Teses - Ciências Fisiológicas - FOA

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https://hdl.handle.net/11449/109366

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Mecanismos envolvidos na perda óssea alveolar induzida pela doença periodontal em ratos espontaneamente hipertensos: papel do sistema renina-angiotensina e microRNAs
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-23) Brito, Victor Gustavo Balera [UNESP]; Oliveira, Sandra Helena Penha de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A doença periodontal (DP) é uma desordem inflamatória prevalente que afeta os tecidos de suporte e proteção dos dentes. Devido sua alta prevalência, é frequentemente associada a comorbidades, como hipertensão, que pode contribuir para sua progressão. O rato espontaneamente hipertenso (SHR) é um modelo que apresenta características semelhantes à hipertensão essencial humana, bem como comprometimento ósseo intrínseco e maior perda óssea alveolar associada à DP. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar dois mecanismos, o sistema renina-angiotensina (SRA) e a expressão de microRNAs (miRNAs), para melhor compreender o aumento da perda óssea alveolar induzida pela DP nesse modelo. Para isso, utilizamos ratos machos Wistar e SHR com 10 semanas de idade e a DP foi induzida por meio de ligadura bilateral inserida nos primeiros molares inferiores e mantida por 15 dias. Para avaliar a participação do SRA, os animais foram tratados com telmisartan (10 mg/Kg/dia) e foram realizadas análises da arquitetura óssea (microCT), expressão dos componentes do SRA, marcadores de formação, remodelamento e reabsorção óssea, bem como a produção de mediadores inflamatórios na mandíbula (RT-qPCR, ELISA e IHC-P). Para investigar a expressão diferencial de miRNAs associado a DP, foi utilizado ensaio de microarranjo e posteriormente análises bioinformáticas para identificar potenciais vias reguladas. Os resultados mostraram que o rato SHR apresentou maior perda óssea alveolar, em comparação ao Wistar (normotenso), o que foi parcialmente prevenido pelo tratamento com telmisartan. Observamos uma redução nos marcadores de osteoclastos (remodelamento e reabsorção), o que foi associada à menor produção de mediadores inflamatórios, inibição do receptor de angiotensina II tipo 1 (Agtr1) e maior expressão do receptor tipo 2 (Agt2r). Entretanto, observamos que a modulação dos componentes do SRA foi similar entre ratos Wistar e SHR, não explicando as diferenças observadas entre os modelos. De forma interessante, a análise de microarranjo revelou um perfil distinto de miRNAs relacionados à resposta imune e metabolismo ósseo nos SHR, bem como miRNAs diferencialmente modulados entre os modelos, previamente não associados à homeostase ou desordens periodontais. Resumidamente, mostramos que os componentes do SRA contribuem significativamente para a perda óssea alveolar, mas não explicam completamente a progressão aumentada observada nos SHR. No entanto, a modulação diferencial de miRNAs nos animais hipertensos sugerem seu envolvimento nessas diferenças, além de destacar potenciais alvos terapêuticos para DP, e outras desordens ósseas, que podem ser de interesse para orientar futuras pesquisas. Nesse sentido, a partir dos miRNAs diferencialmente expressos na DP, elegemos um miRNA de interesse, o miR-127-3p, que apresenta sequência conservada entre múltiplas espécies (incluindo ratos, camundongos e humanos), cuja função na osteogênese são havia sido completamente elucidada. Demonstramos então um efeito inibitório do miR-127-3p na diferenciação osteogênica de células osteoprogenitoras humanas (células mesenquimais estromais da medula óssea), por meio da superexpressão in vitro por meio de um mímico de miRNA. Estudos adicionais são necessários para confirmar um efeito in vivo, mas nossos resultados contribuem para a compreensão da função do miR-127-3p na biologia óssea. Financiamentos: CAPES (código 001), FAPESP (2015/03965-2, 2018/23676-3 e 2021/09597-6).
Avaliação da etapa final do sinal insulínico, via inflamatória, estresse oxidativo, mecanismo epigenético por metilação do DNA e expressão de GLUT4 no músculo gastrocnêmio de ratos adultos, proles de ratas com periodontite apical
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-05) Tsosura, Thais Veronica Saori [UNESP]; Matsushita, Doris Hissako [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A programação fetal sugere que estímulos adversos quando aplicados durante o início do desenvolvimento fetal podem alterar o metabolismo da prole, aumentando o risco de doenças na sua vida adulta. A metilação do DNA é um dos mecanismos epigenéticos envolvida nesta programação e regula a expressão gênica. Estudos anteriores verificaram que a periodontite apical (AP) materna em ratas promove em sua prole adulta: resistência insulínica (RI), alteração na etapa inicial do sinal insulínico (SI) no músculo gastrocnêmio (MG) e aumento na concentração plasmática de fator de necrose tumoral-α (TNF-α). O TNF-α pode ativar o fator de transcrição nuclear kappa B (NF-kB) que diminui a expressão gênica do transportador de glicose GLUT4. Nesse contexto, mais estudos são necessários para investigar se as alterações no SI observadas em ratos adultos, proles de ratas com AP também estão presentes na continuidade da cascata insulínica. Ademais, sabendo-se que o estresse oxidativo tem sido implicado como fator contribuinte tanto para o início quanto para a progressão do diabetes, torna-se fundamental verificar o grau de estresse oxidativo tecidual nesta prole adulta. Em vista disso, os objetivos deste estudo foram avaliar a RI, estresse oxidativo, etapa final do SI e via inflamatória no MG de ratos adultos, proles de ratas com AP. Para tanto, as 21 ratas Wistar (2 meses de idade) foram distribuídas em 3 grupos: 1) ratas controle; 2) ratas com 1 AP induzida em 1º molar superior direito; 3) ratas com 4 APs induzidas em 1os e 2os molares superiores e inferiores do lado direito. A AP foi induzida empregando-se broca em aço carbono dotada de esfera de 0,1 mm na extremidade. Após 30 dias da exposição pulpar, as ratas de todos os grupos foram colocadas para acasalamento. Quando os filhotes machos de todas as ratas completaram 75 dias de idade, foram realizadas as seguintes análises plasmáticas: 1) glicemia; 2) insulinemia; 3) RI. Ademais, foram realizados os seguintes experimentos no MG: 1) grau de fosforilação em serina/treonina da Akt, após o estímulo insulínico; 2) conteúdo proteico de GLUT4; 3) grau de metilação do DNA na região promotora do gene do GLUT4; 4) expressão gênica do GLUT4 e TNF-α; 5) conteúdo proteico de TNF-α e PGC-1α; 6) grau de fosforilação de NF-kB p50 e NF-kB p65; 7) estresse oxidativo (superóxido dismutase – SOD e espécies reativas ao tiobarbitúrico – TBARS). A análise estatística foi realizada pela análise de variância, seguida do teste de Tukey. O nível de significância adotado foi de 5%. Os resultados mostraram que AP materna (tanto 1 foco de infecção como 4 focos de infecções) promoveu hiperinsulinemia, RI e diminuição na atividade antioxidante da SOD e na concentração de TBARS no MG de sua prole adulta. Entretanto, somente a AP materna em quatro dentes promoveu aumento na massa corpórea, na ingestão alimentar e no grau de fosforilação das subunidades p50 e p65 do NF-kB no MG de proles adultas. Ademais, houve diminuição no grau de fosforilação em serina e treonina da Akt (após estímulo insulínico) e na expressão gênica e conteúdo proteico de GLUT4 no MG em proles adultas de ratas com 4APs. A AP materna não promoveu alteração na glicemia de jejum, conteúdo de PGC-1α, grau de metilação do DNA na região promotora do gene do GLUT4 e expressão gênica e conteúdo proteico de TNF-α no MG de proles adultas. Esses resultados revelam o impacto que a AP materna tem em longo prazo na predisposição às alterações metabólicas na fase adulta da prole. Isso reforça a importância que a manutenção da saúde bucal materna tem sobre a saúde geral da prole.
