Dissertações - Reabilitação Oral - FOAR

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Efeito de sucessivas sessões de clareamento caseiro na susceptibilidade ao manchamento e a variações de translucidez e brancura e na topografia de materiais monolíticos CAD/CAM
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-25) Cárdenas Ramos, Alejandro; Fonseca, Renata Garcia [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O efeito de sucessivas sessões de clareamento caseiro nas propriedades ópticas de materiais monolíticos CAD/CAM requer investigação para saber se este procedimento é seguro quanto a essas propriedades. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da simulação de 1 Procedimento clareador caseiro ao ano, por até 3 anos, na susceptibilidade ao manchamento (ΔE00) e a variações de translucidez (ΔTP00) e brancura (ΔWID) e na topografia de materiais monolíticos CAD/CAM. Discos (10,0 mm x 0,7 mm) de Lava Ultimate (LU), Vita Enamic (VE), IPS Empress CAD (EMP) e IPS e.max CAD (EMAX) foram alocados como segue: 1) não clareados ou 2) clareados com peróxido de carbamida a 10%. Cada procedimento clareador anual constituiu-se na aplicação do gel clareador (Opalescence PF) por 10 h ao dia por 14 dias. Após a mensuração inicial (M0) das coordenadas CIE L*a*b* em espectrofotômetro, os espécimes foram clareados ou não e, então, imersos por um período simulado de 1 ano de exposição ao café antes da próxima mensuração (M1). Este processo (clareamento ou não => manchamento => mensuração) foi repetido mais duas vezes, resultando em M2 e M3. Os valores de ΔE00, ΔTP00 e ΔWID entre M1, M2 e M3 em relação à M0 foram calculados. A topografia foi analisada por microscopia eletrônica de varredura em cada uma das quatro etapas. Os dados foram analisados por ANOVA de Medidas Repetidas Mista e pós-teste de Bonferroni (α=0,05). Em geral, o clareamento aumentou a susceptibilidade ao manchamento de todos os materiais quando comparado aos respectivos grupos não clareados. Ao longo dos anos, o LU, VE e EMAX tiveram a susceptibilidade ao manchamento aumentada pelo clareamento. O clareamento diminuiu a translucidez do VE quando comparado aos grupos não clareados e ao longo dos anos. Quando comparado aos grupos não clareados, em geral, o clareamento favoreceu o manchamento do LU e EMAX e aumentou a brancura do EMP, enquanto o VE não foi afetado. No LU, a brancura diminuiu ao longo dos anos em ambos os tratamentos, enquanto a brancura dos demais materiais não foi afetada com o tempo. Todos os materiais apresentaram alterações topográficas progressivas com o aumento do número de sessões. Sucessivas sessões de clareamento caseiro com peróxido de carbamida a 10% afetaram adversamente a topografia e as propriedades ópticas dos materiais avaliados.
O peróxido de hidrogênio aumenta a eficácia da terapia fotodinâmica em biofilmes de Candida albicans suscetível e resistente ao fluconazol
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-07) Sousa, Tábata Viana de; Pavarina, Ana Claudia [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Candida albicans e a matriz são componentes fundamentais para o desenvolvimento de biofilmes, e os ensaios devem visar ambos os componentes. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do peróxido de hidrogênio (H2O2) combinado à terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), mediada por Photodithazine® (P) e LED (L) sobre biofilme de Candida albicans sensível ao fluconazol (CaS) ATCC 90028 e resistente (CaR) ATCC 96901. Os biofilmes foram cultivados por 48 horas e foram expostos a H2O2 (10mM) por 5 min, seguido pela aplicação de P e L isoladamente ou combinados (H2O2+P+L+, H2O2+P-L+, H2O2, P+L+, PL -, P+L-, P-L+; n=12). Após o tratamento, os biofilmes foram avaliados por unidade formadora de colônia/mL, componentes da matriz extracelular [polissacarídeos solúveis em água (WSP) e em álcali (ASP), proteínas, eDNA], biomassa (total e insolúvel) e proteínas. A Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), foi realizada. Os dados foram analisados por um teste ANOVA de três vias com o teste post-hoc de Bonferroni. A exposição dos biofilmes a 10 mM de H2O2 por 5 minutos seguido de aPDT reduziu as proteínas solúveis e insolúveis da matriz, eDNA, ASP, WSP e o peso seco insolúvel e solúvel dos biofilmes de CaS e de CaR. A MEV revelou redução no número de células do biofilme e dispersão das hifas do grupo H2O2+P+L+ em relação ao P-L- (controle). Em suma, a associação com H2O2 aumentou a eficácia da aPDT e reduziu os componentes da matriz extracelular do biofilme; logo essa associação se mostra promissora para possíveis aplicações in vivo, já que in vitro foi obtido resultados bastante satisfatórios.
Alterações de cor e brilho de cerâmicas CAD/CAM maquiadas e/ou glazeadas após termociclagem e escovação com dentifrícios convencional e clareador.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-09) Mascaro, Bruno Arruda; Reis, José Maurício dos Santos Nunes [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este estudo objetivou avaliar as alterações de cor e brilho de cerâmicas monolíticas CAD/CAM, maquiadas e/ou glazeadas, à base de porcelana feldspática com alto teor de leucita (EMP; IPS Empress® CAD), dissilicato de lítio (EMAX; IPS e.max® CAD), zircônia totalmente estabilizada de alta translucidez (PAN; Prettau® 4 Anterior®) e uma cerâmica híbrida (ENA; VITA Enamic®), após escovação com diferentes dentifrícios, convencional e clareador, seguida de termociclagem. Para cada material, espécimes (n=40, 12 x 10 x 1,5 mm) foram obtidos e divididos nos grupos: STAIN/GLAZE (n=20), em que receberam aplicação de seu respectivo pigmento extrínseco (stain) e glaze; ou GLAZE (n=20), em que receberam somente o glaze. Em seguida, foram aleatoriamente divididos em dois subgrupos a serem submetidos ao envelhecimento termomecânico acelerado por ensaio de escovação (50.000 ciclos, carga vertical 1,96N e 1,0 Hz), variando o tipo de dentifrício em convencional (n=10, Colgate Total 12 Clean Mint, RDA 70) ou clareador (n=10, Colgate Total 12 Professional Whitening, RDA 96); e à termociclagem (6.000 ciclos, 5,0-55ºC, 30 s), totalizando 5 anos de simulação clínica. Dados iniciais e após o envelhecimento foram obtidos com espectrofotômetro (VITA Easyshade® V) de acordo com os parâmetros CIELAB (L*, a* e b*) ou CIEDE2000 (L*, C* e H*) para o cálculo da alteração de cor (ΔEab e ΔE00) e do brilho (ΔL). Os dados foram analisados quanto à normalidade (Shapiro-Wilk) e homogeneidade de variâncias (Levene) com α=0,05. Foram conduzidas 2-way ANOVAs, corrigidas por método de Welch e pós teste de Games-Howell (α=0,05). Independente do dentifrício, ENA apresentou os maiores valores (p<0,01) de ΔEab e ΔE00 para amostras do grupo GLAZE e STAIN/GLAZE. Amostras de PAN apresentaram alterações significativas de ΔEab do grupo STAIN/GLAZE em relação a EMP e EMAX e de ΔE00 dos grupos GLAZE e STAIN/GLAZE em relação a EMAX. Com exceção de EMP, os demais materiais do grupo GLAZE apresentaram diminuição do brilho após escovação com dentifrício convencional. PAN e ENA apresentaram redução do brilho após escovação com dentifrício clareador do grupo GLAZE. ENA do grupo STAIN/GLAZE apresentou a maior redução de brilho, independente do dentifrício. Apenas ENA apresentou valores de ΔEab clinicamente perceptíveis (ΔEab > 1,2). Todos os grupos produziram valores clinicamente aceitáveis para ΔEab (< 2,7) e ΔE00 (< 1,8). No geral, a cor e o brilho das cerâmicas CAD/CAM maquiadas e/ou glazeadas alteraram após o envelhecimento termomecânico, com escovação seguida de termociclagem. Apesar de influenciar a cor e o brilho de alguns materiais, os diferentes dentifrícios não foram fator de variação clinicamente significante nas propriedades ópticas avaliadas das cerâmicas monolíticas caracterizadas extrinsecamente.
