Dissertações - Biopatologia Bucal - ICT

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Marcadores imuno-histoquímicos de prognóstico para carcinoma de células escamosas em pacientes adultos jovens: revisão sistemática
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-01) Rauen, Charles Alex; Tango, Estela Kaminagakura [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Antecedentes: o carcinoma de células escamosas de boca (CCEB) é a neoplasia maligna mais frequente na região de cabeça e pescoço. Ao longo dos últimos anos, observou-se um aumento da incidência dessa neoplasia em pacientes jovens (≤40 anos), com controvérsias a respeito do prognóstico em relação aos pacientes com mais de 40 anos. Tradicionalmente, para se estabelecer o prognóstico dessas lesões, são correlacionados dados clínicos e histopatológicos, além do crescente uso de biomarcadores da carcinogênese pelo método da imuno-histoquímica (IHQ) que possuem relação com características biológicas das neoplasias e podem predizer o seu prognóstico. Objetivo: avaliar, por meio de uma revisão sistemática da literatura, marcadores de IHQ para determinar o prognóstico em adultos jovens portadores de CCEB em boca. Fontes de dados: Pubmed, Web of Science, Scopus, Embase, Lilacs e Proquest. Métodos de avaliação: a busca por Estudos retrospectivos, longitudinais, de coorte e casos controle totalizou 11.798 artigos. Após a remoção de duplicatas, seleção por títulos e resumos, contatos com autores e seleção por meio das referências, houve, como resultado, quatro artigos que foram selecionados, buscando-se apenas os que apresentavam estratificação por idade dividida em dois grupos, com jovens ≤40 anos e grupo controle >40 anos, selecionando-se apenas CCEB em boca, restrito às línguas inglesa, portuguesa e espanhola. Resultados: Foram encontrados resultados positivos para a utilização das proteínas RECK, Ciclina D1, EGFR, ALDH1A1 e CYP1B para se determinar prognóstico do CCEB em pacientes jovens. Entretanto não foi possível considerar nenhum desses marcadores de IHQ como um fator prognóstico independente. A maior limitação desse estudo foi encontrar trabalhos com padronização de idade, divisão por grupos e registro dos desfechos, correlacionando com a expressão dessas proteínas em IHQ, sendo necessários mais estudos primários que busquem atender essa demanda, para que seja possível descobrir a real aplicabilidade desses biomarcadores e se eles podem servir como referência para se estabelecerem planos de tratamento mais precisos. Conclusão: não foi possível encontrar biomarcadores de IHQ que possam predizer com segurança o prognóstico do CCEB em pacientes jovens. Porém, verificou-se que a hipoexpressão de RECK e a hiperxpressão de Ciclina D1, ALDH1A1 e Cerb-2 estão correlacionadas com as menores taxas de SLD em pacientes jovens, sendo promissora e necessária a iniciativa de se aprofundarem os estudos de base porAntecedentes: o carcinoma de células escamosas de boca (CCEB) é a neoplasia maligna mais frequente na região de cabeça e pescoço. Ao longo dos últimos anos, observou-se um aumento da incidência dessa neoplasia em pacientes jovens (≤40 anos), com controvérsias a respeito do prognóstico em relação aos pacientes com mais de 40 anos. Tradicionalmente, para se estabelecer o prognóstico dessas lesões, são correlacionados dados clínicos e histopatológicos, além do crescente uso de biomarcadores da carcinogênese pelo método da imuno-histoquímica (IHQ) que possuem relação com características biológicas das neoplasias e podem predizer o seu prognóstico. Objetivo: avaliar, por meio de uma revisão sistemática da literatura, marcadores de IHQ para determinar o prognóstico em adultos jovens portadores de CCEB em boca. Fontes de dados: Pubmed, Web of Science, Scopus, Embase, Lilacs e Proquest. Métodos de avaliação: a busca por Estudos retrospectivos, longitudinais, de coorte e casos controle totalizou 11.798 artigos. Após a remoção de duplicatas, seleção por títulos e resumos, contatos com autores e seleção por meio das referências, houve, como resultado, quatro artigos que foram selecionados, buscando-se apenas os que apresentavam estratificação por idade dividida em dois grupos, com jovens ≤40 anos e grupo controle >40 anos, selecionando-se apenas CCEB em boca, restrito às línguas inglesa, portuguesa e espanhola. Resultados: