos não-específicos). A alteração somatossensorial pode explicar apenas parcialmente os mecanismos fisiopatológicos da DTM dolorosa e suas comorbidades, além de apontar para efeitos aditivos, principalmente psicossociais, frente a presença de cefaleias associadas à DTM.
Eficácia dos extratos de diferentes espécies de Cryptocarya (Lauraceae) sobre biofilme de Candida albicans e biocompatibilidade: estudos in vitro e in vivo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-06) Zoccolotti, Jacqueline de Oliveira; Cavalheiro, Alberto José; Jorge, Janaina Habib [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Candidíase é uma infecção oportunista da mucosa causada por espécies de Candida, sendo a Candida albicans o agente etiológico mais comum. O uso de terapias antifúngicas deve ser limitado por causa da sua toxicidade, das baixas taxas de efetividade, da indução de resistência fúngica e baixa solubilidade. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia dos extratos de diferentes espécies de Cryptocarya sobre biofilme de Candida albicans e sua biocompatibilidade por meio de estudos in vitro e in vivo. Em um primeiro estudo, os extratos foram avaliados em relação à Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) em células planctônicas de C. albicans bem como a Concentração Fungicida Mínima dessas células em biofilme (CFMb). Tais análises foram realizadas por meio de contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Posteriormente, um biofilme maduro (48 horas) foi formado sobre amostras de resina acrílica para bases de próteses e os efeitos fungicidas dos extratos sobre esse biofilme também foram avaliados por meio dos testes AlamarBlue® e contagem das UFC/mL. Além disso, foi realizada a microscopia de varredura confocal a laser para análise qualitativa e quantitativa do biofilme após o tratamento proposto. Em um segundo estudo, a citotoxicidade de extratos das espécies do gênero Cryptocarya, que apresentaram os melhores resultados nos testes anteriores, foi avaliada por meio do teste AlamarBlue®, utilizando-se queratinócitos orais normais (NOK). Por fim, foi determinada a eficácia do extrato selecionado nos estudos in vitro na inativação de biofilme de C. albicans presente no dorso lingual de camundongos com candidose induzida. Para isso, após os tratamentos com a planta medicinal, os fungos presentes no dorso lingual de camundongos foram coletados e analisados por meio dos testes AlamarBlue® e UFC/mL. Foi realizada a análise histológica do tecido da língua do camundongo após os diferentes tratamentos. Para cada variável, os dados foram submetidos à análise estatística mais adequada, com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que os extratos obtidos das folhas e frutos de C. moschata e C. mandioccana foram capazes de reduzir o número de unidades formadoras de colônias e o metabolismo celular do biofilme de C. albicans formado sobre amostras de resina acrílica para base de próteses, comprovando seu efeito antimicrobiano. Esses extratos também reduziram a viabilidade das células epiteliais quando avaliados por meio do teste AlamarBlue® E no estudo in vivo, em que foi utilizado o extrato de folha de C. moschata observamos histologicamente que não houve dano celular na língua dos camundongos, e houve diminuição do biofilme de Candida semelhante ao uso de nistatina. Podemos concluir que o extrato foi eficaz contra o biofilme de C. albicans e foi biocompatível no estudo in vivo
Influência de Streptococcus mutans na construção da matriz durante o desenvolvimento de biofilmes microcosmos expostos a desafio nutricional