Efeito da espessura de zircônia e dissilicato de lítio monolíticos sob fadiga acelerada progressiva
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-07-07) Baldochi, Mariana Ribeiro; Adabo, Gelson Luís [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O lascamento da porcelana de cobertura é um problema recorrente em sistemas totalmente cerâmicos a base de zircônia policristalina estabilizada por ítria (YTZP) e, para eliminar a necessidade do material de recobrimento, foram desenvolvidas zircônias com maior grau de translucidez indicadas para o uso monolítico. No entanto, o comportamento mecânico desses novos materiais sob fadiga e a espessura mínima indicada ainda são incertos. O objetivo deste estudo foi avaliar as zircônias monolíticas Prettau (P) e Prettau Anterior (PA) e o dissilicato de lítio IPS e.max CAD (DL), por meio de ensaio de fadiga acelerada progressiva variando-se a espessura do material. Foram confeccionados discos com as cerâmicas (n=54/material) com as dimensões finais de 12 mm de diâmetro e espessura de 0,5 mm, 1,0 mm e 1,5 mm. Os discos foram cimentados sobre discos de resina epóxi G10 de 12 mm de diâmetro e 3 mm de espessura. Os corpos-de-prova (n=18/grupo) foram submetidos ao ensaio de fadiga acelerada na distribuição 3 x 2 x 1, sendo 9 espécimes testados em regime leve, 6 no regime moderado e 3 no agressivo. A distribuição das falhas e as probabilidades de sobrevida foram submetidos à análise de Weibull de dano acumulado, por meio do software ReliaSoft. O modo de falha foi investigado para identificação do tipo e da origem da fratura. Os resultados de confiabilidade para uma missão calculada de 50000 ciclos a 500 N variaram de 68% a 85% para Prettau Anterior, de 97 a 99% para e.max CAD e 86% a 100% para Prettau. Na espessura de 1,0 mm e 1,5 mm o e.max CAD apresentou confiabilidade superior a Prettau Anterior e na espessura de 1,0 mm houve redução significativa da confiabilidade da Prettau. Houve diferença estatística significante na resistência característica e no módulo de Weibull, sendo que P 1,5 mm apresentou a mais elevada média desses parâmetros. A avaliação do modo de falha revelou que os grupos DL 0,5 mm, PA em todas as espessuras e P 0,5 mm e P 1,5 mm, as trincas foram predominantes radiais, associadas a algumas trincas tipo cone interno. Foram observadas trincas radiais associadas a trincas tipo cone interno em número maior e em diferentes direções para o grupo P 1,0 mm. Concluiu-se que a zircônia totalmente estabilizada por ítria, apresenta menor confiabilidade e resistência característica. Ambos os tipos de zircônia se mostraram sensíveis à variação da espessura, particularmente na medida intermediária. O dissilicato de lítio foi pouco influenciado pela espessura.
Efeito em longo prazo do suco gástrico alternado com escovação na rugosidade, topografia e susceptibilidade ao manchamento de materiais monolíticos CAD/CAM
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-07-08) Cruz, Marlon Eduardo Menezes da; Fonseca, Renata Garcia [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Declaração do problema. O comportamento de materiais monolíticos CAD-CAM submetidos a ação do suco gástrico alternado com escovação ao longo dos anos precisa ser mais investigado. Proposta. Avaliar, durante um período simulado de 5 anos, o efeito da simulação do suco gástrico alternado com a escovação na rugosidade, topografia e susceptibilidade ao manchamento de materiais monolíticos CAD-CAM. Materiais e métodos. Discos fabricados a partir de Lava Ultimate (LU), Vita Enamic (VE), IPS Empress CAD (EMP), IPS e.max CAD (IPS) e Vita Suprinity (VS) foram alocados em dois tratamentos: 1) alternância entre saliva artificial e escovação (controle) ou 2) alternância entre suco gástrico artificial e escovação, ambos simulando 1, 3 e 5 anos de exposição desses materiais a ambos os cenários. A rugosidade (Sa) (n=15) e topografia (n=1) foram avaliadas respectivamente em microscópio confocal e microscópio eletrônico de varredura (MEV) na linha de base (T0) e ao final do 1º (T1), 3º (T3) e 5º (T5) anos de exposição. Para a susceptibilidade ao manchamento (ΔE00) (n=15), um espectrofotômetro foi usado para registrar as coordenadas de cor CIE L *, a * e b * na leitura inicial e, ao final do 5º ano de exposição, as amostras foram imersas em água deionizada, café ou coca-cola por um período correspondente a 5 anos de imersão e então uma segunda leitura foi realizada. Os dados de rugosidade e cor foram submetidos à análise estatística (α=0,05). A significância clínica foi baseada nos limites de 50%: 50% de perceptibilidade e 50%: 50% de aceitabilidade para ΔE00. Resultados. O tratamento não afetou a rugosidade dos materiais, exceto para o VE em T3 e T5, em que o suco gástrico + escovação proporcionou valores significativamente maiores que saliva artificial + escovação. Diferentemente dos demais materiais, LU e VE apresentaram aumento da rugosidade ao longo do tempo em ambos os tratamentos. Independentemente do tratamento, o LU e o VE exibiram rugosidade significativamente maior que os demais materiais, além de alterações em sua topografia, mais evidenciada no LU. O tratamento não influenciou a susceptibilidade ao manchamento dos materiais por cada uma das soluções avaliadas. O LU e o VS foram mais afetados pelo café, o VE e o EMP foram mais afetados pela coca-cola, enquanto o IPS foi afetado de forma semelhante e clinicamente imperceptível pelas três soluções. No café, o VS foi o mais afetado, seguido do LU e VE, enquanto na coca-cola, os mais afetados foram o VE e EMP na saliva artificial + escovação e ambos os materiais e também o VS no suco gástrico + escovação. Conclusões. O suco gástrico + escovação, quando comparado à saliva artificial + escovação, afetou apenas a rugosidade do VE, nos tempos T3 e T5. Baseado nas propriedades avaliadas, o IPS seria o material mais indicado para a reabilitação de pacientes com transtornos alimentares.