Foram encontrados resultados positivos para a utilização das proteínas RECK, Ciclina D1, EGFR, ALDH1A1 e CYP1B para se determinar prognóstico do CCEB em pacientes jovens. Entretanto não foi possível considerar nenhum desses marcadores de IHQ como um fator prognóstico independente. A maior limitação desse estudo foi encontrar trabalhos com padronização de idade, divisão por grupos e registro dos desfechos, correlacionando com a expressão dessas proteínas em IHQ, sendo necessários mais estudos primários que busquem atender essa demanda, para que seja possível descobrir a real aplicabilidade desses biomarcadores e se eles podem servir como referência para se estabelecerem planos de tratamento mais precisos. Conclusão: não foi possível encontrar biomarcadores de IHQ que possam predizer com segurança o prognóstico do CCEB em pacientes jovens. Porém, verificou-se que a hipoexpressão de RECK e a hiperxpressão de Ciclina D1, ALDH1A1 e Cerb-2 estão correlacionadas com as menores taxas de SLD em pacientes jovens, sendo promissora e necessária a iniciativa de se aprofundarem os estudos de base por meio de medotologias padronizadas para validar se a IHQ pode ser uma ferramenta útil para se estabelecer o prognóstico do CCEB em pacientes adultos jovens.
Blendas de polimetilmetacrilato (PMMA) contendo zircônia e aluminato de cálcio para aplicações biomédicas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-29) Ramos, Nathalia de Souza; Vasconcellos, Luana Marotta Reis de [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A engenharia de tecidos e de regeneração tecidual óssea tornou-se uma área muito importante para o desenvolvimento de materiais alternativos funcionais para restaurar, manter ou melhorar a função de um tecido danificado. Atualmente, com o grande avanço tecnológico na área da ciência, o desenvolvimento e aprimoramento de biomateriais tornou-se necessário para a evolução de melhores biomateriais que irão contribuir na melhora da qualidade de vida da população. Dessa forma, o objetivo neste estudo foi avaliar a influência dos aditivos de aluminato de cálcio e de zircônia no cimento ósseo de polimetilmetacrilato (PMMA) na osteogênese in vitro com células obtidas de fêmures de ratos. Após a produção das amostras, foi realizada a caracterização utilizando microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia de dispersão de energia e infravermelho por transformação de EDS (FT-IR). Posteriormente à caracterização, as amostras foram submetidas aos testes biológicos in vitro utilizando células mesenquimais obtidas de fêmures de ratos. As células foram isoladas e plaqueadas com as amostras visando avaliar a influência dos biomateriais na atividade e diferenciação celular de osteoblastos. Após períodos pré-determinados, foram realizados os testes de citotoxicidade, atividade de fosfatase alcalina, produção de proteína total, formação dos nódulos de mineralização, genotoxicidade e proliferação celular. A caracterização por MEV- FE mostrou que as amostras apresentaram características morfológicas topográficas modificadas, Na superfície do PMMA observam-se partículas maiores quando comparado com as blendas. O EDS demonstrou que as amostras evidenciam a presença de elementos químicos que compõem o biomaterial, em quantidades diferentes. A espectroscopia de infravermelho por transformação de Fourier (FT-IR) evidenciou a composição das amostras com ligações químicas semelhantes, sem evidência dos elementos aditivos. Os resultados dos testes celulares mostraram que as amostras não foram citotóxicas e permitiram a atividade, adesão e diferenciação celular, porém não houve diferença estatística entre os grupos experimentais e o controle nos testes de citotoxidade, proteína total e fosfatase alcalina (p>0,05). Nas imagens de MEV das amostras do grupo PMMA sugere-se menos células, enquanto as amostras dos grupos PMMA+CAC e PMMA+Z sugeriram mais células na superfície das amostras. Na contagem de micronúcleos do teste de genotoxicidade, o grupo de amostras de PMMA+CAC mostrou menor quantidade de micronúcleos comparado a todos os grupos, e as amostras de PMMA+Z mostraram mais micronúcleos formados. Concluiu-se que as amostras produzidas com os aditivos (aluminato de cálcio e zircônia), são promissoras devido a ausência de toxicidade e por permitirem a diferenciação celular.
