Uso de meio condicionado por células estromais mesenquimais uterinas durante o cultivo in vitro de embriões bovinos
Carregando...
Data
2018-11-05
Autores
Cintra, Lais do Nascimento
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
As tecnologias de reprodução assistida, tais como a fertilização in vitro (FIV), transferência de embriões, transgenia e clonagem, ainda não tem o impacto comercial desejado devido a baixa produção embrionária. Apenas 30 a 40% dos blastocistos desenvolvidos são obtidos de oócitos após a MIV, fertilização e cultivo dos embriões, embora 80% dos oócitos maturados in vitro sejam fertilizados com sucesso. O soro fetal bovino (SFB) é o suplemento mais utilizado no cultivo de embriões in vitro, uma vez que melhora o desenvolvimento dos blastocistos. Apesar disso, sua presença está relacionada a alterações do metabolismo embrionário, perda de qualidade e indução de modificações na expressão de vários genes embrionários. Na tentativa de minimizar os efeitos deletérios do SFB, várias citocinas e fatores de crescimento têm sido acrescentados aos meios de cultivo embrionários in vitro, com a intenção de mimetizar as condições de cultivo in vivo. O presente experimento tem como objetivo avaliar e comparar os efeitos da adição do SFB e de meio condicionado por células mesenquimais estromais (MSCs) durante o cultivo embrionário. Os parâmetros analisados foram a viabilidade embrionária, apoptose e o perfil transcricional de genes relacionados à qualidade dos embriões. Não foi observado uma diferença (P≥0,05) na clivagem dos blastocistos, porém observou-se que a taxa de produção de embriões utilizando SFB no CIV foi maior (P≤0,05) quando comparada com MC, mas não diferiu (P≥0,05) do grupo produzido com BSA. A expressão relativa de mRNA para ELOVL6 foi maior no grupo MC, para CASP3 no grupo BSA, e para ACSL3 e VEGF no grupo SFB. Em conjunto, esses dados sugerem que o MC pode ser utilizado como uma alternativa ao SFB. Observamos um perfil de expressão gênica diferente, sugerindo que o MC inibiu o aumento da expressão relativa de mRNA para CASP3. Ademais, o MC favoreceu o número total de células, inibiu a porcentagem de células em apoptose e produziu um embrião de melhor qualidade.
Endometrial mesenchymal stromal cell (eMSCs) secretes bioactive molecules such as cytokines and growth factors which are released as soluble factors or through extracellular vesicles (EVs). Conditioned medium (CM) of the MSCs maintains the immunomodulation and regenerative potential properties of the cells that produced it. This study investigated the use of CM by eMSC plus BSA as alternative to FBS in embryo culture medium. The developmental ability and quality of bovine embryos were determined by assessing their cell number and gene expression. The percentage of embryos that underwent cleavage was similar (P>0.05) among the groups but blastocyst formation was higher (P<0.05) in FBS group. The total cell number was higher in CM group, but not statistically different from the others (P>0.05). The relative mRNA expression of ELOVL6 was higher in the CM group, CASP3 in the BSA group, ACSL3 and VEGF in the FBS group. Taken together, these data suggest that CM can be used as an alternative supplement to FBS. We observed a different gene expression profile, suggesting the CM inhibited an increase in the relative mRNA levels for CASP3. Moreover, the CM favored the total number cells, inhibited the percentage of cells in apoptosis and produces better quality embryo.
Endometrial mesenchymal stromal cell (eMSCs) secretes bioactive molecules such as cytokines and growth factors which are released as soluble factors or through extracellular vesicles (EVs). Conditioned medium (CM) of the MSCs maintains the immunomodulation and regenerative potential properties of the cells that produced it. This study investigated the use of CM by eMSC plus BSA as alternative to FBS in embryo culture medium. The developmental ability and quality of bovine embryos were determined by assessing their cell number and gene expression. The percentage of embryos that underwent cleavage was similar (P>0.05) among the groups but blastocyst formation was higher (P<0.05) in FBS group. The total cell number was higher in CM group, but not statistically different from the others (P>0.05). The relative mRNA expression of ELOVL6 was higher in the CM group, CASP3 in the BSA group, ACSL3 and VEGF in the FBS group. Taken together, these data suggest that CM can be used as an alternative supplement to FBS. We observed a different gene expression profile, suggesting the CM inhibited an increase in the relative mRNA levels for CASP3. Moreover, the CM favored the total number cells, inhibited the percentage of cells in apoptosis and produces better quality embryo.
Descrição
Palavras-chave
RT-qPCR, suplementação, meio condicionado, célula mesenquimal estromal endometrial, cultivo embrionário, , supplementation, endometrial mesenchymal stromal cell, conditioned medium, total cell number, embryo culture