Análise comparativa dos métodos de quantificação das formas morfológicas de Candida albicans em culturas planctônicas e biofilmes
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-07-07) Soares, Amanda Brandão; Mima, Ewerton Garcia de Oliveira [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Candida albicans é o principal fungo patógeno que acomete os seres humanos e que apresenta a capacidade de se desenvolver em diferentes morfologias (leveduras, pseudo-hifas e hifas), característica essa denominada de polimorfismo. Esse polimorfismo compromete os métodos de quantificação que requerem precisão e acurácia, como as pesquisas que envolvem fungos filamentosos. O objetivo deste estudo foi comparar os métodos de quantificação de C. albicans por unidades formadoras de colônias (UFC/mL) e por atividade metabólica (Ensaio XTT) com a contagem de células viáveis e de núcleos celulares em Microscópio Confocal. Cepa padrão SC5314 e isolado clínico de C. albicans foram utilizados. Culturas planctônicas padronizadas de cada cepa de C. albicans foram desenvolvidas nas formas de levedura e de filamentos e submetidas a três métodos de quantificação: UFC/mL e contagem celular. Para contagem celular, o Microscópio Confocal foi utilizado com a suspensão fúngica tratada com diferentes marcadores fluorescentes para evidenciar células viáveis, células não viáveis e os núcleos celulares. Biofilmes também foram cultivados em orifícios de placas de 48 poços por 48 horas e foram submetidos aos mesmos testes mencionados para as culturas planctônicas, além do ensaio de XTT. Os dados foram submetidos a uma análise de concordância (Coeficiente de Correlação Intraclasse e Bland-Altman) e de correlação de Spearman (α = 5%) entre os métodos (UFC/mL, contagem celular e XTT). Os resultados demonstraram que não houve concordância (ρ ≤ 0,428) entre o método de UFC/mL e contagem de células para as morfologias de leveduras e filamentos da cepa padrão SC5314 e do isolado clínico de C. albicans, apesar dos métodos terem apresentado alta (rS ≥ 0,884) e significativa (p < 0,001) correlação. Também foi vericado um viés de proporção (p < 0,001) entre esses métodos. Biofilmes de ambas as cepas também apresentaram ausência de concordância (ρ ≤ 0,566) e correlação forte (rS ≥ 0,852) e significativa (p ≤ 0,001) entre os métodos de UFC/mL e células/mL, além de viés de proporção (p < 0,001). Na análise do XTT foi possível visualizar ausência de concordância (p < 0,001), apesar de uma forte e significativa correlação entre os métodos de quantificações (UFC/mL e células/mL). Para todas as morfologias e condições de cultivo, a quantificação por UFC/mL foi menor do que a quantificação por células/mL, sendo então o primeiro um método que subestima a quantificação celular of C. albicans.
Avaliação da eficácia da DNase associada a terapia fotodinâmica na inativação de biofilmes de isolados clínicos de Candida albicans resistente a fluconazol
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-06-30) Pereira, César Augusto Abreu; Pavarina, Ana Claudia [UNESP]; Furlan, Marlise Inêz Klein [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFD) promove a inativação dos microrganismos em cultura planctônica, entretanto, biofilmes são menos sensíveis à essa terapia. A resistência dos biofilmes de Candida spp. é multifatorial e está associada ao efeito protetor da matriz extracelular do biofilme (MEC) que impede a penetração do agente fotossensibilizador (FS) e de fármacos. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da enzima DNase I associada à TFD, mediada por Photodithazine® (200 mg/L) e Luz LED (660 nm; 50 J/cm2), sobre biofilmes de isolados clínicos de C. albicans resistentes ao fluconazol (CaR). Biofilmes de 48 horas foram formados a partir das cepas de CaR [ATCC 96901; e dois isolados clínicos (R14 e R70)]. A DNase foi utilizada com objetivo de degradar a MEC dos biofilmes e potencializar o efeito da TFD. Os biofilmes foram expostos a pré-incubação com DNase por 5 min, seguida da aplicação do fotossensibilizador (P) e da Luz (L), de forma isolada ou em associação, originando 8 grupos de tratamento (P+L+, P-L+, P+L-, P-L-, P-L-DNase, P+L+DNase, P+L-DNase e P-L+DNase; n=12). A eficácia dos tratamentos foi avaliada através dos seguintes métodos: contagem de unidades formadoras de colônias (UFC), quantificação de: peso seco total e insolúvel, proteínas solúveis e insolúveis, polissacarídeos solúveis em água (WSP) e em álcali (ASP), e DNA extracelular (eDNA). Os dados foram submetidos ao teste ANOVA three-way com pós teste de Bonferroni. O tratamento com DNase em associação à TFD (P+L+DNase) apresentou redução de 1.92; 1.65 e 1.29 em log10 da viabilidade celular para as cepas ATCC 96901, R14 e R70, respectivamente. Também foi observado redução dos componentes da MEC dos biofilmes, como WSP e eDNA, bem como sua biomassa insolúvel quando comparados com o grupo controle (P-L-). O peso seco total e a quantificação de proteínas não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos. Todas as cepas apresentaram o mesmo padrão de comportamento quando tratadas com DNase, e os componentes da MEC foram afetados, potencializando a eficácia da TFD.
Existe associação entre hábitos parafuncionais em vigília e a presença de disfunção temporomandibular muscular? Revisão sistemática da literatura e meta-análise
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-06-23) Spavieri, Juliana Homem Padilha; Gonçalves, Daniela Aparecida de Godoi [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Objetivo: Uma revisão sistemática da literatura foi conduzida para avaliar a associação entre a presença de hábitos parafuncionais na vigília e a disfunção temporomandibular (DTM) de origem muscular em indivíduos adultos. Métodos: O protocolo da revisão sistemática foi registrado no banco de dados PROSPERO (Estudo – CRD 42020177807). Foi realizada uma busca sistematizada por estudos nas bases PubMed, Scopus, Web of Science, LILACS, BBO, Biblioteca Cochrane, Embase e na literatura cinzenta. Foram incluídos estudos de desenho observacional conduzidos em amostras de indivíduos adultos, e que tenham investigado a relação entre hábitos parafuncionais orais na vigília e DTM de origem muscular classificada de acordo com os critérios do Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC/TMD). Os critérios da Escala de Newcastle-Ottawa (NOS) para risco de viés foram usados para avaliar a qualidade interna dos estudos incluídos. Resultados: Após a busca nas bases de dados e a remoção das duplicações, 2514 estudos foram identificados. Após a leitura dos títulos, 1121 artigos foram incluídos. Após a leitura dos resumos e o acesso aos textos completos para verificar a elegibilidade, 126 estudos foram selecionados. Dentre eles, 06 foram incluídos nas análises qualitativa e quantitativa. De acordo com a classificação proposta pela NOS, dois estudos foram considerados com alto risco de viés, um foi pontuado como risco de viés moderado, e três foram classificados com baixo risco de viés. Os estudos detectaram relação positiva entre a DTM de origem muscular e diferentes atividades orais parafuncionais (presença de contato dentário não funcional, tensão na mandíbula, face e cabeça, hábito de apertar ou ranger os dentes, mascar chicletes, onicofagia, morder lápis e segurar o telefone no ombro). No entanto, o número de estudos selecionados foi pequeno e dentre eles foi observada heterogeneidade dos dados em relação a escolha dos hábitos parafuncionais a serem avaliados e o método utilizado nesta avaliação. Dois estudos com risco de viés moderado e baixo foram incluídos na meta-análise. A meta-análise mostrou associação entre o hábito de apertar os dentes em vigília e a presença de DTM muscular com risco relativo de 1,95 e intervalo de confiança de 1,66 - 2,31. Conclusão: A revisão apontou uma relação entre o hábito de apertar os dentes em vigília e a DTM muscular. Apesar disso, foi evidenciada a necessidade de maior homogeneidade na metodologia de pesquisa de estudos futuros que abordam esse tema.