Efeito da dieta hiperlipídica e melatonina sobre a lesão periapical na sensibilidade a insulina, inflamação, perfil lipídico e estresse oxidativo em musculo esquelético de ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-19) Santos, Rodrigo Martins dos [UNESP]; Matsushita, Dóris Hissako [UNESP]; Oliveira, Sandra Helena Penha de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Atualmente, na literatura, existem diversos tipos de dietas alimentares administradas em animais que visam verificar os efeitos em seu metabolismo e em sua saúde sistêmica, com intuito de compreender como essas dietas podem afetar a saúde humana. Sendo assim, é fundamental verificar a relação entre o consumo de dietas ricas em gordura juntamente com infecções endodônticas associadas, tais como: a periodontite apical (PA), pois ambas compartilham efeitos sistêmicos como a resistência insulínica, e o aumento de mediadores inflamatórios. A melatonina (MEL) vem sendo utilizada em cenários clínicos para várias doenças crônicas (diabetes, dislipidemias, doenças cardiovasculares), além de patologias orais; isso se deve as suas propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do tratamento com ME em ratos com periodontite apical (PA) alimentados com dieta hiperlipídica (DHL) sob à sensibilidade a insulina, citocinas plasmáticas, expressão proteica e gênica de Toll-like receptor tipo 4 (TLR-4) e sua via de sinalização e estresse oxidativo no músculo gastrocnêmico (MG). Para tanto, 80 ratos Wistar com 60 dias foram distribuídos em 8 grupos (n=10): 1) controle (CN); 2) PA; 3) DHL; 4) DHL+PA; 5) CN+MEL); 6) PA+MEL; 7) DHL+MEL; 8) DHL+PA+MEL. Os grupos com DHL foram alimentados com uma dieta composta por 45,5% de ração padrão + 22,7% de banha animal e gordura vegetal + 9% de açúcar; os demais grupos receberam dieta padrão. No 7º dia os grupos com PA foram submetidos a indução cirúrgica da PA e, após 70 dias da indução da PA, os animais do grupo com melatonina receberam MEL (5 mg/Kg) diluída na água de beber, por 30 dias. Ao término do tratamento foram avaliados os seguintes parâmetros: 1) ingestão hídrica, alimentar e evolução da massa corpórea; 2) Histologia dos maxilares; 3) glicemia, insulinemia e HOMA-IR; 4) concentrações plasmáticas de TNF-α, IL-1β, IL-6 e LPS; 5) perfil lipídico; 6) expressão gênica e proteica do TLR4 e sua via de sinalização intracelular: MyD88, TRIF, IRF-3 e NFκB no MG; 7) estresse oxidativo: proteína carbonilada (PC) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs), capacidade antioxidante total não-enzimática (FRAP) e das concentrações de glutationa reduzida (GSH), superóxido disumutase (SOD), Catalase (CAT) e Glutationa peroxidase (GPx). A análise estatística foi feita por análise de variância ANOVA seguida pelo teste de Tukey, o nível de significância será de 5%. Os resultados do presente estudo demonstraram que: 1) Os grupos alimentados com DHL apresentaram diminuição da massa corpórea, menor ingestão hídrica, alimentar e maior ingestão energética quando comparados aos grupos alimentados com dieta padrão; 2) Os grupos DHL e DHLPA apresentaram aumento do peso absoluto do tecido adiposo periepididimal (TAB); os grupos alimentados com DHL apresentaram diminuição do peso MG; o tratamento com ME promoveu diminuição do peso do TAB; 3) Os grupos DHL e DHLPA apresentaram aumento da glicemia; o grupo DHLPA aumento da insulinemia; PA, DHL e DHLPA demonstraram resistência insulínica e o tratamento com MEL reverteu as alterações na glicemia, insulinemia e resistência insulínica 4) Perfil lipídico: os grupos DHL e DHLPA apresentaram aumento de LDL e diminuição de HDL, o tratamento com ME reverteu esta alteração; 5) Citocinas: os grupos PA, DHL e DHLPA mostraram aumento do TNF-α, e a ME reverteu; o tratamento com MEL diminuiu os níveis de IL-1β plasmáticos nos grupos PAME e DHLMEL; não houve alterações nos níveis de IL-6 plasmáticos; houve redução na concentração plasmática de LPS apenas no grupo DHLME; 6) Expressão gênica e proteica: houve aumento da expressão proteica de IRF-3 nos grupos PA, DHL e DHLPA no MG e o tratamento com MEL diminuiu a expressão da proteína apenas nos grupos PAMEL e DHLMEL; 7) Não houve alterações na expressão gênica do TLR4 e sua via de sinalização celular; 8) Estresse oxidativo: TBARS aumentou nos grupos PA e DHLPA, e MEL reverteu apenas no grupo DHLPAMEL; PC aumentou em todos os grupos DHL e melhorou nos grupos MEL; a atividade da GSH diminuiu em todos os grupos experimentais, e a MEL aumentou esse parâmetro apenas nos grupos CNME e PAME; FRAP não se alterou entre os grupos, mas o tratamento com ME aumentou sua atividade nos grupos PAMEL e DHLMEL; a MEL aumentou a SOD nos grupos CN e AP. Conclui-se que a associação da DHL e da PA intensificou as alterações observadas neste estudo. O tratamento com ME demonstrou ser um importante recurso para reversão destas alterações devido aos seus efeitos antioxidantes, anti-inflamatório e hipocolesterolêmicos. Sendo assim estudos clínicos devem ser realizados para verificar os efeitos sistêmicos e inflamatórios do PA e DHL.
Papel do tratamento crônico com apocinina na biodisponibilidade de óxido nítrico e geração de espécies reativas de oxigênio em ratos espontaneamente hipertensos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-04-06) Graton, Murilo Eduardo [UNESP]; Silva, Cristina Antoniali [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A enzima NAD(P)H oxidase (NOX) é a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) no sistema cardiovascular. A produção exacerbada de ERO associada com a redução da capacidade antioxidante pode levar ao estresse oxidativo, que pode causar a hipertensão arterial, principal fator para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares que são a principal causa de morte no mundo. Devido a essa importância, nossas ferramentas e abordagens terapêuticas são necessárias para auxiliar no controle e desenvolvimento da hipertensão arterial e suas complicações. Na primeira parte deste trabalho foram avaliados os efeitos dos tratamento crônico com apocinina em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) na produção de óxido nítrico (NO) e na geração de espécies reativas de oxigênio, bem como a eliminação destas espécies por parte dos sistemas antioxidantes. Na segunda parte deste trabalho, foram avaliadas as características antioxidantes e inibidoras de NOX da apocinina, e de um outro potencial candidato terapêutico, o ácido protocatecuico. Ambos estudos reforçam o potencial uso da apocinina como possível candidato para o tratamento de doenças cardiovasculares onde o estresse oxidativo é um dos principais alvos terapêuticos.
