Detecção de parvovirus canino 2 com uso de nanopartículas de ouro

Carregando...
Imagem de Miniatura

Data

2022-06-30

Autores

Yamakawa, Ana Carolina

Título da Revista

ISSN da Revista

Título de Volume

Editor

Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

A parvovirose canina, causada pelo parvovírus canino 2 (PVC-2), acomete principalmente cães jovens não vacinados, causando um quadro gastrointestinal grave que pode levar a morte. O desenvolvimento de técnicas diagnóstico de baixo custo e rápidas são necessários, uma vez que somente o diagnóstico clínico não é conclusivo. Biossensores, como as nanopartículas de ouro, possuem características físico-químicas dinâmicas que possibilitam a transdução de diversos sinais (ópticos, plasmônicos, eletroquímicos), o que os torna eficientes sensores. O objetivo do presente projeto foi desenvolver e padronizar a identificação de PVC-2 a partir de amostras de fezes, utilizando nanopartículas de ouro modificadas com a deposição de anticorpos. Protocolo foi padronizado com uso de anticorpo monoclonal, policlonal e a combinação de ambos. Um total de 60 amostras de fezes positivas e 5 negativas na qPCR para PVC-2 foram submetidas a técnica após diluição na proporção 1:150 em PBS. Para todos os anticorpos houve um aumento significativo no comprimento de onda pela técnica de LSPR após a adição das amostras positivas. A combinação de ambos os anticorpos apresentou a maior diferença. Em contrapartida, ao adicionar as amostras negativas, não houve diferença estatisticamente significativa no comprimento de onda em comparação a etapa com os anticorpos. Amostras de adenovirus e circovirus suíno 2 também foram submetidas a técnica, não sendo detectado ligações inespecíficas. Ao comparar os valores de aumento do comprimento de onda, com os resultados de qPCR e hemaglutinação, não foi constatada uma correlação de valores, evidenciando que esse protocolo apresenta resultados qualitativos (positivo e negativo). Em conclusão, a detecção do PVC-2 foi confirmada pela análise de LSPR, sendo essa uma técnica que proporciona um diagnóstico sensível e específico de forma rápida (~ 40 min) e com baixo custo (~R$5/amostra). Os resultados aqui encontrados são promissores, podendo servir de base para futuros protocolos de point of care testing.
Canine parvovirosis, caused by canine parvovirus 2 (CPV-2), affects mostly young unvaccinated dogs, causing a severe gastrointestinal condition that can lead to death. The development of low-cost and rapid diagnostic techniques is necessary, since only clinical diagnosis is not conclusive. Biosensors, such as gold nanoparticles, have dynamic physicochemical characteristics that allow the transduction of various signals (optical, plasmonic, electrochemical), which makes them efficient sensors. The objective of the present project was to develop and standardize the identification of CPV-2 from stool samples using gold nanoparticles modified with antibody deposition. Protocol was standardized using monoclonal antibody, polyclonal antibody, and combination of both. A total of 60 stool samples positive and 5 negatives in qPCR for CPV-2 were submitted to the technique after dilution at a ratio of 1:150 in PBS. For all antibodies there was a significant increase in wavelength by the LSPR technique after the addition of the positive samples. The combination of both antibodies showed the greatest difference. In contrast, when adding the negative samples, there was no statistically significant difference in wavelength compared to the step with the antibodies. Samples of adenovirus and porcine circovirus 2 were also submitted to the technique, and no nonspecific binding was detected. When comparing the wavelength increase values, with the qPCR and hemagglutination results, no correlation of values was found, evidencing that this protocol presents qualitative results (positive and negative). In conclusion, the detection of CPV-2 was confirmed by LSPR analysis, and this is a technique that provides a sensitive and specific diagnosis quickly (40 min) and at low cost (~R$5/sample). The results found here are promising and may serve as a basis for future point of care testing protocols.

Descrição

Palavras-chave

Biossensores, Nanopartículas de ouro, PCV-2, Parvovirus canino

Como citar