Fibra de carbono em defeitos ósseos de tamanho crítico: estudo in vivo em ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-07-29) Pereira, Kauê Alberto; De Marco, Andrea Carvalho [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Materiais a base de carbono têm sido utilizado em várias áreas como química, engenharia, ciência dos materiais, ciências biomédicas, entre outras. Além disso, por serem quimicamente estáveis, mecanicamente fortes, acessíveis economicamente, e biologicamente compatíveis, chamaram a atenção como material de arcabouço para a engenharia tecidual óssea. Assim, o presente estudo teve como objetivo principal avaliar a fibra de carbono obtida a partir de fibra PAN têxtil, nas suas diferentes formas, com vistas à obtenção de scaffolds como potencial enxerto ósseo sintético. Foram utilizados 34 ratos adultos (Rattus norvegicus, variação albinus, Wistar), e realizados dois defeitos ósseos críticos na calvária de cada animal com 5 mm de diâmetro. Vinte e quatro animais foram divididos aleatoriamente em 4 grupos: Defeito ósseo + coágulo sanguíneo, Defeito ósseo + Feltro Fibra de Carbono Não Ativado (FFCNA), Defeito ósseo + Feltro Fibra de Carbono Ativado (FFCA), Defeito ósseo + Feltro Fibra de Carbono Ativado com Prata (FFCAAg), e foram observados por períodos distintos de 15 e 60 dias para análise histomorfométrica e micro CT. Dez animais foram divididos aleatoriamente nos mesmos 4 grupos para aplicação de marcadores fluorocromáticos e análise de aposição mineral (em andamento). Após o período de observação dos subgrupos, os animais foram eutanasiados por sobredose de anestesia geral. Em seguida, as calvárias foram removidas para as análises. Na avaliação dos dois períodos (15 e 60 dias), o FFCNA mostrou-se melhor para os parâmetros de Área de Neoformação óssea, Área de Neoformação Lamelar e Área de Neoformação Intramembranosa. Em 60 dias, o grupo FFCNA apresentou maior volume ósseo, volume tecidual e maior número de trabéculas, mostrando-se um material sintético promissor como scaffold para regeneração óssea.
Confecção, caracterização e avaliação do efeito de membranas à base de fibroína de seda carregadas ou não com neurotensina em feridas abertas em palato: estudo in vitro e clínico randomizado
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-03) Bonafé, Ana Carolina Ferreira; Santamaria, Ingrid Fernandes Mathias; Santamaria, Mauro Pedrine [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A utilização de enxertos autógenos provenientes do palato para reconstrução de tecidos gengivais, apesar de serem considerados o padrão-ouro, causam grande morbidade e dor pós-operatória. Assim, com o intuito de reduzir essas complicações, alguns biomateriais podem ser explorados, acelerando a cicatrização e trazendo maior conforto ao paciente. Dessa forma, os objetivos do presente estudo foram: confeccionar e caracterizar membranas à base de fibroína de seda sem carregamento (F) ou carregadas com neurotensina (FN) e avaliar clinicamente seus efeitos no reparo de feridas abertas no palato. Para a primeira parte, as membranas foram confeccionadas e caracterizadas quanto à espessura, propriedades mecânicas, textura superficial, permeabilidade ao vapor de água, degradação enzimática, citotoxicidade, genotoxicidade e intumescimento. Para a segunda parte, sessenta e um pacientes com necessidade de exodontia e preservação alveolar foram randomizados em três grupos: Controle: exodontia e selamento do alvéolo com EGL removido do palato; Grupo F: exodontia com EGL e inserção da membrana F na ferida palatina; Grupo FN: exodontia com EGL e membrana FN na ferida palatina. A reparação da área doadora palatina foi avaliada por parâmetros clínicos centrados nos pacientes. A partir dos resultados de caracterização, pode-se constatar a homogeneidade das membranas, alta resistência mecânica e maior intumecimento, permeabilidade e rugosidade superficial, características favoráveis para feridas intraorais. Em adição, não apresentaram citotoxicidade (HFF-1, HaCaT e fibroblastos gengivais humanos) e genotoxicidade (HaCaT) in vitro. Em relação aos resultados clínicos, em 14 dias FN mostrou maior diminuição de ARF (p<0,001) e melhor ET (p = 0,022) do que F e GC; ao analisar-se o ICPF, ambos os biomateriais F e FN apresentaram melhores resultados em 14 dias comparados ao GC (p= 0,009 e p = 0,001 respectivamente); não houve diferença entre os grupos em relação ao ED (p= 0,312) e ET (p = 0,120). OHIP em F e FN se mostrou superior a GC a partir do 5º dia, NA e DPO mantiveram-se mais baixas em F e FN. Conclui-se que o uso de membranas à base de fibroína de seda carregadas ou não com NT apresenta benefícios clínicos no reparo de feridas e na qualidade de vida dos pacientes.