Efeito do pré-tratamento do treinamento de força e raloxifeno na periestropausa sobre a cicatrização óssea
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-12-19) Ueno, Melise Jacon Peres [UNESP]; Dornelles, Rita Cassia Menegati [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Há evidências de que o treinamento de força (TF) e raloxifeno (Ral) durante a periestropausa promove melhor qualidade óssea. No entanto, nos perguntamos se os benefícios esqueléticos do TF ou Ral realizados durante a periestropausa persistiriam após a fratura. Portanto, o presente estudo teve como objetivo analisar a influência do pré-tratamento de TF e administração de Ral durante o período de periestropausa na cicatrização óssea após osteotomia unilateral total. Durante 120 dias, ratas Wistar senescentes (18 a 21 meses completos) realizaram TF em escada três vezes por semana, receberam Ral (2,3mg/Kg/dia) via gavagem, ou realizaram TF associado ao tratamento com Ral. Após este período, os tratamentos foram interrompidos e a osteotomia total foi realizada na tíbia esquerda em todos os animais, que foram eutanasiados 1 ou 8 semanas após a cirurgia. A administração de Ral durante a periestropausa piorou o perfil bioquímico e oxidativo, diminuiu a expressão gênica de marcadores relacionados à reabsorção e remodelação óssea, que afetaram negativamente as propriedades físico-químicas, levando a alterações na microarquitetura e massa dos calos ósseos, bem como na diminuição da resistência do calo à deformação torcional, resultando em menor qualidade do tecido durante a cicatrização óssea. Por outro lado, o TF realizado antes da osteotomia resultou em melhor cicatrização óssea, melhorando o perfil bioquímico e oxidativo, alterando o perfil genético em favor da formação e reabsorção óssea, bem como as propriedades físico-químicas do calo. Essas alterações levaram a uma melhor microarquitetura e massa óssea e aumentaram a resistência do calo à deformação torcional, confirmando seu efeito benéfico na qualidade do tecido ósseo, proporcionando aceleração da consolidação óssea.A combinação de terapias, nessa intensidade de exercício e dosagem da droga, o efeito negativo de Ral, superou o efeito positivo do TF, levando à diminuição da qualidade do tecido no processo de cicatrização óssea. Portanto, os resultados indicam que, além de excelente terapia não farmacológica e ação na prevenção da osteoporose, o TF realizado no período de envelhecimento pode aumentar a qualidade óssea no início da cicatrização e proporcionar melhor consolidação óssea. Além disso, o efeito anti-reabsortivo de Ral mostrado neste modelo atrasou o processo de reparo ósseo, trazendo considerável preocupação clínica.
Avaliação do mecanismo epigenético por metilação do DNA e da expressão de GLUT4 em tecido muscular esquelético de ratos adultos, proles de ratas com doença periodontal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-08-01) Mattera, Maria Sara de Lima Coutinho [UNESP]; Matsushita, Doris Hissako [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Atualmente, está bem estabelecido que o ambiente fetal está ligado à saúde materna, e estímulos ou agressões anormais durante a vida intra-uterina podem resultar em mudanças na fisiologia e metabolismo da prole, aumentando o risco de doenças na vida adulta, este fenômeno é conhecido como programação fetal. Alterações na metilação do DNA e expressão gênica são consideradas mecanismos moleculares responsáveis por esta programação. Estudos anteriores demonstraram que a doença periodontal (DP) materna promove resistência insulínica, aumento nas concentrações plasmáticas de citocinas, redução do conteúdo de GLUT4 e do seu índice de translocação para membrana plasmática em sua prole adulta. E citocinas, como por exemplo, o TNF-α, têm sido relacionadas com a redução da expressão de GLUT4 por meio da ativação do fator de transcrição nuclear κappa B (NF-κB). Além disso, esta citocina pode estimular algumas serinas quinases, incluindo IκB quinase (IKK), c-Jun amino-terminal kinase (JNK) e quinases reguladas por sinais extracelulares (ERKs) que estão envolvidas na resistência insulínica. Tais achados evidenciam a necessidade de realizar mais estudos para verificar os mecanismos envolvidos nestas alterações. Portanto, os objetivos do presente estudo foram avaliar em ratos adultos, proles de ratas com DP: 1) glicemia e insulinemia; 2) expressão do RNAm da proteína transportadora de glicose GLUT4 e do IRS1 em muscular esquelético gastrocnêmio (MG); 3) o grau de metilação do DNA na região promotora do gene do GLUT4 em MG; 4) fosforilação das proteínas JNK, IKKα/β, ERK 1/2, NF-κBp65 e NF-κBp50 e seus conteúdos totais em MG; 5) conteúdo total de TNF-α em MG. As ratas foram divididas em dois grupos: 1) com doença periodontal (DP), no qual esta doença foi induzida por meio de ligadura com fio de seda ao redor do 1º molar inferior; 2) ratas controle (CN). Após 7 dias da colocação da ligadura, as ratas de ambos os grupos foram colocadas para acasalamento, verificou-se diariamente, por esfregaço vaginal, o dia da copulação. As ratas prenhas foram separadas em caixas individuais. Quando os filhotes machos destas ratas completaram 75 dias, realizaram-se os experimentos: 1) glicemia e insulinemia; 2) expressão do RNAm do GLUT4 e do IRS1 em MG; 3) o grau de metilação do DNA na região promotora do gene do GLUT4 em MG; 4) fosforilação das proteínas JNK, IKKα/β, ERK 1/2, NF-κBp65 e NF-κBp50 e seus conteúdos totais em MG; 5) conteúdo total de TNF-α em MG. Os resultados demonstraram que a doença periodontal materna promove na sua prole adulta baixo peso ao nascimento (BPN), resistência insulínica, aumento conteúdo total de TNF-α em MG, aumento do grau de fosforilação de IKKα/β, ERK 1/2, NF-κBp65 (grau de fosforilação e conteúdo) e NF-κBp50 em MG, diminuição na expressão gênica da proteína transportadora de glicose GLUT4 e aumento na expressão gênica do IRS1; porém não promove nessa prole alteração no grau de metilação do DNA na região promotora do gene do GLUT4, e no grau de fosforilação da proteína JNK em MG. Portanto, este estudo é de fundamental importância para o entendimento de alguns dos mecanismos envolvidos na relação entre a doença periodontal materna e resistência à insulina na prole adulta. Além disso, mostra que a saúde bucal materna ideal pode ajudar a prevenir doenças futuras na prole adulta.