Avaliação da eficácia de tt-farnesol liberado por novo sistema de liberação controlada de fármacos contra biofilmes orais patogênicos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2017-07-07) Rocha, Guilherme Roncari; Furlan, Marlise Inêz Klein [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O desenvolvimento de terapias eficazes para o controle de biofilme oral é um desafio. Agentes tópicos usados para tratar ou prevenir doenças orais causadas por biofilme, geralmente, não são mantidos na boca por um período suficiente para exercer o seu potencial terapêutico. Portanto, estratégias que objetivem na retenção e liberação controlada de agentes ativos no local onde o biofilme virulento se desenvolve são necessárias. Assim, nanopartículas carreadoras (NPC) de fármaco que se aderem à hidroxiapatita, à película salivar e aos exopolissacarídeos da matriz extracelular de biofilme foram desenvolvidas. As NPC possuem elementos responsivos à mudanças de pH para a liberação controlada de agentes terapêuticos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia de tratamento tópico utilizando sistema de liberação de fármacos carregado com tt-farnesol sobre película salivar e biofilme misto de Streptococcus mutans e Candida albicans em diferentes superfícies encontradas na cavidade bucal. Para tanto, foram formados biofilmes mistos sobre a superfície de zircônia (LAVA Frame, 3M), de resina acrílica (Lucitone 550, Dentsply) e de hidroxiapatita (controle). Foram aplicados 6 tratamentos tópicos com tempo de exposição de 5 minutos: PBS (tampão fosfato diluente de NPC); NPC-Livre; NPC + tt-farnesol; Veículo (PBS com 15% álcool etílico diluente de tt-farnesol isolado); e tt-farnesol. As análises realizadas foram: biomassa, exopolissacarídeos solúveis e insolúveis em água, pH do meio de cultura, população microbiana e análise da morfologia 3D via microscopia confocal. Os tratamentos com nanopartículas carreada associada ao farnesol mostraram redução na população de S. mutans e de exopolissacarídeos solúveis em água (os quais geram proteção para este biofilme), independente do substrato. Porém, esse tratamento não alterou a população do fungo e aumentou a quantidade de exopolissacarídeos insolúveis em água. Assim, a redução da população da bactéria e a menor proteção da mesma por exopolissacarídeos solúveis torna eficiente o tratamento associado à tecnologia de nanopartículas. Porém, é necessário adequar a estratégia para reduzir a população do fungo e de exopolissacarídeos insolúveis em água.
Efeito da incorporação de nanocristais de celulose em uma resina acrílica para base protética sobre propriedades superficiais e formação de biofilmes simples e misto de Candida albicans e Staphylococcus aureus sensível a meticilina (MSSA)
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-05-27) Santana, Thaís de Sousa; Pero, Ana Carolina [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A utilização de biopolímeros de fontes renováveis como agentes de reforço nanométricos pode representar uma importante inovação em materiais odontológicos. O objetivo desse estudo foi avaliar a adesão e formação de biofilmes simples e mistos de Candida albicans e Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA) e a viabilidade dos micro-organismos na superfície de uma resina acrílica para base de prótese, após a incorporação de nanocristais de celulose (NC). Nanocristais de celulose (NC) isolados a partir de polpa de madeira (Eucalyptus Urograndis) foram incorporados em uma resina acrílica para base de prótese (Onda-Cryl® - OC, ativada por energia de micro-ondas). Discos de resina acrílica (15 x 3 mm) foram obtidos (N=240) em cada condição experimental (grupos 0%NC - controle e 0,75%NC). Previamente aos testes de adesão e formação de biofilmes, foi mensurada a rugosidade média da superfície dos discos (n=120) em rugosímetro digital (Ra, µm) e a energia livre de superfície (ELS) a partir de medidas de ângulo de contato (n=120), obtidas por meio de um goniômetro conectado a um sistema computadorizado. Foi realizada a formação de biofilmes a partir dos inóculos de C. albicans e S. aureus sobre os discos de resina, os quais foram incubados a 37ºC por 90 minutos e 48h. Após ambos os períodos, foram feitas as análises de: metabolismo celular pelo ensaio do XTT (n=9); avaliação da atividade antimicrobiana através da contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/ml) (n=9) e análise por microscopia confocal a laser (n=2). Todas as análises foram realizadas em triplicata em 3 ocasiões distintas. Os dados foram tabulados e submetidos aos testes T de Student e teste não paramétrico U de Mann-Withney, de acordo com a aderência à normalidade, e foi empregado um nível de significância de 5%. A incorporação de NC (0,75%) não exerceu influência sobre os resultados de rugosidade e ELS para a resina OC (P>0,05). Também foi observado, (método XTT e log UFC/mL), que não houve diferença significante entre os grupos para a adesão e formação de biofilme dos diferentes micro-organismos analisados. A microscopia confocal mostrou marcações que evidenciam a viabilidade dos micro-organismos e estas foram semelhantes para ambos os grupos (Controle e NC 0,75%). Dessa forma, conclui-se que a incorporação de 0,75% de NC não exerceu influência sobre as propriedades físicas (rugosidade e energia livre de superfície) e microbiológicas (adesão e formação de biofilme/microscopia confocal) da resina acrílica para base protética.