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-03-30) Florez Salamanca, Elkin Jahir; Furlan, Marlise Inêz Klein [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A cárie é a doença crônica mais prevalente no mundo. Sua fisiopatologia está associada a fatores como: biofilmes (microrganismos e matriz extracelular); dieta rica em carboidratos; tecidos dentários e tempo de interação. Embora muitos modelos laboratoriais tenham simplificado o estudo da cárie focando apenas no entendimento em microrganismos específicos, mimetizar a cavidade bucal para o controle das variáveis que influenciam a cárie ainda é um dos maiores desafios. O objetivo do estudo foi avaliar de forma longitudinal a importância de Streptococcus mutans na construção da matriz extracelular e na estruturação de biofilmes polimicrobianos associados a cárie. Foram desenvolvidos biofilmes microcosmos para avaliar o desenvolvimento destas comunidades. Para isso a microbiota salivar humana foi inoculada sobre discos de esmalte bovino em quatro desafios nutricionais ou modelos de biofilme in vitro. Foram avaliados: pH dos meios de cultura; microdureza e rugosidade dos discos de esmalte; biomassa total e dinâmica populacional (via UFC. mL-1) dos biofilmes. Entre os modelos estudados o modelo 3 (M3) – ‘Três refeições diárias’ apresentou características mais próximas da cavidade bucal, uma vez que os valores de pH permaneceram próximos do neutro, apresentaram desmineralização sutil e progressiva do esmalte, não favoreceram grupos microbianos específicos e permitiram o acúmulo do biofilme, o que foi evidenciado pelo aumento da biomassa e da microbiota total. M3 foi utilizado para testar duas estratégias de inoculação única (UNI) e múltipla (MULTI), a segunda visando simular a colonização secundária dos microrganismos. Foram avaliados: pH dos meios de cultura; os biofilmes (arquitetura; dinâmica populacional microbiana via UFC. mL-1, sequenciamento de DNA e qPCR; biomassa insolúvel e componentes da matriz extracelular); e desmineralização do esmalte (via microdureza). As flutuações observadas no pH foram semelhantes as relatadas na cavidade bucal, observando-se uma acidificação após ingestão de carboidratos e a ação tamponante da saliva, simulada com o retorno do caldo de cultura de saliva com um pH neutro. A configuração espacial foi semelhante a encontrada em biofilmes orais associados com cárie, representada por arquiteturas do tipo ouriços (hedgehog) e espigas de milho (corncob). A representatividade dos estreptococos do grupo mutans foi ≤ 2 % da microbiota total cultivável. O gênero Streptococcus foi o mais abundante, porém, S. mutans não foi detectado em nenhuma amostra via sequenciamento. Na estratégia MULTI foi detectada uma maior diversidade microbiana. Ao quantificar o número de células bacterianas via qPCR observou-se que S. mutans representa < 0,01 % da saliva e < 0,005 % nos biofilmes. Conforme o envelhecimento do biofilme, houve um aumento da biomassa, dos exopolissacarídeos e do DNA extracelular na matriz nas duas estratégias. O acúmulo destes componentes está associado a uma estrutura coesa que pode favorecer a formação de nichos ácidos. O amadurecimento do biofilme e a desmineralização do esmalte aconteceu de forma independente à baixa proporção de S. mutans e da estratégia de inoculação, diminuindo o protagonismo de certas espécies em uma doença que possuí caráter multifatorial.
Síntese e avaliação de biomateriais associados a proteínas da matriz extracelular para a regeneração do tecido pulpar
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-06-30) Leite, Maria Luísa de Alencar e Silva; Costa, Carlos Alberto de Souza [UNESP]; Passos, Diana Gabriela Soares dos; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A regeneração tecidual guiada tem sido considerada uma estratégia promissora para substituir terapias endodônticas convencionais em casos de dentes com rizogênese incompleta. Portanto, no presente estudo, proteínas da matriz extracelular (fibronectina, laminina e colágeno tipo I) foram avaliadas a fim de selecionar um potente agente de sinalização sobre células da papila apical humana (hAPCs). Em seguida, com o objetivo de desenvolver biomateriais inovadores para regeneração pulpar de dentes com rizogênese incompleta, um scaffold tubular de nanofibras e um hidrogel de preenchimento foram sintetizados e associados à proteína