Avaliação de mecanismos de modificação pós-traducional da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) associados a biodisponibilidade do óxido nítrico em artérias de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) ao final da prenhez
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-05-03) Troiano, Jéssica Antonini [UNESP]; Silva, Cristina Antoniali [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A redução da reatividade vascular à fenilefrina (PE) em aorta de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) ao final da prenhez é dependente de maior produção e/ou maior biodisponibilidade de óxido nítrico (NO), consequente do aumento da fosforilação da enzima óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) via PI3K/Akt. A glicosilação do tipo N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) é uma modificação pós-traducional que compete com a fosforilação pelos mesmos sítios de ligação nas proteínas. A O-GlcNAcilação da eNOS em serina1177 leva a redução da sua atividade enquanto a fosforilação leva a sua ativação. Além destes mecanismos, a interação da eNOS com outras proteínas é capaz de regular positiva ou negativamente a sua atividade. O objetivo deste trabalho foi analisar possíveis alterações nos mecanismos de modificação pós-traducional que controlam a ativação da eNOS os quais poderiam contribuir para maior ativação e maior biodisponibilidade de NO observada em artérias de ratas prenhes. Foram avaliados o conteúdo proteico O-GlcNAc e também expressão das enzimas que participam desta modificação, O-GlcNAc transferase (OGT) e O-GlcNAcase (OGA) por Western Blotting e a atividade da OGA por ensaio bioquímico em aorta e em artéria mesentérica (2º ou 3º ramo) de ratas não prenhes (NP) e prenhes (P), normotensas (Wistar) e SHR. Ensaios de Western Blotting foram realizados também para análise da expressão das seguintes proteínas: Cav-1, p-Cav-1, CaM e Hsp90. Realizamos a contagem do número de cavéolas endoteliais da aorta e da artéria mesentérica na presença ou ausência da metil-β-ciclodextrina (dextrina, 10 mmol/L) por microscopia eletrônica. Em estudos funcionais, avaliamos a participação da enzima OGA, pela inibição com PugNAc (100 μmol/L) e das cavéolas, utilizando um desorganizador de cavéolas, a dextrina (10 ou 20 mmol/L), na menor reatividade vascular à PE observada em aortas de ratas P. Observamos que o conteúdo de proteínas O-GlcNAciladas estava diminuído em aorta e em leito mesentérico de ratas Wistar P e SHR P. Apesar da expressão da OGT e da OGA não estar alterada, a atividade da OGA foi aumentada em aorta e leito mesentérico de ratas Wistar P, mas, encontra-se diminuída em aorta e aumentada em leito mesentérico de SHP P. A incubação com PugNAc reverteu a reduzida reatividade à PE em aorta e artéria mesentérica de ratas Wistar P mas este efeito não foi observado em vasos SHR P, demonstrando que a OGA parece ter um papel importante na redução da O-GlcNAcilação de proteínas vasculares em Wistar P. Em vasos incubados com PugNAc, a remoção do endotélio ou a incubação com L-NAME, não alterou significativamente a reatividade à PE. Juntos estes resultados sugerem que a maior atividade da eNOS observada em vasos de Wistar P, fica prejudicada na presença do PugNAc, e depende da atividade da OGA. Como não houve alteração da resposta contrátil à PE em vasos de SHR P incubados com PugNAc, possivelmente um mecanismo diferente, envolvendo a menor atividade da OGT, ocorre nestas artérias para a redução da O-GlcNAcilação da eNOS. A desorganização das cavéolas por meio da dextrina causou aumento de contração à PE e redução de potência da ACh em aortas de Wistar NP e SHR NP, porém não houve alteração em aortas de ratas Wistar P e SHR P. A dextrina não alterou o número de cavéolas em artérias de Wistar P e SHR P quando comparado com ratas NP. SHR NP apresentam um reduzido número de cavéolas das aortas em relação a Wistar NP bem como expressão reduzida de Cav-1, p-Cav-1 e CaM. A prenhez não foi capaz de alterar a expressão da Cav-1, CaM e Hsp90 em aorta e leito mesentérico de ratas normotensas e hipertensas. Estes resultados sugerem que a prenhez não altera a expressão das proteínas Cav-1, CaM e Hsp90 e possivelmente a interação com a eNOS em aorta e artérias mesentéricas de ratas normotensas e hipertensas. Em conclusão, entre os mecanismos estudados de modificação pós-traducional da eNOS, a redução da O-GlcNAcilação da eNOS, por mecanismos que envolvem a atividade da OGA e possivelmente da OGT, favoreceria a fosforilação da eNOS e consequente maior biodisponibilidade de NO, contribuindo desta forma para modulação da resposta contrátil da PE nas artérias de ratas P.
Estudo dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento de resistência à insulina em ratos com lesão periapical
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2018-10-31) Pereira, Renato Felipe [UNESP]; Sumida, Doris Hissako [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Nos últimos anos, a relação entre infecções orais e desordens sistêmicas tem se consolidado como área de grande interesse na comunidade cientifica médica e odontológica. A lesão periapical (LP) é caracterizada como uma inflamação oral e está associada ao aumento da quantidade de citocinas pró-inflamatórias que possivelmente induzem resistência insulínica (RI). A RI é definida como a incapacidade dos tecidos periféricos em responder adequadamente às concentrações fisiológicas deste hormônio, no entanto, os mecanismos que causam RI não são totalmente compreendidos. Estudos anteriores do nosso laboratório observaram que a LP promove aumento das concentrações plasmáticas de TNF-α, prejuízos na transdução do sinal insulínico e redução do conteúdo de GLUT4 na membrana plasmática em tecido muscular esquelético, indicando uma relação entre LP e RI. Tais achados evidenciam a necessidade de realizar mais estudos para verificar os mecanismos envolvidos nestas alterações. O presente estudo, conduzido em ratos com LP, teve como objetivos: 1) calcular o índice HOMA-IR a partir dos concentrações plasmáticas de glicose e insulina 2) avaliar conteúdo total das proteínas inflamatórias (JNK, IKKα/ e TNF-) no músculo gastrocnêmio (MG) e o grau de fosforilação de JNK e IKKα/ no mesmo tecido; 3) verificar a presença de macrófagos infiltrados por meio da detecção da proteína F4/80 em MG; 4) quantificar a expressão de fatores de transcrição envolvidos com a diferenciação de linfócitos no baço (T-bet, GATA3 e FOXP3); 5) analisar as concentrações plasmáticas de LPS, HSP70, INF, IL-4, TGF- . Para tanto, foram utilizados 45 ratos Wistar (2 meses de idade) distribuídos em três grupos: a) ratos do grupo controle, sem a LP (CN); b) ratos com LP induzida em primeiro molar superior direito (apenas uma lesão) (1LP); c) ratos com LP induzida em primeiros e segundos molares superiores e inferiores do lado direito (total de quatro lesões) (4LP). A LP foi induzida empregando-se broca em aço carbono dotada de esfera na extremidade com 0,1 mm. A análise estatística foi realizada por análise de variância (ANOVA), seguida pelo teste de Tukey. O nível de significância adotado foi de 5% (alfa=5%). Os resultados demonstraram uma redução na sensibilidade à insulina e um aumento do conteúdo de macrófagos ao redor das fibras musculares nos grupos LP. O grau de fosforilação de JNK e IKKα/ no MG também foi maior nos grupos LP em relação ao grupo CN. Não foi observada diferença entre os grupos no conteúdo de TNF- no MG. A expressão gênica de T-bet foi elevada nos grupos LP enquanto que a expressão de FOXP3 monstrou-se reduzida. A expressão de GATA3 foi reduzida no grupo 1LP e elevada no grupo 4LP. Em relação às alterações sistêmicas, foi observado um aumento de LPS, HSP70 e INF-γ nos grupos LP e redução de IL-4 nos mesmos grupos quando comparados ao CN. Nenhuma diferença foi observada entre os grupos em relação ao TGF-β. Baseados nos resultados do presente estudo, podemos inferir que tanto a imunidade inata como a imunidade adaptativa podem contribuir para a RI observada em ratos com LP. Dentre os possíveis mecanismos responsáveis por essas alterações destaca-se o recrutamento de macrófagos, ativação de vias inflamatórias no tecido muscular e uma modulação da expressão gênica de linfócitos no baço.