Efeito do campo eletromagnético pulsado na reparação de defeito ósseo crítico na calota de ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-02) Moura, Nicole Berton de; Jardini, Maria Aparecida Neves [Unesp]; Ferreira, Camila Lopes; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O reparo de defeitos ósseos críticos representa um grande desafio clínico, dentre as terapias adjuvantes que apresentam um potencial benefício na aceleração do reparo ósseo destaca-se o CEMP, o qual por meio da sua estimulação biofísica é capaz de modular parâmetros fisiológicos de diferenciação, proliferação e mineralização das células ósseas. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito de dois protocolos de terapia com CEMP na neoformação óssea em defeitos críticos nas calotas de ratos. Noventa e seis ratos machos adultos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos experimentais GC: (n= 32), GT1h: (n= 32) e GT3h: (n= 32). Os animais foram submetidos à cirurgia para a confecção de defeito crítico na calota craniana e à terapia com CEMP seguindo os seguintes parâmetros fixos: 25 ciclos de -1 mTesla a + 1 mTesla em 200 microssegundos que se repetiram à taxa de 15 Hz. O tempo de duração da exposição ao CEMP nos grupos testes foram de 1 hora (GT1h) e de 3 horas (GT3h), ambos durante 5 dias por semana. Os animais foram submetidos à eutanásia nos períodos 14, 21, 45 e 60 dias. Os espécimes foram processados para análise histológica, histomorfométrica e para análises de textura e volume, obtidas por meio de TCFC. As análises histomorfométrica e de volume revelaram que não houve diferença estaticamente significante no reparo dos defeitos ósseos entre os grupos que receberam a terapia com CEMP e o GC. A análise de textura revelou que houve diferença estatisticamente significante entre os grupos somente para o parâmetro entropia, no qual o grupo GT1h apresentou um maior valor comparado ao GC, ambos no período de 21 dias. Conclusão: não foi possível neste estudo mostrar um potencial benefício da utilização do CEMP na cicatrização óssea do DOC na calota de ratos. Dessa forma, esta região deve ser melhor explorada em estudos futuros, assim como a busca pelos parâmetros ideais relacionados ao gerador do CEMP de forma a maximizar os efeitos no reparo ósseo.