Comparação de métodos da performance mastigatória em usuários de próteses totais convencionais bimaxilares
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-03-05) Mantovani, Marina Letícia Rezende; Arioli Filho, João Neudenir [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Considerando uma variedade de métodos para análise do desempenho mastigatório na literatura vigente, o presente estudo do tipo transversal teve por objetivo comparar três métodos mais empregados de avaliação da performance mastigatória em usuários de próteses totais convencionais bimaxilares. Uma amostra de 24 indivíduos (14 mulheres e 10 homens) com idade de 60 a 89 anos foi selecionada e, previamente reabilitados com pares de próteses totais convencionais. O protocolo de testes e métodos foi feito em 10, 20 e 40 ciclos mastigatórios com 3 porções dos seguintes materiais: 17 cubos de silicone Optocal pelo método de múltiplas peneiras; 5 amêndoas pelo método de múltiplas peneiras e goma de mascar de duas cores (Vivident Fruitswing) pelo método colorimétrico (software Viewgum). As amostras foram analisadas de maneira específica em cada material-teste. Na análise dos dados, o alimento-teste Optocal foi o que apresentou maior coeficiente de variação dos dados em todos os ciclos mastigatórios avaliados, seguido pela amêndoa e depois goma de mascar. A performance mastigatória dos indivíduos testados foi maior no alimento-teste goma de mascar, seguido da amêndoa e menor no Optocal em todos os ciclos mastigatórios avaliados. Além disso, em todas as técnicas avaliadas, a performance mastigatória foi maior no momento 40 ciclos mastigatórios, seguido pela condição 20 ciclos e por último, 10 ciclos. Evidencia-se que o alimento-teste goma de mascar é um método válido, reprodutível, confiável através do método colorimétrico e, comparativamente mais adequado em testes de performance mastigatória em usuários de próteses totais convencionais
Eficácia clareadora, citotoxicidade trans-amelodentinária e cinética de degradação de géis clareadores contendo óxido de manganês
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-05-06) Ribeiro, Rafael Antonio de Oliveira [UNESP]; Costa, Carlos Alberto de Souza [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Objetivo: Avaliar a eficácia clareadora, citotoxicidade e cinética de degradação de géis clareadores contendo 10% e 35% de H2O2 ativados quimicamente com óxido de manganês (MnO). Métodos: Discos de esmalte e dentina foram manchados e então submetidos ao clareamento com os géis associados a um espessante experimental contendo ou não MnO. Como controle positivo, um gel com 35% de H2O2 foi aplicado por 45 minutos sobre o esmalte, sendo que no controle negativo nenhum tratamento foi realizado. Para determinar a melhor concentração de MnO quanto a eficácia clareadora dos géis (espectrofotômetro de reflexão-UV, sistema CIE L*a*b*), discos manchados foram clareados com géis contendo 2 mg/mL, 6 mg/mL ou 10 mg/mL do catalisador. Para análise de viabilidade celular (MTT e MEV) e estresse oxidativo, o clareamento foi realizado sobre discos manchados adaptados em câmaras pulpares artificiais, sendo os extratos (meio de cultura em contato com a dentina + componentes dos géis que se difundiram pelos discos) coletados e aplicados por 1 h sobre células MDPC-23. A quantificação de H2O2 difundido pelos discos também foi determinada (violeta leuco-cristal/peroxidase). A melhor concentração do catalisador foi utilizada para as análises de cinética de degradação. Os dados numéricos obtidos foram submetidos à análise estatística específica (ANOVA; Tukey). Resultados: Aumento da eficácia clareadora com a adição de MnO foi observado para ambas as concentrações de H2O2 nos géis. A adição do catalisador nos géis reduziu a difusão trans-amelodentinária de H2O2 residual, o estresse oxidativo e consequentemente os efeitos tóxicos dos tratamentos, independente da concentração de H2O2 presente nos produtos. Esses efeitos positivos foram mais evidentes com a incorporação de 10mg/mL de MnO aos géis clareadores, o que também aumentou significativamente a produção de radicais livres e radicais hidroxila (cinética de degradação). Conclusão: Foi possível concluir que a adição do catalisador MnO em géis clareadores com 10% e 35% de H2O2 favorece a produção de radicais livres e radical hidroxila, aumenta a eficácia clareadora dos produtos, bem como diminui o estresse oxidativo e toxicidade trans-amelodentinária sobre células pulpares.
Potencial da terapia fotodinâmica antimicrobiana no desenvolvimento de resistência em Candida albicans
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-04-09) Santana, Luana Mendonça Dias; Pavarina, Ana Claudia [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O fungo Candida albicans, em situações de desequilíbrio imunológico no hospedeiro, pode se tornar um patógeno oportunista e provocar infecções. Tendo em vista a resistência que os microrganismos desenvolveram a fármacos convencionais, a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) vem apresentando resultados promissores como uma terapia alternativa. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial que aPDT possuiu em desenvolver resistência, tolerância ou susceptibilidade em C. albicans em associação com o Photodithazine (PDZ- 25 µg/L; 660 nm; 18 J/cm2) e Curcumina (CUR- 40 µg/L; 455 nm; 18 J/cm2) plaqueados em meio sem e com suplementação de Fluconazol (8 µg/L). C. albicans (ATCC 90028) em culturas planctônicas e biofilme foram submetidas à aplicações sucessivas de aPDT (10 aplicações), como também, a ciclos de recuperação e re-cultivo das colônias que sobreviveram ao tratamento até o momento que não houvesse mais células viáveis para a recuperação e continuação das aplicações. O plaqueamento foi realizado em placas de Ágar Sabourand Dextrose suplementadas ou não com Fluconazol, e os valores das unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL) foram determinados. O teste de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) foi realizado nos primeiros e últimos ciclos de aPDT. O perfil biomolecular das células sobrevivetes as aplicações 1, 4 e 7 de aPDT mediada por PDZ foi investigado através do teste de RT-qPCR. Foi observado no grupo tratamento de aPDT (P+L+) mediada por PDZ redução de aproximadamente 6,8 log10 em culturas planctônicas e aproximadamente 6,2 log10 em biofilme de C. albicans, em ambas metodologias utilizadas. No grupo tratamento de aPDT (C+L+) em associação com a CUR, foi observado um aumento da viabilidade em aproximadamente 1 log10 nos biofilmes de C. abicans. No grupo controle do experimento (P-L-), na metodologia de aplicações sucessivas, não foi observado diferença estatística entre as aplicações (p>0,05). Os resultados demonstraram menor viabilidade de culturas planctônicas e biofilmes de C. albicans cultivadas em placas com fluconazol, quando comparada as placas sem o antifúngico. As últimas sucessivas aplicações de aPDT mediada por PDZ produziram mais ERO, quando comparadas com a primeira aplicação. A aPDT superespressou o gene SOD1 e promoveu redução de expressão do gene CAP1 e ERG11. O tipo de cultura influencia na susceptibilidade à aPDT, pois foram necessárias quantidades distintas de aplicações para sua inativação. A aPDT foi potencializada pelo antifúngico fluconazol, independete do modelo e fotossensibilizador testado. C. albicans (ATCC 90028) em cultura planctônica e biofilme é susceptível à repetidas aplicações de aPDT mediada por PDZ, no entanto, quando mediada por CUR, os biofilmes apresentaram aumento de viabilidade após os ciclos.