da matriz extracelular com maior potencial bioativo. Assim, foi possível avaliar a influência dos biomateriais sobre a migração, adesão, proliferação e síntese de colágeno pelas hAPCs. No Artigo 1, diferentes concentrações (1, 5 e 10 µg/mL) de fibronectina (FN), laminina (LM) e colágeno tipo I (COL) foram aplicadas no fundo de compartimentos não tratados de placas de 96 compartimentos esterilizadas. Como controles negativo (CN) e positivo (CP), compartimentos não tratados e pré-tratados, respectivamente, foram usados. Após semear as hAPCs nos diferentes substratos, os seguintes parâmetros de bioatividade foram avaliados: adesão, viabilidade, espalhamento, síntese de colágeno total/colágeno tipo I e expressão gênica (ITGA5, ITGAV, COL1A1, COL3A1). Maior potencial de adesão foi observado para todas as concentrações de FN, sendo o efeito dose-dependente. Os melhores resultados de viabilidade e espalhamento celular, bem como síntese de colágeno ocorreram quando 5 e 10 µg/mL de FN foi utilizado. FN na concentração de 10 µg/mL aumentou a expressão de ITGA5, ITGAV e COL1A1 em comparação ao CP. Embora maiores valores de bioatividade tenham sido demostrados pela LM (5 e 10 µg/mL) em comparação ao CN, essas concentrações de LM exibiram menores efeitos bioativos em relação ao CP. As concentrações de COL avaliadas não mostraram bioatividade sobre as células em cultura. Portanto, concluiu-se que FN nas concentrações de 5 e 10 µg/mL exerceu efeitos bioativos mais intensos sobre as hAPCs. Então, no Artigo 2, a técnica de electrospinning foi empregada para obter, por meio do uso de poli-caprolactona (PCL), scaffolds de nanofibras aleatórias (NR) e alinhadas (NA), os quais tiveram suas propriedades biológicas avaliadas. As melhores formulações de NR e NA foram associadas a 0, 5 ou 10 µg/mL de FN sendo a bioatividade determinada. Finalmente, scaffolds tubulares de NR e NA revestidos com FN foram desenvolvidos e seu potencial quimiotático foi analisado usando um modelo in vitro para simular a regeneração pulpar de dentes com rizogênese incompleta. Foi demonstrado que todos os scaffolds testados são citocompatíveis. No entanto, NR e NA à base de 10% de PCL promoveram maior proliferação, adesão e espalhamento de hAPCs. Células poligonais e alongadas foram observadas em NR e NA, respectivamente. Quanto maior a concentração de FN nos scaffolds, maior a migração, viabilidade, proliferação, adesão e espalhamento celular, bem como a síntese de colágeno e expressão gênica (ITGA5, ITGAV, COL1A1, COL3A1). Além disso, os scaffolds tubulares de NA associados com FN (10 µg/mL) mostraram maior potencial quimiotático sobre as APCs. Então, concluiu-se que os scaffolds tubulares de NA revestidos com FN são biomateriais promissores, os quais talvez possam ser usados, no futuro, para promover regeneração pulpar mediada por hAPCs em casos de dentes com rizogênese incompleta. No Artigo 3, hidrogéis com variada proporção de colágeno e gelatina (Col/Gel; v/v) foram inicialmente preparados e avaliados de acordo com os seguintes grupos: Colágeno (controle positivo); Col/Gel 4:6; Col/Gel 6:4; Col/Gel 8:2. A viabilidade, adesão/espalhamento das hAPCs semeadas nos hidrogéis foi determinada. Diferentes concentrações de FN (0, 5 ou 10 µg / mL) foram incorporadas à melhor formulação do hidrogel de colágeno/gelatina selecionada. Em seguida, as hAPCs semeadas nos biomateriais foram analisadas quanto a migração, viabilidade, adesão/espalhamento e expressão gênica de ITGA5, ITGAV, COL1A1 e COL3A1. As células do grupo Col/Gel 8:2 exibiram a maior viabilidade e adesão/espalhamento, semelhante ao observado no grupo controle. Ainda, as hDPCs exibiram maior migração, viabilidade, adesão/espalhamento e expressão gênica de marcadores envolvidos na regeneração pulpar quanto maior a concentração de FN incorporada ao hidrogel de colágeno/gelatina. Assim, concluiu-se que um hidrogel de colágeno/gelatina com 10 µg/mL de FN apresentou potente efeito bioativo e quimiotático sobre hAPCs em cultura.
