Obtenção de anticorpos monoclonais murinos reconhecedores de células tumorais prostáticas humanas

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Data

2017-04-06

Autores

Almeida, Rodrigo de [UNESP]

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Editor

Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

O câncer de próstata (CaP) é o mais diagnosticado e a segunda causa de morte por câncer entre os homens na América e nos países da Europa Ocidental. No Brasil, o número de novos casos de CaP estimado para o ano de 2016 foi de 61.200. A forma mais letal do CaP é aquele resistente à castração, nos quais os tratamentos disponíveis conferem sobrevida média de 24 meses. Não há terapias curativas efetivas para os estágios avançados. Por essa razão, tratamentos adjuvantes associados à quimioterapia e radioterapia têm grande importância; destaque à imunoterapia passiva que utiliza anticorpos monoclonais (AcM), ferramentas que também tem relevância no diagnóstico e estadiamento da doença. Nesse sentido, esse projeto teve como objetivo principal a obtenção de um painel de AcM murinos reconhecedores de células tumorais prostáticas humanas. Para a obtenção dos AcM foi estabelecido um banco de células prostáticas e, também, de células mielomatosas murinas não secretoras de imunoglobulinas utilizadas durante todas as etapas de produção. Foram utilizados camundongos Balb/C imunizados pela técnica de imunização subtrativa com o uso da ciclofosfamida como agente tolerizador com um e dois ciclos (LNCAPS e LNCAPSS, respectivamente) e pela técnica convencional sem o uso de ciclos de tolerização (LNCAP), tendo como tolerógeno células não tumorais da linhagem RWPE-1 e como imunógeno, células tumorais da linhagem LNCaP. Após o término das imunizações, os camundongos foram sacrificados e os baços coletados para obtenção de linfócitos para fusão com células mielomatosas. Foi obtido o total de 12 hibridomas produtores de anticorpos positivos para o imunógeno. Foram clonados os 4 melhores hibridomas, obtendo-se o total de 94 clones com positividade acima de 90% contra o imunógeno, porém positivos também na média de 66,07% contra o tolerógeno. Com os resultados obtidos e com resultados obtidos em trabalhos relacionados do grupo concluiu-se que a eficiência da técnica de imunização subtrativa para obtenção de anticorpos específicos com o uso de ciclofosfamida está associada com o número de ciclos de tolerização.
Prostate cancer (PCa) is the most diagnosed and the second leading cause of cancer deaths among men in America and in Western European countries. In Brazil, the number of new cases of PCa estimated for the year 2016 was 61,200. The most lethal form of PCa is that resistant to castration, in which the available treatments confer an average survival of 24 months. However, there are no effective curative therapies for the advanced stages. For this reason, adjuvant treatments associated with chemotherapy and radiotherapy are of great importance; The use of passive immunotherapy using monoclonal antibodies (MAbs), tools that also have relevance in the diagnosis and staging of the disease. In this sense, this project had as main objective the obtaining of a panel of murine MAbs recognizing human prostatic tumor cells. In order to obtain the MAbs, a bank of prostatic cells and also non-secretory murine myelomatosis cells used during all stages of production were established. Balb/C mice immunized by the subtractive immunization technique with the use of cyclophosphamide as a tolerant agent with one and two cycles (LNCAPS and LNCAPSS, respectively) and the conventional technique without the use of tolerance cycles (LNCAP) were used as tolerogen Non-tumor cells of the RWPE-1 lineage and as immunogen, tumor cells of the LNCaP lineage. After the immunizations were completed, the mice were sacrificed and the spleens collected to obtain lymphocytes for fusion with myelomatosis cells. A total of 12 hybridomas producing antibodies to the immunogen were obtained. The 4 best hybridomas were cloned, obtaining a total of 94 clones with positivity above 90% against the immunogen, but also 66.07% positive against the tolerogen. With the results obtained and with results obtained in related works of the group, it was concluded that the efficiency of the subtractive immunization technique to obtain specific antibodies with the use of cyclophosphamide is associated with the number of cycles of tolerization.

Descrição

Palavras-chave

Anticorpos monoclonais, Câncer de próstata, Neoplasias da próstata, Imunização subtrativa, Monoclonal antibodies, Cancer prostate, Subtractive immunization, Prostatic neoplasms

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