Comparação de enxerto de tecido conjuntivo e membrana de fibrina rica em plaquetas (prf) no aumento de espessura de tecido mole peri-implantar: reanálise de dados de ensaios clínicos randomizados
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-07-08) Souza, Renan de; Santamaria, Mauro Pedrine [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O implante dentário é uma importante ferramenta para se obter resultados estéticos e funcionais em pacientes com ausências dentárias, porém é observado que a falta de tecido mole peri-implantar é frequente e pode levar a diversos problemas, como maior reabsorção de crista óssea e maior risco de recessão peri-implantar. Estudos anteriores demonstraram a eficácia de técnica como enxerto de tecido conjuntivo (CTG) que é considerado padrão ouro no aumento de tecido mole peri-implantar em região anterior de maxila. No entanto, a utilização de enxerto de tecido conjuntivo apresenta algumas limitações descrita na literatura, como maior desconforto pós-operatório e quantidade limitada de enxerto. Portanto, outras formas de enxerto de tecido mole para aumento de espessura do tecido periimplantar devem ser investigadas. Bons resultados foram obtidos quando utilizamos fibrina rica em plaquetas (PRF) para o tratamento de diversas condições periodontais e periimplantares. Sendo assim, o objetivo desse estudo é comparar a utilização de PRF com o CTG para aumento da espessura de tecido mole peri-implantar quando colocados simultaneamente a implantes unitários em área estética de maxila. Trinta pacientes advindos de dois estudos clínicos randomizados prévios do presente grupo de pesquisa foram reanalisados. Parâmetros clínicos foram mensurados por um avaliador cego e calibrado em baseline e 4 meses. As seguintes medidas foram avaliadas: espessura do tecido mole periimplantar em vestibular (ETQv) e na oclusal (ETQo) do implante instalado, defeito do rebordo (DR) e altura do tecido queratinizado (ATQ). Além disso, medidas transoperatórias foram reanalisadas. Frente aos resultados observados, o uso do CTG favoreceu melhores resultados em ETQv (3,09mm) e DR (0,27mm) após 4 meses, quando comparado ao PRF, ETQv (2,55mm) e DR (1,26mm). Em adição, avaliações frente à parâmetros centrados no paciente evidenciaram similaridade no desconforto pós-operatório e número de analgésicos utilizados. Conclui-se que os dois grupos apresentaram aumento de espessura do tecido periimplantar, porém o CTG demonstrou maior ganho relativo, até o período de acompanhamento preconizado.
Fibra de carbono: caracterização e avaliação da resposta inflamatória e toxicidade em ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-01) Maciel, Clarissa Carvalho Martins; De Marco, Andrea Carvalho [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este estudo teve como objetivo avaliar a Fibra de Carbono obtida a partir da fibra PAN têxtil e de fibra de algodão, nas suas diferentes formas de apresentação: Feltro Fibra de Carbono Não Ativado (FFCNA), Feltro Fibra de Carbono Ativado (FFCA), Feltro de Fibra de Carbono Ativado com Prata (FFCAAg) e Tecido Fibra de Carbono Ativado (TFCA), com vistas à obtenção de scaffolds como potencial material com propriedades relativas à enxerto ósseo sintético. Foram realizados testes de caracterização: molhabilidade de superfície, ensaio de tração, ensaio de intumescimento e testes in vivo: avaliação da resposta inflamatória pela implantação dos materiais no tecido subcutâneo de quatorze ratos Wistar, avaliação das fibras colágenas pela coloração Picrosirius Red e avaliação da toxicidade nos seguintes órgãos: coração, baço, fígado e rim. No teste de molhabilidade, FFCNA e TFCA se mostraram hidrofóbicos (ɵ124º e 114º), FFCA e FFCAAg hidrofílicos. Para tensão máxima FFCA se apresentou mais resistente (2.983 ± 1.059). No ensaio de intumescimento os grupos FFCAAg e FFCA se mostraram com maior porcentagem de absorção para a solução PBS e água destilada. Os animais não apresentaram sinais clínicos de intoxicação. Os órgãos não apresentaram sinais de toxicidade sistêmica aguda. As regiões dos implantes apresentaram infiltrado inflamatório de leve a moderado em 7 e 21 dias. Apenas o grupo TFCA não apresentou maturação de fibras colágenas tipo I em 21 dias. Por meio das análises relizadas constatou-se que o TFCA se apresentou hidrofóbico, pouco resistente a tração e baixo potencial para maturação de fibras colágenas. Portanto o TFCA mostra-se com pouco potencial para ser indicado como possível scaffold para engenharia tecidual óssea. Conclui-se que FFCNA, FFCA e FFCAAg, possuem potencial para serem consideradas scaffolds, devido as seguintes características que foram apresentadas: boa taxa de absorção, hidrofilicidade e atóxicas.