Resposta de células pulpares a biomodificação do colágeno pela acroleína e seu efeito sobre a resistência máxima a tração da matriz dentinária e resistência da união resina-dentina
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-02-18) Gomes, Lays Nobrega [UNESP]; Hebling, Josimeri [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Objetivo: Investigar a citotoxicidade transdentinária da acroleína (ACR) sobre células pulpares e a resistência máxima à tração (RMT) da matriz dentinária e resistência da união (RU) resina-dentina após a biomodificação do colágeno dentinário por esse agente promotor de ligações cruzadas. Métodos: Discos de dentina (0,4 mm de espessura) foram obtidos de molares humanos hígidos e adaptados em câmaras pulpares artificiais. Células MDPC-23 foram semeadas na superfície pulpar desses discos e a superfície oclusal foi condicionada com ácido fosfórico por 15s. Sobre a dentina condicionada foi aplicado (n=9): água deionizada (controle), ACR 0,02%, 0,01%, 0,005%, glutaraldeído 5% (GD) ou peróxido de hidrogênio 3%. Após 60s, a superfície foi lavada e as câmaras foram incubadas por 24h. Foi avaliada a viabilidade das MDPC-23 (alamarBlue) aderidas na parede pulpar dos discos e os extratos foram aplicados em novas MDPC-23 e HDPCs (células da polpa dental humana) cultivadas em placas de cultura. Após 24h, essas células foram avaliadas quanto a viabilidade, atividade de fosfatase alcalina (ensaio da timolftaleína), presença de nódulos de mineralização (Alizarin red) e expressão gênica de ALPL, DSPP, MMP2, MMP9 e IL1B (PCRq). Vinte cinco molares adicionais foram seccionados para obter espécimes de dentina (n=50) que foram completamente desmineralizados com ácido fosfórico por 24h. Os espécimes de matriz dentinária foram tratados por 60s com: água, ACR 0,02%, 0,01%, 0,005% ou GD 5% e submetidos ao ensaio de resistência máxima à tração. Por fim, superfícies planas de dentina preparadas em 40 dentes foram condicionadas com ácido fosfórico e tratadas por 60s com água, ACR 0,01%, 0,005% ou GD 5%, seguido de lavagem. Single Bond 2 foi aplicado seguido da construção de um bloco de resina, e após 24h, foram obtidos espécimes (0,81 mm²) para o ensaio de microtração e análise de nanoinfiltração. Os dados foram submetidos aos testes de ANOVA e Tukey (α=0,05). Resultados: Houve redução significante da viabilidade das MDPC-23 semeadas no disco para a ACR 0,02%, ACR 0,01%, GD e peróxido em comparação ao controle. Entretanto, com exceção do peróxido, a maior redução observada foi de apenas 21% para o GD. Para ambas as linhagens celulares em contato com os extratos, a ACR não interferiu negativamente na viabilidade, atividade de ALP e deposição de nódulos. A expressão gênica de IL1B foi a única que não sofreu influência das soluções de tratamento da dentina. De maneira geral, a ACR 0,005% afetou a expressão de um menor número de genes. A RMT da matriz de dentina foi aumentada após a biomodificação com ACR 0,02% e GD 5%. Contudo, a biomodificação da dentina com ACR ou GD não interferiu na RU imediata, sem diferença significante entre os grupos. A presença de nanoinfiltração nas camadas híbridas produzidas sobre a dentina tratada com ACR foi comparável a observada na dentina tratada com água (controle). Conclusão: A aplicação da ACR sobre a dentina condicionada não exerceu efeito tóxico sobre células odontoblastóides e pulpares humanas, entretanto, apenas a maior concentração (0,02%) foi capaz de melhorar a resistência mecânica da matriz dentinária. Por fim, a biomodificação do colágeno pela ACR não exerceu influência na resistência de união imediata a dentina.
Desenvolvimento e caracterização de alumina tenacificada por zircônia dopada com óxido de magnésio para uso em próteses odontológicas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-03-06) Saggioro, Ana Clara Bortolucci; Pinelli, Lígia Antunes Pereira; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A zircônia (3Y-TZP), que é o material de eleição nesses casos, apresenta degradação em meio úmido que impacta nas propriedades. Novos materiais, como alumina tenacificada por zircônia (ZTA) pode ser uma boa alternativa por possuir a degradação em meio úmido mais lenta e boas propriedades mecânicas, como resistência à flexão (856 MPA e dureza (2,9 GPa). Sendo assim, o objetivo deste estudo foi sintetizar uma ZTA com coloração branca e avaliar a resistência à flexão biaxial (RF), o módulo de Weibull e a probabilidade de falha. Para tanto foram confeccionados discos (15 x 1,6 mm) de 3Y-TZP (controle, n=15), ZTACr (ZTA dopada com óxido de crômio, n=15, coloração rosa) e ZTAMg (ZTA dopada com óxido de magnésio, n=15, coloração branca). Os grupos foram produzidos por meio da mistura de pós de oxido de alumina, óxido de zircônia, óxido de magnésio, óxido de estrôncio, e óxido de crômio, esses passaram por moagem e secagem, foram prensados em discos e submetidos a tratamento térmico (1450 - 1500 oC). A RF foi realizada em máquina de ensaios universal EMIC DL2000 (5KN, 0,5 mm/min), seguido do cálculo do módulo de Weibull (m) e probabilidade de falha. A microestrutura da superfície foi obtida em microscópio eletrônico de varredura (n=3). Os dados de RF foram analisados por meio de Anova um fator. Os resultados de RF (em MPa) foram: 3Y-TZP = 646,28 ± 121,6; ZTACr = 545,76 ± 117,5; ZTAMg = 915,5 ± 257,7. Todas as cerâmicas passaram pelo teste de confiabilidade (m) e a melhor probabilidade de falha foi para o grupo ZTAMg (948 MPa). Concluiu-se que o método proposto foi capaz de sintetizar com sucesso um compósito branco à base de alumina-zircônia com dopagem com magnésio promissor para uma futura aplicação como prótese odontológica.
Efeito do peróxido de hidrogênio a 40% no potencial de clareamento, na susceptibilidade à pigmentação e na translucidez e brancura de materiais monolíticos CAD-CAM.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-03-06) Castillo Peña, Ranulfo; Garcia Fonseca, Renata; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Como as propriedades ópticas de materiais monolíticos CAD-CAM se comportam diante do clareamento necessita de investigação para orientar o cirurgião-dentista sobre se deve ou não protegê-los durante o procedimento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do peróxido de hidrogênio a 40% no potencial de clareamento, susceptibilidade à pigmentação, e nas variações de translucidez e brancura do Lava Ultimate (LU), Vita Enamic (VE), IPS e.max CAD (IPS) e Vita Suprinity (VS). Um espectrofotômetro CM- 2600d (Konica Minolta) foi utilizado para registrar as coordenadas de cor CIE L*, a* e b*. Para o potencial de clareamento, oitenta discos de cada material foram analisados inicialmente (R0) e após a imersão em água deionizada ou café por 36,5 dias seguido ou não pelo clareamento (R1). Para a susceptibilidade à pigmentação, oitenta discos de cada material foram analisados inicialmente (R0') e após terem sido clareadas ou não e imersos em água deionizada ou café (R1'). O potencial de clareamento e a susceptibilidade à pigmentação foram calculados como a diferença de cor (ΔE00), respectivamente, entre R1-R0 e R1'-R0'. Diferenças na translucidez (ΔTP00) e no índice de brancura (ΔWID) entre R1-R0 e R1'-R0' também foram calculadas. Os dados foram analisados por ANOVA a 3 fatores e pós teste de Games-Howell (α=0,05). A significância clínica foi avaliada com base nos limiares de 50%:50% perceptibilidade e 50%:50% aceitabilidade para ΔE00, ΔTP00 e ΔWID. O café aumentou a ∆E00 no LU, VE e VS e diminuiu suas translucidez e brancura, enquanto o IPS teve apenas sua brancura afetada. O clareamento realizado após imersão em café reduziu a ∆E00 no LU e VE, com recuperação parcial e total, respectivamente. Além disto, a translucidez e brancura do LU, VE e VS foram aumentadas pelo clareamento, com recuperação parcial para a translucidez e parcial (LU) ou total (VE e VS) para a brancura. Nenhum efeito foi observado no IPS. O clareamento antes da imersão em café reduziu a translucidez do LU, porém dentro do intervalo de aceitabilidade, enquanto o VE apresentou menor ∆E00, com recuperação total, e tornou-se mais translúcido e menos escuro, com recuperação parcial em ambas as situações. O VS e IPS não foram afetados. O clareamento beneficiou as propriedades ópticas do LU, VE e VS, sem aumentar sua susceptibilidade à pigmentação ou promover alterações clinicamente inaceitáveis na translucidez e brancura. Todas as alterações apresentadas pelo IPS estiveram abaixo do limiar de perceptibilidade.