Influência de um scaffold polimérico de nanofibras e de um primer polimérico catalisador sobre a alteração de cor e citotoxicidade do clareamento dental de consultório
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-06-01) Ortecho Zuta, Uxua; Costa, Carlos Alberto de Souza [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo deste estudo foi desenvolver produtos poliméricos capazes de atuar como coadjuvantes no clareamento dental de consultório, acelerando a alteração de cor e reduzindo a citotoxicidade deste tipo de terapia profissional. Para isso, foi desenvolvido um scaffold polimérico de nanofibras (ScP) e um primer polimérico contendo a enzima horseradish peroxidase (PrP). Após avaliar os produtos poliméricos quanto sua caracterização, temperatura, pH e seus efeitos na cinética de degradação do H2O2, a influência do uso individual ou associado do ScP e o PrP sobre a alteração de cor promovido pelo clareamento dental de consultório foi determinado em espectrofotômetro UV-Vis (∆E). Para este teste, um gel com 35% de H2O2 foi aplicado por 3x15 min sobre discos de esmalte/dentina manchados artificialmente (n=8), sendo o esmalte previamente recoberto ou não com ScP e/ou PrP. Discos submetidos apenas ao clareamento de consultório ou não tratados foram usados como controles. Para o teste de citotoxicidade, esses mesmos procedimentos foram realizados sobre discos de esmalte/dentina adaptados em câmaras pulpares artificiais (CPAs). Os extratos (meio de cultura + componentes do gel que se difundiram pelos discos) foi recolhido e imediatamente aplicado por 60 minutos sobre células odontoblastóides MDPC-23. Então, a viabilidade (teste de MTT), morfologia (MEV) e estresse oxidativo (carboxy-H2DCFDA) celular foram avaliados, sendo a difusão trans-amelodentinária de H2O2 quantificada (ensaio violeta leuco-cristal). Os dados obtidos foram submetidos ao teste ANOVA, complementado por Tukey, com nível de significância de 5%. O uso individual ou associado dos ScP e PrP aumentou a formação de radicais livres e radical hidroxila (HO•), esses efeitos favoreceram a alteração de cor e diminuição da citotoxicidade dos tratamentos em comparação ao controle, onde apenas o gel clareador foi aplicado sobre o esmalte (p0,05), reduziu a difusão de H2O2, bem como diminuiu o estresse oxidativo celular. Apesar dos melhores resultados gerais terem sido obtidos quando do uso integrado entre ScP e PrP, o procedimento clareador usando os produtos poliméricos ainda reduziu em cerca de 34% a viabilidade das células MDPC-23. Assim, essa mesma estratégia de clareamento passou a ser avaliada em tempos mais curtos (30 e 15 minutos), porém com 3 sessões consecutivas de aplicação. Dentro desta condição, o gel clareador aplicado por 15 minutos sobre o esmalte revestido com ScP e PrP determinou alteração de cor semelhante ao clareamento convencional de consultório e citotoxicidade estatisticamente igual ao grupo onde nenhum tratamento foi realizado sobre os discos de esmalte/dentina (100% de viabilidade celular) (p0,05). Assim, foi possível concluir que o revestimento do esmalte com o scaffold polimérico de nanofibras e o primer polimérico catalisador previamente a aplicação por 15 minutos do gel clareador com 35% de H2O2, além de ter proporcionado alteração de cor semelhante ao clareamento convencional de consultório, também reduziu significativamente a citotoxicidade trans-amelodentinária causada pela técnica profissional.
Engenharia tecidual e biotecnologia aplicadas no desenvolvimento de scaffolds multifuncionais para estimular o reparo do complexo dentina-polpa
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-02-02) Bordini, Ester Alves Ferreira; Passos, Diana Gabriela Soares dos; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este trabalho teve por objetivo empregar diferentes técnicas de engenharia tecidual e biotecnologia para o desenvolvimento de scaffolds biomiméticos em associação com moléculas com reconhecido potencial osteogênico, visando seu emprego em estratégias cell-homing para reparo do complexo dentina-polpa. A primeira estratégia foi baseada na formulação de scaffolds de quitosana (CH) contendo hidróxido de cálcio (Ca) e beta-glicerofosfato de sódio (βGP), sendo realizada sua caracterização físico-química (MEV, EDS, FTIR, perda de massa, grau de porosidade) e biológica in vitro (ensaios de contato direto e extrato). O potencial cellhoming foi testado em um modelo experimental pulp-in-a-chip, onde os scaffolds sem células foram cultivados justapostos a uma cultura 3D das células pulpares humanas sob pressão intra-pulpar simulada. Viabilidade celular (Alamar blue e Live/Dead), adesão/espalhamento (F-actina), migração celular (transwell), deposição cálcio/matriz mineralizada (o-cresolftaleína/Alizarin red), atividade de ALP (ensaio ponto final) e expressão de DSP (imunofluorescência) foram avaliados (n=6; ANOVA/Tukey; α=5%). A partir da incorporação de Ca e βGP em uma formulação específica foi possível desenvolver um scaffold poroso de quitosana contendo nanoglóbulos de cálcio e fosfato depositados sobre sua superfície (CH-Ca-βGP), com grau de degradabilidade controlada. Este scaffold permitiu adequada interação com as células pulpares semeadas sobre os mesmos, apresentando efeito bioestimulador sobre a viabilidade e expressão de marcadores de diferenciação odontogênica (ALP e mineralização), bem como foi capaz de modular a quimiotaxia e diferenciação celular à