Alisquireno diminui a resposta inflamatória e a severidade da periodontite induzida em camundongos diabéticos.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2018-06-22) Barbosa, Dayane Priscilla de Souza Queiroz [UNESP]; Oliveira, Sandra Helena Penha de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Introdução: A associação do Diabetes Mellitus (DM) e a doença periodontal (DP) compromete a resposta inflamatória e o metabolismo ósseo, tornando-se uma das principais complicações geradas por estas patologias. O sistema renina-angiotensina local (SRA) tem sido encontrado em tecidos periodontais, sugerindo que este sistema pode contribuir com a resposta inflamatória e com a destruição periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da renina sobre a resposta inflamatória de camundongos normoglicêmicos e diabéticos submetidos à periodontite induzida. Métodos: O diabetes foi induzido em dose única por estreptozotocina (200mg/kg) em camundongos Balb/c. Para indução da DP, camundongos normoglicêmicos e diabéticos, tratados ou não com Alisquireno (50mg/kg) (Alisk), receberam uma ligadura por meio de fio de seda ao redor do primeiro molar inferior que foi mantido durante 14 dias. Mandíbulas foram removidas para análises histomorfométricas e o tecido gengival foi coletado para avaliar a expressão gênica de componentes do SRA (angiotensinogênio (Agt), renina (Ren), enzima conversora de angiotensina 1 e 2 (Eca e Eca2), receptores de angiotensina 1 e 2 (ATR1 e ATR2), e receptor de angiotensina 1-7 (MasR), além de marcadores do reparo tecidual (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectina (Fn), fator de transformação beta (TGF-β) por RT-qPCR em tempo real. A análise imuno-histoquímica (IHC) teve como objetivo detectar e localizar os componentes do SRA no tecido gengival. Ensaios imunoenzimáticos (ELISA) foram utilizados para avaliar a produção de proteína C-reativa (CRP), CXCL2 e CCL8 no tecido gengival.Resultados: Observamos a indução da doença periodontal pela perda óssea e processo inflamatório induzido 14 dias após. O tratamento com Alisk diminui a resposta inflamatória e previniu a perda óssea induzida pela DP em camundongos normoglicêmicos e diabéticos. O mRNA para Ren foi indectetável no tecido gengival, sugerindo que os efeitos observados foram de renina sistêmica. DP aumentou a expressão de Agt, Eca em camundongos normoglicêmicos e diabéticos. A expressão de AT2R foi pronunciadamente maior apenas em camundongos normoglicêmicos com DP. O tratamento com Alisk reduziu a expressão gênica desses componentes de SRA, principalmente em camundongos diabéticos. Componentes SRA foram expressos em todas as camadas do epitélio, com marcação moderada dos componentes do tecido conjuntivo adjacentes, incluindo fibroblastos, células endoteliais e células de infiltrado inflamatório. Possivelmente a renina sistêmica exacerba a resposta inflamatória tanto em animais normoglicêmicos quanto em diabéticos, apresentando produção elevada de CRP, CXCL2 e CCL8 na presença de DP.O tratamento com Alisk reduziu a produção desses marcadores inflamatórios principalmente em camundongos diabéticos.Col1a1, Col1a2, Col3a1 e Fn foram aumentados em ambos os animais com DP, enquanto que a expressão de TGF-β foi reduzida. O tratamento com Alisk reduziu a expressão de Col1a1, Col1a2, e Fn, no entanto, aumentou a expressão de TGF-β. Conclusão: Os resultados aqui apresentados sugerem que a renina sistêmica exacerba a resposta inflamatória, contribuindo com a severidade da DP induzida, além de modular os principais componentes da matriz extracelular no tecido gengival. Finalmente, antagonizar a renina pode ser uma ferramenta importante, no futuro, para prevenir a perda óssea e principalmente a inflamação induzida pela periodontite .
Atuação das proteínas do relógio na senescência reprodutiva de ratas Wistar
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2017-12-12) Nicola, Angela Cristina de [UNESP]; Dornelles, Rita Cássia Menegati [UNESP]; Poletini, Maristela de Oliveira; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O envelhecimento é considerado processo multidimensional no qual fatores ambientais podem proteger ou, inversamente, agravar seus sinais, de maneira não linear, nos processos fisiológicos e neurocomportamentais. Durante este processo, os ritmos circadianos são interrompidos ou fragmentados com dissociação consequente dos ritmos circadianos do indivíduo e disfunções relacionadas ao relógio circadiano contribuem para o envelhecimento e para patologias a ele relacionadas. O objetivo deste estudo foi averiguar possível alteração temporal do sistema CLOCK no eixo HPG e a relação com às alterações hormonais que caracterizam a periestropausa. Foram utilizadas fêmeas adultas com ciclo estral regular (CD) na fase do diestro e fêmeas senis com ciclo estral irregular e persistência da fase do diestro (IDP). Para análises de expressão gênica dos clock genes Per2, Rev-erbα e Bmal1 no eixo HPG, foram utilizados punchs das regiões do NSQ, onde também foi analisado RNAm de AVP, APO e HMB destes animais, além da adenohipófise e ovários dos quais se extraiu o RNA para confecção do cDNA e realização de qPCR. A determinação da atividade neuronal vasopressinérgica no NSQ foi realizada por imunoistoquíca com dupla marcação para cFos e AVP em tecido previamente fixado com paraformaldeído. A concentração plasmática de gonadotrofinas foi determinada por radioimunoensaio. De modo geral, os animais IDP revelaram alterações no perfil de expressão gênica durante o fotoperíodo, com redução de amplitude, deslocamento/desalinhamento de fase e ausência de antifase. O NSQ de animais IDP apresentou menor expressão de Rev-erbα e maior expressão de RNAm para AVP em relação ao grupo CD. A quantificação relativa de Bmal1 foi semelhante em ambos os grupos e não houve diferenças entre grupos na expressão de Per2. Na APO, animais IDP apresentaram maior expressão de Per2 e menor quantidade de RNAm para Rev-erbα. No HMB observou-se menor expressão para Per2 e Rev-erbα e maior expressão de Bmal1 nas fêmeas IDP. Per2 e Bmal1 na adenohipófise tiveram menor expressão que o gene Rev-erbα no grupo senil e o ovário destes animais revelou maior expressão para Per2 e Rev-erbα, em comparação com os animais CD. As concentrações plasmáticas de FSH foram maiores nas fêmeas com ciclo irregular (2,05 ± 0,44 ng/mL), principalmente durante a fase clara, assim como o LH (0,24 ± 0,07 ng/mL), cujos maiores valores foram encontrados durante a fase escura e com perfil semelhante ao RNAm de AVP. As imunomarcações revelaram alta atividade vasopressinérgica na porção dorsomedial do NSQ das fêmeas IDP. Juntos estes dados permitem concluir que há desarranjo na expressão temporal dos genes Per2, Rev-erbα, Bmal1 que compõem a maquinaria molecular do relógio circadiano, bem como de RNAm para AVP no NSQ, de fêmeas Wistar na periestropausa. Além disso, a maior atividade neuronal vasopressinérgica e a ausência de oscilação de Rev-erbα e Bmal1 no NSQ destes animais, comprometem a correta comunicação do relógio central do NSQ com o eixo HPG, inviabilizando a manutenção da fertilidade feminina e contribuindo para a senescência reprodutiva.