Resistência à fratura de diferentes núcleos de preenchimento com compósitos bulk fill em dentes com extensa destruição coronária
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-02-27) Oliveira, Carlos Rangel de Moura; Reis, José Maurício dos Santos Nunes [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
This study aimed to evaluate the ultimate fracture strength and failure modes of different core techniques associated with intraradicular fiberpost in bovine mandibular lateral incisors with extensive coronary destruction. Forty teeth were prepared endodontically, randomly divided into 4 experimental groups (n=10) and a fiberpost (Whitepost DC0.5) was cemented with LuxaCore Z for all groups. The core was confeccioned, after obtaining a 1.0 mm cervical ferrule, with: FOBF-Filtek One Bulk Fill; FZ350- Filtek Z350 XT; FBFF-Filtek Bulk Fill Flow; and LCZ-LuxaCore Z. Total zirconia crowns (Y-TZP) produced by CAD/CAM were cemented with RelyX U200. After storage in distilled water at 37ºC for 48 h, the specimens were submitted to thermal cycling (10,000 cycles, 5- 55ºC, 30 s dwell time) and, afterwards, to the mechanical test of compressive strength fracture (1.0 mm / min) at 135º along the tooth axis in electromechanical machine (EMIC DL2000). The ultimate load supported by each specimen was recorded in Newton. The fracture mode was classified by means of stereomicroscopic loupe analysis (30X). The fracture strength data were analyzed by the non-parametric Kruskal-Wallis test, followed by the post-hoc Dunn test. The data of the fracture modes were analyzed by Fisher's exact test (α=0.05). No significant differences (p>0.05) were observed among the FOBF, FZ350 and FBFF groups (mean ranks= 20.30, 12.20 and 23.20, respectively). LCZ (mean rank= 26.30) produced similar results to those of FOBF and FBFF (p>0.05) and higher than those of FZ350 (p=0.042). The most frequent type of failure was irreparable, regardless of the experimental condition. The lowest percentages of reparable fractures were 10% for the FOBF group, followed by 20% of LCZ. The use of bulk fill materials, including the “core-and-post” LCZ composite, did not impair the ultimate fracture strength of endodontically treated teeth with extensive coronal destruction. The use LCZ made it possible to perform the procedures in fewer steps and less clinical time, without impairing the fracture resistance of endodontically treated lateral incisors.
Atividades antimicrobiana e antibiofilme de extratos e frações de Casearia sylvestris de distintos biomas brasileiros contra Streptococcus mutans e Candida albicans
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-07-05) Ribeiro, Sabrina Marcela; Klein, Marlise Inêz [UNESP]; Cavalheiro, Alberto José [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A cárie dentária é um problema de saúde pública mundial causada por uma interação entre dieta rica em açúcar e microrganismos em biofilmes dentais. Abordagens para controlar esses microrganismos em biofilmes são necessárias. Portanto, o objetivo foi avaliar potencial antimicrobiano (cultura planctônica) e antibiofilme de doze extratos de Casearia Sylvestris (0,50 mg/mL) de diferentes biomas brasileiros (Mata Atlântica, Cerrado, Caatinga, Pampa e Pantanal) e variedades (sylvestris, lingua e intermediária) contra duas espécies encontradas em biofilmes cariogênicos (Streptococcus mutans e Candida albicans). A caracterização química dos extratos brutos foi feita via cromatografia. A atividade antimicrobiana foi determinada pela população microbiana (UFC/mL) enquanto a atividade antibiofilme pela população microbiana (UFC/mL) e biomassa dos biofilmes tratados. Para os extratos ativos para S. mutans, foi avaliado o efeito na formação inicial da matriz de glucanos (atividade de GtfB), o desprendimento após a adesão desta bactéria à película salivar e à matriz inicial de glucanos e citotoxicicidade via ensaio MTT. Também foi avaliado o potencial antimicrobiano contra S. mutans de três frações (metanol, acetato de etila e hexano; 0,25 mg/mL) oriundas dos doze extratos. Três extratos do bioma Mata Atlântica e variedade sylvestris reduziram em >50% (ou >3 logs) as contagens de células viáveis de S. mutans (vs. veículo; p <0,0001), enquanto dois extratos, pertencentes ao mesmo bioma e variedade, também diminuíram em ≅50% as contagens de células viáveis de C. albicans (vs. veículo; p <0,0001). Para os biofilmes de S. mutans, três extratos reduziram em >90% a biomassa (vs. veículo; p >0,0001), destes, dois reduziram em 100% da população microbiana e um em ≅50% (vs. veículo; p <0,0001). No entanto, para o biofilme fúngico, dois extratos promoveram uma redução de >50% das contagens de células viáveis (vs. veículo; p <0,0001) e nenhum reduziu a biomassa. Os extratos com potencial atividade antimicrobiana e antibiofilme apresentaram maior teor de diterpenos do tipo clerodano e menor teor de flavonoides glicosilados em relação aos extratos menos ativos. Entre os quatro extratos promissores, três reduziram a quantidade de glucanos formados por GtfB (vs. veículo; p <0,0136) e nenhum promoveu redução significativa da remoção de células aderidas à película (vs. veículo; p >0,05). Entretanto, um maior número de células de S. mutans foi removido após adesão à matriz de glucanos quando tratados por esses extratos (vs. veículo; p <0,0031). Os extratos foram citotóxicos contra células de linhagem NOK-si após exposição de 1 h (vs. controle de viabilidade); porém, não houve diferença quando os extratos foram comparados com o controle veículo (p >0,999). Das três frações avaliadas para cada extrato, apenas as frações acetato de etila reduziram a população microbiana de S. mutans (vs. veículo; p <0,0001), exceto uma (p >0,05). Destas, três causaram a redução da população microbiana em >80%, as três frações pertencem à var. lingua, duas contemplam o bioma Cerrado e uma, o bioma Ecotone (Cerrado/Caatinga). Portanto, extratos de C. sylvestris da Mata Atlântica e var. sylvestris e frações acetato de etila do bioma Cerrado e Ecotone, var. lingua poderiam ser utilizados como uma estratégia terapêutica contra microrganismos envolvidos na patogênese da cárie.