Caracterização genotípica de amostras clínicas de Cryptococcus spp. e avaliação do perfil de virulência in vitro e em modelo de Galleria mellonella
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-02) Carmo, Fabíolla Nascimento do; Scorzoni, Liliana; Barros, Patrícia Pimentel de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A criptococose é uma infecção oportunista comum em pacientes HIV positivos, mas também pode afetar pacientes com outras comorbidades imunológicas ou imunocompetentes. Neste trabalho, cepas clínicas de Cryptococcus spp. provenientes de hospitais de São José dos Campos (SP) foram identificadas pela amplificação do gene SRT. A seguir, foi avaliada a sensibilidades das cepas a fluconazol e anfotericina B (AMB) pela técnica de microdiluição conforme EUCAST. Também foi analisada a capacidade de formação de biofilme por cristal violeta (formação da biomassa) e XTT (viabilidade celular). Foram analisadas in vivo a formação da cápsula durante a infecção, a curva de sobrevivência e do índice de saúde em modelo invertebrado de Galleria mellonella. Seis cepas foram identificadas como C. neoformans var. grubbii e uma como C. gattii. Todas as cepas clínicas foram sensíveis a AMB e a concentração inibitória mínima para fluconazol variou entre 2 e 32 μg/mL. Todos os isolados de Cryptococcus spp. foram capazes de produzir biofilme. A sobrevida de G. mellonella infectada variou entre 6 e 7 dias para C. neoformans, e a cepa clínica 6 se mostrou menos virulenta, com 24% das larvas vivas no último dia de experimento. Para cepa de C. gattii, 20,8% das larvas infectadas permaneceram vivas ao final da análise. Em relação a análise do tamanho da cápsula após inoculação in vivo, as cepas clínicas de ambas espécies apresentaram aumento no tamanho, sendo observado o maior percentual de cápsulas ≥ 30μm na cepa 6. O índice de saúde foi capaz de agregar informações ao resultado da curva de sobrevivência de G. mellonella, uma vez que ele mostrou diferenças de saúde das larvas entre os grupos que apresentaram mesmo perfil de sobrevida. A associação do índice de saúde à curva de sobrevivência amplia a visão da vitalidade das larvas durante os dias de experimento e, ainda, auxilia na comparação de resultados entre laboratórios. O conhecimento das características genotípicas e fenotípicas de Cryptococcus spp. em uma determinada região pode ser ferramenta importante para implementação de políticas públicas de saúde eficazes.
Existe relação entre a cultura de saliva e hemocultura para klebsiella spp. Em pacientes críticos?
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-09) Santos, Leonardo Moura Brasil da Rocha [Unesp]; Oliveira, Luciane Dias de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O impacto global do surgimento de bactérias multirresistentes leva a necessidade de maiores pesquisas para seu controle, vigilância, identificação, descolonização e novos tratamentos, com destaque para Klebsiella spp., devido sua importância clínica, virulência e alta prevalência. Pacientes de Unidades de Terapia Intensiva são mais vulneráveis a essa ameaça, necessitando medidas rígidas de controle, identificação precoce, profilaxias e tratamento. Dentro desse contexto uma estratégia é a utilização de culturas de sangue, urina, secreção traqueal, swab anal, axilar e nasal, para identificação do agente bacteriano, mas não é validado cultura de saliva, que por sua vez é meio de cultura para diversos tipos de bactérias, além da microbiota oral participa de diversos tipos fisiopatológicos como pneumonia de aspiração e endocardite mostrando sua disseminação pela corrente sanguínea, essas características conferem relevância clínica. A proposta desse trabalho é validar a cultura de saliva em ambiente de unidade de terapia intensiva determinando seu valor diagnóstico para infecção, sendo a metodologia usada análise estatística com busca de correlações dos resultados de hemoculturas e culturas de saliva proveniente do banco de dados do Serviço de Controle de Infecções Relacionadas à Assistência à Saúde de um hospital particular de São José dos Campos. Foram avaliados os resultados de cultura de vigilância do período de 16/01/2018 a 04/06/2021 totalizando 323 culturas pareadas entre saliva, secreção traqueal, sangue e urina provenientes de pacientes que estavam em mais de 5 dias de internação hospitalar e se encontravam na unidade de terapia intensiva. Foi analisado através de método estatístico a relação entre a presença de Klebsiella ssp. na cultura de saliva e hemocultura além correlacionando com dados de identificação, gravidade e desfecho. Sendo observado que a cultura de saliva infere os resultados de hemoculturas em relação Klebsiella spp em 0.25313 () (p 0,001) demonstrando que existe relação entre esses dois sítios de culturas.