Efeito do treinamento resistido sobre a sensibilidade à insulina, músculo esquelético e tecido ósseo em ratos pinealectomizados
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2017-12-01) Benites, Mariana Lopes [UNESP]; Sumida, Doris Hissako [UNESP]; Oliveira, Sandra Helena Penha de [UNESP]; Musarò, Antonio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Produzida pela glândula pineal exclusivamente em período noturno e na escuridão, a melatonina apresenta papel fundamental na sincronização dos ritmos circadianos com o ciclo claro-escuro do meio ambiente. A exposição à luz suprime a síntese e secreção de melatonina pela glândula pineal, podendo prejudicar a ação insulínica em células do músculo esquelético. O transporte ineficiente de glicose no músculo esquelético pode promover atrofia, geralmente acompanhada por perda de massa óssea. Resistência à insulina, atrofia muscular esquelética e perda de massa óssea são efeitos patológicos que podem ser prevenidos ou atenuados pela prática regular de exercícios físicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do exercício resistido (ER) sobre a sensibilidade à insulina e manutenção da musculatura esquelética e tecido ósseo em ratos pinealectomizados. 40 ratos Wistar machos foram distribuídos, aleatória e igualmente, em 4 grupos: 1) controle (CNS); 2) exercitado (CNEX); 3) pinealectomizado (PNX) e 4) pinealectomizado exercitado (PNXEX). O ER foi realizado em escada, durante 8 semanas, 3 sessões semanais (em dias não consecutivos), 9 repetições por sessão e intervalo de tempo de 2 minutos entre as repetições. O teste de força máxima foi realizado a cada 2 semanas e a intensidade selecionada foi 60% de 1 repetição máxima (1RM). Após o período de treinamento, os animais foram submetidos ao teste de tolerância à insulina. Após o sacrifício, amostras de sangue foram coletadas para fosforilação da glicemia e insulinemia. A partir destes valores, a resistência à insulina foi calculada pelo índice HOMA-IR. O cálculo da área de secção transversa do extensor digitorum longus (EDL) foi realizado a partir da análise histológica, utilizando o software IMAGEJ. Também foram avaliadas a expressão gênica e fosforilação de proteínas presentes nas vias de manutenção do músculo esquelético: GLUT4, TNF-α, atrogin-1, MuRF1, IGF-1, Akt1, miostatina e SMAD2/3. O cálculo da área do trabeculado ósseo esponjoso inferiormente à linha epifisial da tíbia foi realizado a partir da análise histológica em cortes longitudinais, utilizando o software IMAGEJ. Os parâmetros morfológicos do tecido ósseo foram avaliados por micro-CT; a análise mineral óssea foi avaliada pelo Dual-energy X-ray absorptiometry – DEXA e análise mecânica foi avaliada pelo teste de três pontos. As análises estatísticas foram realizadas por análise de variância com 2 fatores - ANOVA two way, seguida pelo teste de Bonferroni, ao nível de significância de 5%. A pinealectomia promoveu resistência à insulina e aumento na expressão de TNF-α em animais PNX. A prática de exercícios resistidos atuou na prevenção da resistência à insulina pelo aumento na expressão de GLUT4 em animais PNXEX. A pinealectomia também promoveu atrofia muscular esquelética nos grupos PNX e PNXEX. A prática de exercícios resistidos, realizada pelo período de tempo, frequência e intensidade selecionados, não foi suficiente para promover hipertrofia muscular no grupo CNEX ou prevenir a atrofia muscular no grupo PNXEX. Os grupos PNX e PNXEX apresentaram aumento da expressão gênica de miostatina e fosforilação proteica de SMAD2/3 em relação aos grupos CNS e CNEX. Não houve diferença na expressão gênica e fosforilação das demais proteínas analisadas entre os grupos estudados. Os resultados sugerem que a atrofia muscular esquelética, observada nos grupos PNX e PNXEX, está relacionada ao aumento na ativação da via da miostatina e, quem sabe, ao aumento de TNF-α em músculo esquelético. O aumento da DMO em animais PNX foi tomado como um mecanismo protetivo do osso. O exercício resistido promoveu melhora da qualidade óssea em animais pinealectomizados ou não. O presente estudo demonstrou que a prática regular de exercícios resistidos (60% de 1 RM) preveniu a resistência à insulina em animais pinealectomizados e melhorou a qualidade óssea em animais com e sem pineal. A partir desses resultados podemos aventar que o exercício físico, em trabalhadores noturnos, pode melhorar a sensibilidade à insulina e auxiliar na manutenção do tecido ósseo.
Influência do treinamento de força associado ou não ao raloxifeno sobre o perfil transcricional e microestrutural ósseo de ratas Wistar naturalmente envelhecidas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2017-05-04) Stringhetta-Garcia, Camila Tami [UNESP]; Dornelles, Rita Cássia Menegati [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A ocorrência de doenças crônicas e degenerativas é significativamente maior nos organismos durante o envelhecimento, dentre elas, a osteoporose, que resulta em aumento no número de fraturas. As fraturas são as consequências mais dramáticas da osteoporose, sendo que do colo do fêmur é a mais severa, com maior incidência de morbidades e mortalidade. A menor concentração plasmática de estrogênio nas mulheres menopausadas, exerce ação primordial no desenvolvimento desta doença. Desta maneira, o objetivo deste estudo foi estudar a prevenção da osteoporose em decorrência do envelhecimento reprodutivo feminino, especificamente no período de periestropausa, utilizando treinamento de força (TF), raloxifeno (Ral) ou combinação de TF e Ral. Durante 120 dias, ratas Wistar no período do envelhecimento (18 a 21 meses) realizaram TF em escada três vezes por semana, receberam Ral (1mg/Kg/dia) por gavagem, ou realizaram TF associado ao tratamento com Ral. Microarquitetura óssea cortical e trabecular, densidade mineral óssea areal (DMOa), força óssea, imunoistoquímica (OCN, TRAP e SOST) e superfície de osteoclastos do colo do fêmur foram avaliadas, além de PCR (Runx2, Sp7, Alp, Bsp, Ocn, Rank, Rankl, Opg, Trap e Ctsk) e Western Blot (p-ERα e TRAP) do tecido ósseo de todo o fêmur. Os resultados demonstram que os tratamentos modularam o ciclo de remodelamento ósseo de maneiras diferentes: TF estimulou RNAm de marcadores osteoblásticos e osteoclásticos, enquanto Ral diminuiu marcadores osteoclásticos e TF associado a Ral aumentou marcadores osteoblásticos e diminuiu osteoclásticos. Ambos tratamentos resultaram em melhora da microarquitetura trabecular do colo do fêmur de ratas na periestropausa, todavia, apenas o TF foi capaz de melhorar além da microarquitetura trabecular, a cortical e força óssea. Desta maneira, sugerimos que a realização de TF, utilização de Ral ou a associação de TF e Ral durante a periestropausa são intervenções válidas na prevenção de osteoporose em decorrência do envelhecimento reprodutivo feminino, porém os efeitos do TF parecem ser superiores. Levando em consideração que a carga mecânica gerada pelo TF age também em tecidos não esqueléticos, concluímos que TF pode ser intervenção sistêmica para osteoporose. Esses resultados adicionam novas informações à literatura sobre terapêuticas preventivas para osteoporose e fornecem informações relevantes para estudos pré-clínicos.