Inativação fotodinâmica utilizando-se curcumina conjugada a Pluronic® F-127 sobre biofilme de Streptococcus mutans
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-03-04) Santos, Diego Dantas Lopes dos; Rastelli, Alessandra Nara de Souza [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A inativação fotodinâmica é descrita como terapêutica promissora na inativação de micro-organismos bucais. A curcumina é um fotossensibilizador com característica hidrofóbica, e que pode comprometer a sua eficiência. Dessa forma, torna-se relevante o desenvolvimento de estudos que verifiquem o seu efeito quando conjugada a micelas poliméricas. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da inativação fotodinâmica em biofilme de Streptococcus mutans utilizando-se curcumina, conjugada ou não, a micelas como fotossensibilizador, irradiado por luz LED. Realizou-se a caracterização das micelas poliméricas nas concentrações de 0.1 e 0.5% de curcumina, por meio do Potencial Zeta, determinação do espalhamento de luz dinâmico, microscopia eletrônica de transmissão e a investigação dos mecanismos envolvidos na reação fotodinâmica. Após, foi selecionada a melhor concentração a ser utilizada na inativação fotodinâmica sobre biofilme de Streptococcus mutans. As concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) foram determinadas. Foram induzidos em placa de 96 poços biofilmes single espécie. Os biofilmes foram irradiados uniformemente com sistema de iluminação a LED (Biotable, MMO) em comprimento de onda de 460 nm com dose/densidade de energia de 15 J/cm2 . Unidades formadoras de colônia (UFC/mL), a partir da CIM e CBM foram obtidas. Por meio de microscopia confocal utilizando-se corante BacLight® LIVE/DEAD foi avaliado a viabilidade celular nos biofilmes. Diferentes Grupos foram analisados: FSM+L+ (Fotossensibilizador conjugado a micelas de Pluronic + Luz), FSD+L+ (Fotossensibilizador em DMSO 10% + Luz), M+L+ (Micelas de Pluronic + Luz), D+L+ (DMSO 10% + Luz), FS-L+ (Água Milli-Q + Luz), FSM+L- (Fotossensibilizador conjugado a micelas de Pluronic - Luz), FSD+L- (Fotossensibilizador em DMSO 10% - Luz), M+L- (Micelas de Pluronic - Luz), FS-L- (Água Milli-Q – Luz: Grupo controle negativo) e C+L- (Clorexidina a 0.2%: Grupo controle positivo). Após avaliação dos pressupostos de normalidade e homocedasticidade, os dados foram submetidos à Análise de Variância (ANOVA) e ANOVA com correção de Welch, para comparação múltipla foi utilizado Pós-hoc de Games-Howell e Pós-hoc de Tukey. Ambos os testes foram realizados ao nível de significância de 5%. Para os grupos tratados com luz e valor de α < 0,05, os resultados mostraram que os grupos FSM+L+ (3,41log10) e FSD+L+ (1,92log10) foram semelhantes (p=0,122) e diferentes de M+L+, D+L+ e FS-L+ (p0,027). A viabilidade de Streptococcus mutans na presença de curcumina conjugada a micelas foi substancialmente reduzida por irradiação com LED. Assim, torna-se factível a utilização de micelas de Pluronic® F-127 como alternativa viável para veiculação da curcumina a ser utilizada na inativação fotodinâmica, sem a necessidade de incorporação prévia da curcumina a solventes como etanol e DMSO.
Expressão de genes relacionados a virulência e envolvidos na síntese de ergosterol de Candida albicans resistente a fluconazol submetidos à terapia fotodinâmica associada ao antifúngico
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-05-22) Jordão, Cláudia Carolina; Pavarina, Ana Claudia [UNESP]; Klein, Marlise Inêz [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O estudo tem como objetivo avaliar a susceptibilidade ao fluconazol e a expressão de genes de virulência e envolvidos na síntese de ergosterol de cepa de Candida albicans resistente a fluconazol (ATCC 96901) presentes nas línguas de camundongos submetidos à aPDT associada a Nistatina. Para isso, colônias recuperadas de animais submetidos ao tratamento com aPDT e Nistatina (NIS) bem como a associação (NIS+aPDT e aPDT+NIS), foram armazenadas em glicerol 50% e utilizadas para o Teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM). Além disso, as línguas dos animais submetidos aos tratamentos foram armazenadas em RNAlater (RNAlater Tissue Collection: RNA Stabilization Solution Protocol Ambion®) em freezer -80°C para avaliação da expressão gênica. Para realização do teste CIM, as cepas foram reativadas em placas de Ágar Sabouraud Dextrose (SDA), cultivadas em estufa 35°C por 48 h e avaliadas seguindo o método de microdiluição em caldo (CLSI) com algumas modificações. Foram realizadas diluições seriadas de fluconazol (variando de 2 a 1024 μg/ml) em meio RPMI 1640 (2 x concentrado), em suspensões (0,5x103 a 2,5x103 UFC/mL). As placas foram incubadas a 35°C e observadas quanto à presença ou ausência de crescimento após 24 h, além disso, foi realizado plaqueamento (CFM). Foram consideradas as menores concentrações de fluconazol que resultaram em inibição de pelo menos 50% do crescimento. A quantificação da expressão gênica foi realizada por meio da técnica quantitativa de Transcrição Reversa da reação em cadeia de polimerase (RT-qPCR) utilizando primers específicos para os genes de virulência (ALS1; HWP1; EFG1; CAP1; CAT1; SOD1; SAP1; PLB1 e LIP3) e genes envolvidos na síntese do ergosterol (ERG1; ERG11; ERG3 e ERG25). Novos primers para os genes ERGs foram desenhados (Oligo Software™) a partir de seqüências obtidas do "Pubmed". Os primers foram sintetizados e testados in vitro pela técnica de PCR utilizando um painel de DNA genômico de diferentes espécies de Candida, com seus produtos visualizados em gel de agarose. Reações de qPCR foram realizadas para determinar a concentração ótima e a eficiência dos primers. Para análise da expressão gênica, as línguas foram submetidas à extração e purificação de RNA. O cDNA foi sintetizado e a técnica de RT-qPCR realizada. Os dados de CFM e expressão foram analisados por Análise de Variância (α = 0,05). Os resultados do CFM pós CIM foram avaliados por ANOVA seguida do pós-teste de Tukey (α=0,05). Foi verificado que, independente do tratamento aplicado e do momento da coleta (24h ou 7 dias após tratamento), as cepas recuperadas foram semelhantes ao grupo P-L-(animais sem tratamento). Demonstrando que não houve modificação do perfil de resistência da cepa ao fluconazol nas concentrações testadas. Em relação a expressão gênica, os primers delineados não foram específicos somente para C. albicans. No presente estudo, foi observado que os genes ERG1, ERG3, ERG11 e ERG25 apresentaram comportamento semelhante, com redução da expressão gênica nos grupos onde foram realizados os tratamentos em comparação com o grupo controle (P-L-). Os resultados demonstraram que os tratamentos reduziram a expressão dos genes ALS1, EFG1, CAP1, LIP3, SAP1 e SOD1 em todos os grupos experimentais avaliados em relação ao controle (P-L-). Quando utilizada a terapia combinada (aPDT+NIS, NIS+aPDT), houve redução mais acentuada na expressão dos genes ALS1, LIP3, SAP1 e SOD1. A expressão do gene EFG1, foi estatisticamente semelhante em todos os grupos de tratamento e menor que no grupo controle (P-L-). Para os genes CAT1 e SOD1, não foi observada diferença estatística entre os grupos aPDT e aPDT+NIS. Para os genes CAP1, EFG1, HWP1 e LIP3, os grupos P-L+ e aPDT não apresentaram diferença estatística entre si. Para os genes CAP1, EFG1 e HWP1 não houve diferença estatística entre os grupos de tratamento NIS e os que foram avaliados a associação das terapias (NIS+aPDT e aPDT+NIS). Não houve expressão detectada para o gene PLB1. A associação de terapias não alterou a susceptibilidade fúngica ao fluconazol e reduziu a expressão dos genes ERG1, ERG3, ERG11, ERG25, ALS1, EFG1, SAP1, LIP3, CAP1 e SOD1.

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