distância, de forma significativamente superior às demais formulações. Finalmente, o ensaio pulp-in-a-chip demonstrou seu potencial em mobilizar células da cultura 3D para sua superfície, e induzir a expressão de DSP e matriz mineralizada na ausência de suplementação osteogênica. A segunda estratégia foi baseada na formulação de um hidrogel fotopolimerizável de gelatina e metacrilato de metila (GelMA), ao qual foram adicionados nanotubos de haloisita (HNT) contendo dexametasona (DEX), criando-se um sistema de liberação controlada. Estes hidrogéis foram caracterizados quanto a morfologia (MEV), composição física e química (MET/FTIR), degradação enzimática e resistência compressiva. A avaliação biológica foi realizada por meio do contato direto com células pulpares humanas de dentes decíduos (SHEDs), e em modelo de co-cultura a distância com transwells sob estímulo inflamatório (LPS). Foram realizadas análises de viabilidade celular (MTS), atividade de ALP (AnaSpec) e deposição de matriz mineralizada (Alizarin red). A biocompatibilidade foi avaliada por teste de implantação em subcutâneo de ratos, e o potencial bioativo em defeitos críticos em calvária (ANOVA Two-way/Tukey; α=5%). Foi possível desenvolver um hidrogel macro-poroso com adequado módulo de compressão e degradabilidade, capaz de promover liberação controlada da DEX. As células semeadas sobre a superfície do GelMA contendo 5% de HNT-DEX 10% e em modelo de co-cultura sob estímulo inflamatório apresentaram os maiores valores de atividade de ALP e deposição de matriz mineralizada. Este biomaterial não promoveu reação inflamatória tecidual, e foi capaz de aumentar intensamente a deposição óssea in vivo. A partir dos resultados obtidos, podemos concluir que ambos os sistemas desenvolvidos são promissores para aplicação na regeneração dentinária, pois são capazes de interagir positivamente com as células pulpares e estimulam a expressão do fenótipo odontoblástico in vitro e in vivo.
Análise da expressão de proto-oncogenes e genes supressores tumorais em células epiteliais orais normais e neoplásicas promovida por metabólitos de biofilmes simples e misto de Candida albicans e Staphylococcus aureus
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-12-09) Amaya Arbeláez, Maria Isabel; Vergani, Carlos Eduardo [UNESP]; Barbugli, Paula Aboud [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A microbiota oral desempenha um papel importante, tanto no microbioma humano como na saúde. Os micro-organismos presentes na cavidade bucal têm a capacidade de produzir metabólitos e toxinas, gerando relação disbiótica com o hospedeiro e levando ao desenvolvimento de diversas patologias. A inflamação crônica produzida pelo estímulo bacteriano, a inibição da apoptose e produção de espécies reativas de oxigênio, tem sido descritos como mecanismos de ação da microbiota oral na tumorigênese de cabeça e pescoço. Dados do nosso grupo de pesquisa evidenciam que metabólitos derivados de biofilmes simples e misto de Candida albicans e Staphylococcus aureus, são capazes de promover resposta inflamatória e morte celular de queratinócitos orais normais. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão de proto-oncogenes e genes supressores tumorais em células epiteliais orais normais (NOK-si) e neoplásicas (SCC 25 e Detroit 562) estimuladas com metabólitos (fatores solúveis) provenientes de biofilmes simples e mistos de C. albicans e S. aureus. Para a obtenção dos fatores solúveis (FS) produzidos pelos micro-organismos, foram formados biofilmes jovens e maduros simples e mistos de C. albicans e S. aureus, com 16 e 36 horas de cultivo, respectivamente. Os FS foram coletados e incubados com as células epiteliais orais. Primeiramente, foi realizado o ensaio de viabilidade celular por AlamarBlueTM e a morfologia celular foi observada por microscopia confocal para determinar o tempo de exposição das linhagens celulares aos FS dos biofilmes. Realizou-se a análise de perfil do ciclo celular por citometria de fluxo. A análise da expressão de proto-oncogenes e genes supressores tumorais foi realizada por qRT-PCR. Em geral, a exposição aos FS de biofilmes de C. albicans e misto causou redução na viabilidade das células NOK-si e aumento na fase sub G0 do ciclo celular, com diminuição da expressão gênica em HRAS, BRAF, MEK1, AKT, mTOR,TP53, CDKN1A, CDKN1B. No entanto, nesta linhagem, os FS de biofilmes simples de S. aureus produziram uma superexpressão do gene CDKN1A e Bcl-2, seguido pela manutenção da viabilidade celular, e um aumento significativo da população G2/M. Nas células tumorais, SCC 25 e Detroit 562, os estímulos dos FS provenientes dos biofilmes, regularam positivamente proto-oncogenes como HRAS e mTOR, bem como a superexpressão de Bcl-2 e CDKN1A. As células tumorais apresentaram capacidade de sobrevivência mesmo após 24 h de estímulo com FS de 16 h e 36 h, sem mudanças significativas na progressão do ciclo celular para a linhagem SCC 25 e com uma tendência significativa de aumento de fase G2/M, para a linhagem Detroit 562. Os resultados mostraram que metabólitos provenientes de biofilmes fúngicos e bacterianos de C. albicans e S. aureus, tanto jovens como maduros, são capazes de geram alterações ligadas ao processo de tumorigênese, devido à capacidade de promover alterações na viabilidade, dinâmica do ciclo celular e na expressão de genes pro-tumorais e supressores tumorais em linhagens epiteliais orais normais e neoplásicas.