Efeito vasorelaxante do doador de óxido nítrico [Ru(terpy)(bdq)NO]3+ (TERPY) em artéria de resistência e sua interação com a óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) de ratos espontaneamente hipertensos (SHR)
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2016-12-16) Potje, Simone Regina [UNESP]; Silva, Cristina Antoniali [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O TERPY promove efeito hipotensor de maior magnitude em ratos hipertensos (SHR e 2R-1C) do que em ratos normotensos (Wistar e 2R). Foi demonstrado anteriormente que o endotélio prejudica o efeito vasodilatador do TERPY em aorta de Wistar. No entanto, observamos que o endotélio melhora os efeitos vasodilatadores do TERPY em aorta de SHR. Vasos sanguíneos de menor calibre, tais como as artérias de resistência, estão associadas ao controle da resitência vascular periférica e da pressão arterial. Nossa hipótese é que o TERPY induz relaxamento nas artérias mesentéricas de resistência em SHR e que as células endoteliais modulam positivamente o efeito do TERPY nestes vasos sanguíneos. Portanto, o nosso objetivo foi avaliar o efeito vasodilatador do TERPY em anéis com e sem endotélio de artéria mesentérica de ratos SHR, o seu mecanismo de relaxamento e a participação da NOS sobre esse efeito. e a Nossos resultados mostraram que o TERPY induziu um efeito vasodilatador dependente da concentração em anéis de artérias mesentéricas (2º e 3º ramos) de SHR e de ratos Wistar. A potência do TERPY foi maior em anéis intactos do que em anéis sem endotélio em artérias mesentéricas de SHR, mas em Wistar o endotélio prejudicou o efeito do TERPY. Nas artérias mesentéricas sem endotélio de SHR, o efeito do TERPY é dependente da atividade da guanilato ciclase solúvel e de canais para potássio. Nas artérias mesentéricas intactas de SHR, o efeito de TERPY depende da atividade de eNOS, mas não é dependente das atividades de nNOS, iNOS ou da via da ciclooxigenase. O TERPY promove a fosforilação da eNOS nos resíduos de serina1177 e aumenta a concentração de óxido nítrico em células endoteliais isoladas de artérias mesentéricas de SHR. Nossos resultados mostraram que a guanilato ciclase solúvel, os canais para potássio e a eNOS estão envolvidos no efeito vasodilatador estimulado pelo TERPY nas artérias de resistência mesentérica de SHR. Numa segunda parte deste estudo, avaliamos o mecanismo de ação de TERPY e seu efeito sobre a atividade da eNOS em células endoteliais. As células HUVEC, WT-HEK e HEK-eNOS foram tratadas com TERPY em diferentes tempos (0 a 60 minutos). Foram analisados por Western blotting o efeito do TERPY sobre a fosforilação de eNOS, monômero e dímero da eNOS e sobre monômero e oligômero de caveolina-1. Também foi avaliado o efeito do TERPY na interação eNOS/Cav-1 através de co-imunoprecipitação. As alterações induzidas pelo TERPY sobre as concentrações de espécies reativas de oxigênio e peroxinitrito em células endoteliais foram medidas usando sonda DHE e biossensor 7-CBA, respectivamente. A concentração de óxido nítrico (NO) foi avaliada por sonda DAF-FM e sensor Cooper. O TERPY promoveu desacoplamento e disfunção da eNOS, dependente de BH4. A desestabilização dos oligômeros da caveolina-1 foi induzida pelo TERPY. Consequentemente, o TERPY reduziu a interação eNOS/Cav-1 e promoveu ativação da eNOS. Nossos resultados mostraram que a atividade da eNOS pode ser regulada de duas maneiras diferentes pelo TERPY. O TERPY promove desacoplamento e fosforilação da eNOS, promovendo uma estratégia diferente para a regulação da atividade desta enzima. As moléculas químicas ou biológicas como o TERPY que regulam a atividade da eNOS e aumentam a produção e a biodisponibilidade de NO teriam ações terapêuticas importantes para o tratamento de doenças vasculares associadas a hipertensão.
Influência da terapêutica hormonal estrogênica e do treinamento de força sobre o tecido muscular esquelético de ratas senis
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2016-08-22) Morais, Samuel Rodrigues Lourenço de [UNESP]; Dornelles, Rita Cássia Menegati [UNESP]; Brum, Patricia Chakur [UNESP]; Musarò, Antonio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A diminuição das concentrações plasmáticas de estrógeno está intimamente relacionada com o aumento do estresse oxidativo e a diminuição da massa muscular em idosos. A terapêutica hormonal estrogênica (THE) e o treinamento de força (TF) apresentam resultados efetivos sobre a manutenção do tecido muscular em idosos. No entanto, os mecanismos responsáveis pelas melhorias induzias por ambas as intervenções são pouco elucidados. Nesse sentido, avaliamos os efeitos da THE, do TF e a associação sobre a manutenção do tecido muscular esquelético de ratas periestropausadas. Ratas Wistar (18 meses) foram distribuídas em: Grupo não treinado (NT-Veh), Grupo NT tratado com a THE (NT-E2), Grupo TF (TF-Veh) e Grupo TF-E2. Os animais receberam a THE (17β estradiol; 2 x semana; 25 µg/kg/administração) e/ou praticaram TF (3 x semana; 80% sobrecarga) durante 16 semanas. A THE e o TF induzem benefícios ao tecido muscular esquelético de ratas periestropausadas, no entanto, por diferentes maneiras. Enquanto a THE induziu diminuição do estresse oxidativo muscular (Dihidroetidina), o TF resultou em melhoras significativas na função muscular, no sistema antioxidante muscular (Catalase) e na expressão de miRNAs (206, 146b e 133a). Já a interação das intervenções resultou em melhora no estado redox (Sirt1, Sirt3, PGC-1α, COXIV), na responsividade dos receptores estrogênicos (ERα, ERβ e GPR30), e atividade de vias de sinalização do tecido muscular (IGF-1/Akt-1/mTOR). Além disso, as intervenções de maneira isolada ou em associação, levaram ao aumento no percentual de fibras glicolíticas e redução das oxidativas. Sugerimos que a aderências das intervenções (associadas ou não) possam minimizar/atenuar a perda da massa muscular observada em fases tardias durante o processo de envelhecimento.