Sinais e sintomas de sensibilização central avaliados por diferentes métodos em pacientes com disfunção temporomandibular dolorosa
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-09-16) Proença, Juliana dos Santos; Gonçalves, Daniela Aparecida de Godoi [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A fisiopatologia da disfunção temporomandibular (DTM) pode envolver mecanismos de sensibilização central (SC). Dentre os métodos para sua avaliação estão os testes quantitativos sensoriais (Quantitative Sensory Testing – QST) e o teste de modulação condicionada da dor (Conditioned Pain Modulation – CPM). O inventário de sensibilização central (Central Sensitization Inventory – CSI) tem sido sugerido como um meio de investigar sintomas relacionados à SC e tem sido correlacionado a questionários que avaliam fatores psicossociais. Objetivos: Avaliar a presença de sintomas relacionados à SC em indivíduos com DTM dolorosa através do CSI, bem como correlacionar os resultados deste com os obtidos nos testes psicofísicos e questionários para avaliação psicossocial. Ainda, avaliar as características clínicas da dor primária crônica de acordo com a presença de DTM dolorosa e comorbidades. Material e métodos: Neste estudo observacional transversal, a DTM foi classificada pelo Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders eixo I (RDC/TMD). Os testes wind-up ratio, limiar de dor à pressão (LDP) e CPM foram os testes psicofísicos realizados. O CSI foi aplicado para avaliar sintomas relacionados à SC e o sofrimento emocional associado à dor. Foram também avaliadas as características sociodemográficas, fatores psicossociais, comorbidades, qualidade do sono e dor espalhada pelo corpo. A amostra foi composta por 146 adultos, estratificados em dois grupos: 1) Controle (n=31); 2) DTM dolorosa (n=115). Em relação às características da dor primária crônica, a amostra foi de 129 participantes, divididos em três grupos: 1) Controle (n=25); DTM dolorosa (n=35); DTM dolorosa+comorbidades (n=69). As variáveis qualitativas foram testadas pelos testes de Qui-quadrado e Exato de Fisher. As variáveis quantitativas foram analisadas pelo teste t de Student e de Mann Whitney U. Por meio de uma curva ROC (Receiver Operating Characteristic) foi identificado um ponto de corte para o CSI, tendo como parâmetro a graduação da gravidade da dor crônica (RDC/TMD eixo II). A correlação entre o CSI e os testes psicofísicos e questionários psicossociais foi avaliada pelos coeficientes de correlação de Pearson e de Spearman. As características da dor primária crônica foram avaliadas pela análise de variância a um fator, teste de Kruskal-Wallis e de Qui-quadrado (α=5%). Resultados: O grupo DTM dolorosa mostrou maior escore do CSI (p<0,001) e menor LDP (p≤0,020) comparado aos controles. O valor 28 mostrou-se o ponto de corte mais adequado para distinguir indivíduos com DTM dolorosa crônica de participantes livres de dor crônica. O escore do CSI foi significativamente e positivamente correlacionado somente aos questionários psicossociais (p<0,001). Indivíduos com DTM dolorosa e comorbidades apresentaram menor LDP (p≤0,015) e maior número de áreas doloridas no corpo (p=0,001) comparados aos controles. Eles também mostraram mais sintomas de depressão (p=0,018), de ansiedade (p=0,040) e maior escore no CSI (p<0,001) que os grupos controle e DTM dolorosa. Conclusão: O escore do CSI foi maior para os participantes com DTM dolorosa. Ele não foi correlacionado aos resultados dos testes psicofísicos, mas mostrou uma correlação significativa com os questionários para avaliação psicossocial. Finalmente, participantes com DTM dolorosa e comorbidades apresentaram mais características clínicas da dor primária crônica.

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