Avaliação da sensibilidade insulínica, transdução do sinal insulínico e da densidade mineral óssea em ratas tratadas com fluoreto de sódio
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2014-11-13) Nunes, Rita de Cássia Alves [UNESP]; Sumida, Doris Hissako [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Osteoporosis is defined as a systemic disease characterized by bone degradation microarchitectonic and decreased bone mass, which promotes increased bone fragility and eventual fracture risk. Several studies have investigated the use of sodium fluoride (NaF) in the treatment for osteoporosis. Fluoride when ingested can accumulate in calcified tissues such as teeth and bones and may alter the quality of these tissues. Besides influencing bone metabolism, fluoride can also alter glucose homeostasis. Studies in rats have shown that chronic treatment with NaF (20 mg/L) in the drinking water has promoted the reduction in insulin signaling, and insulin resistance. Researches indicate the developing of a new endocrine axis involving the bones and glucose metabolism, and this opens a perspective of therapeutic options for the treatment of several pathologies. Therefore the aim of the study was to evaluate the effect of water intake with sodium fluoride at a dose of 50 mg/L in ovariectomized rats: 1) tyrosine phosphorylation status of insulin receptor substrate (pp185 - IRS-1 / IRS- 2) in white adipose tissue (WAT); 2) plasma glucose, insulin, cholesterols, triglyceride, TNF-, IL-6, calcium, fluoride and osteocalcin; 3) bone density and biomechanical properties (stiffness, maximum force and toughness) in the tibia; 4) tibia histomorphometric analysis. Fourty-two female Wistar rats (two months old) were ovariectomized and randomly distributed into two groups: 1) control (OVX-C), which was subjected to the treatment without NaF group but with a solution of NaCl (9.54 mg/kg bw) containing the same amount of sodium in relation to the NaF group; 2) NaF group (OVX-F) which was subjected to treatment with NaF (50 mg/L) administered in drinking water for 42 days. After this period, the following evaluations were carried out: 1) tyrosine...
Estudo do efeito do TERPY [Ru(terpy)(bdq)NO+]3+, um novo doador de óxido nítrico, na reatividade vascular e na pressão arterial de ratos espontaneamente hipertensos (SHR)
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2012-10-15) Munhoz, Felipe Camargo [UNESP]; Silva, Cristina Antoniali [UNESP]; Bendhack, Lusiane Maria [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O uso clínico de drogas que liberam óxido nítrico (NO) é limitado por seus efeitos colaterais. A hipotensão induzida pelo doador clássico de NO, nitroprussiato de sódio (NPS) é rápida, transiente e induz à taquicardia reflexa, o que pode ser um efeito indesejável em pacientes com doença cardíaca e uma limitação para a terapia anti-hipertensiva. Este estudo avaliou o efeito hipotensor e vasodilatador do novo doador de NO [Ru(terpy)(bdq)NO+]3+ (TERPY) e comparou com os resultados obtidos com o NPS em ratos Wistar e ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Em outra parte do estudo, foram estudadas diferenças no mecanismo de ação desta droga entre aortas de SHR jovens e velhos. Diferente do observado para o NPS, a hipotensão induzida pelo TERPY é lenta, duradoura e não leva a alterações da frequência cardíaca. Além disso, o TERPY libera quantidades semelhantes de NO em aortas de SHR e Wistar, induzindo relaxamento parcialmente dependente de GCs em ambos os grupos, ao contrário do NPS, que libera mais NO em aortas de SHR e também é mais potente e eficaz em aortas desses animais. Fatores como o estresse oxidativo e a atividade da PDE5 são importantes para o relaxamento do TERPY em SHR, mas a inibição da PDE5 não aumenta a potência do TERPY em aortas de ratos Wistar. Além disso, o relaxamento induzido pelo TERPY é mais potente em anéis de aorta de SHR velhos do que novos. Os mecanismos de ação do TERPY são semelhantes nas aortas desses animais, mas, interessantemente, a incubação com Apocinina aumenta a potência do TERPY em aortas de SHR jovens, mas não de velhos. Em conjunto, estes dados demonstram que o composto TERPY é um doador de NO que possui vantagens em relação ao NPS. Além disso, é mais potente em aortas de animais hipertensos velhos, o que é mais uma vantagem para sua utilização e um incentivo para a realização de novos estudos que possam contribuir para entender melhor seu mecanismo de ação
Análise da ação da ocitocina sobre a remodelação óssea alveolar em ratas wistar de 12, 18 e 24 meses
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2013-04-05) Colli, Vilma Clemi [UNESP]; Dornelles, Rita Cassia Menegati [UNESP]; Spritzer, Poli Mara [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A ação da ocitocina (OT) como regulador direto da massa óssea foi reportada em roedores jovens e este efeito anabólico foi atribuído à ação periférica deste hormônio. O objetivo deste estudo foi investigar a ação periférica de OT no processo de reparo alveolar de ratas Wistar de 12, 18 e 24 meses. Ratas de 12 meses com ciclo estral normal e ratas de 18 e 24 meses em diestro permanente receberam duas injeções intra-peritoniais (12 horas de intervalo) de salina (NaCl 0,15M – grupos controle) ou OT (134g/Kg – grupos tratados). Sete dias após, o incisivo direito foi extraído e as análises foram realizadas com 28 dias de reparo alveolar (35 dias após administração de salina ou OT). Os resultados plasmáticos de cálcio e fósforo não diferiram entre os grupos. Os marcadores bioquímicos sistêmicos de formação óssea, fosfatase alcalina (FAL) e osteocalcina (OC), não revelaram diferença significativa de valores na comparação entre grupos controle e tratado de 12 meses, porém esta diferença foi significativa para os dois marcadores quando os animais tratados de 18 e 24 meses foram comparados com os respectivos controles. A análise histomorfométrica e a reação de imunohistoquímica contra OC confirmaram estes resultados mostrando que o tratamento com OT, promoveu maior formação óssea nos animais de 18 e 24 meses. O marcador sistêmico de reabsorção óssea, fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) não foi estatisticamente diferente entre animais dos grupos controle e tratado de 12 e 18 meses, porém nos de 24 meses este valor foi significativamente menor nos animais tratados indicando diminuição de reabsorção por ação de OT nos animais desta idade. A imunomarcação para TRAP realizada nos cortes alveolares confirmou os...
Parâmetros biofísicos, bioquímicos e imunohistoquímicos de fêmures de Rattus novergicus albinus em diferentes idades para padronização de valores de referência estática e dinâmica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2013-02-22) Coêlho, Juliana de Carvalho Apolinário [UNESP]; Louzada, Mário Jefferson Quirino [UNESP]; Nunes, Maria Tereza [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Neste estudo foram avaliadas características ósseas dos fêmures de ratos machos Wistar, em diferentes idades, provendo fundamentação científica para o desenvolvimento de estratégias e mecanismos de prevenção de doenças ósseas. Para tanto, realizou-se a determinação dos parâmetros do fêmur de Rattus novergicus albinus com 2, 4, 6, 12, 14, 16 e 20 meses de idade, utilizando densitometria óssea, ensaio mecânico, análises celulares, análise de volume ósseo percentual, espessura trabecular, número de trabéculas e separação trabecular obtidas por microtomografia computadorizada. Os parâmetros ósseos foram apresentados como média e erro padrão da média, submetidos à análise de variância – ANOVA e teste de Tukey com p<0,05 para comparação entre os grupos. Os resultados indicaram alterações relacionadas com a idade, demonstrando que a força máxima, a rigidez, o material mineral do fêmur, a densidade mineral óssea do colo e cabeça do fêmur, o volume ósseo percentual, a espessura trabecular e a separação entre as trabéculas da cabeça do fêmur apresentaram aumento significativo (p<0,05) aos 12 meses de idade em relação aos animais mais novos e uma diminuição significativa (p<0,05) aos 16 e 20 meses de idade em relação aos animais de 12 meses. Houve menor marcação de TRAP em relação a OC nos animais jovens e adultos (2 e 12 meses de idade). Com base nos achados deste estudo, pode-se concluir que há uma progressão das características ósseas de Rattus novergicus albinus, linhagem Wistar, machos, até 12 meses de idade e uma diminuição dos parâmetros ósseos aos 16 e 20 meses de idade

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