Relação entre disfunção temporomandibular, hipotonia dos músculos mastigatórios e distúrbios do sono em pacientes com síndrome de down
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-10) Pereira, Bruna Dicieri [Unesp]; Rode, Sigmar de Mello [Unesp]; Gomes, Mônica Fernandes [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Investigar a presença de dor orofacial em pacientes com síndrome de Down (SD) e verificar sua influência na disfunção mastigatória (hipotonia muscular/frouxidão ligamentar) e nos distúrbios do sono nesses indivíduos. Vinte e três voluntários, jovens e adultos, de ambos os sexos, foram submetidos ao eixo I dos Critérios de Diagnóstico para Desordens Temporomandibulares (DC/TMD) para identificar a dor ou ausência de dor orofacial nos músculos masseter e temporal e na ATM (articulação temporomandibular). Na avaliação da função biomecânica, a hipotonia dos músculos mastigatórios (HPm) foi identificada a partir de eletromiografia de superfície (EMGs) dos músculos temporal (porção anterior) e masseter (porção superficial) em situação de contração voluntária máxima (CVM) e de força de mordida máxima (FMM), usando um transdutor de força e a frouxidão ligamentar identificada por meio da máxima abertura bucal (ABM) com auxílio de um paquímetro analógico. Os distúrbios do sono foram avaliados por exame de polissonografia tipo II (PSGII): apneia obstrutiva do sono (AOS), índice de ronco (IR) e índice de bruxismo do sono (IBS). Foram aplicados pré-testes estatísticos de Shapiro-Wilke de Bartlett, e para análise comparativa, os testes de Mann-Whitney e o teste T não-pareado para detectar diferenças entre os grupos comparados. Não houve diferenças significativas entre a dor muscular e na ATM entre os sexos; entretanto, a dor no músculo masseter esquerdo foi mais frequente em homens (69% dos pacientes) do que em mulheres (40% dos pacientes). As atividades elétricas dos músculos temporais direitos (p-valor 0,004) e esquerdos (p-valor 0,002) e no músculo masseter esquerdo (p-valor 0,008) foram estatisticamente menores nos homens que nas mulheres. Mulheres e homens apresentaram respectivamente: AOS grave (20% e 38,5%), IBS grave (40% e 54%), em variação de eventos/h, IBS (0 a 264 e 0 a 155) e o IR (4 a 45 e 6 a 53). A frouxidão ligamentar foi ligeiramente elevada em homens. Concluímos que a dor muscular mastigatória e artralgia foram encontradas. Provavelmente a dor influenciou no aumento da HPm pelo desuso dos músculos com dor, principalmente em ME dos homens. Não houve correlações entre a dor e os distúrbios do sono.
Avaliação do reparo ósseo de defeitos críticos tratados com matriz óssea mineralizada de osso bovino (Bio-Oss®) e fibrina rica em plaquetas: estudo histomorfométrico e imunológico em ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-06) Suárez, Eduardo Antonio Chelin; Marco, Andréa Carvalho de [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo deste estudo foi avaliar o reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico em ratos tratados com matriz óssea bovina (Bio-Oss®) e fibrina rica em plaquetas (PRF) por meio de análise histomorfométrica. Foram utilizados 54 ratos adultos (albinus, Wistar), com 90 dias de idade. Dois defeitos ósseos críticos com 5 mm de diâmetro foram confeccionados na calvária de cada rato. Os animais foram divididos em 4 grupos: C-Coágulo de sangue, B-Bio-Oss®, FPRF, B+F-Bio-Oss® + PRF. Cada grupo foi subdividido nos períodos de observação de 30 e 60 dias. Todos os dados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis, teste de Dunn e teste de sinais de postos de Wilcoxon, o nível de confiança foi de 5%. Todos os grupos apresentaram resultados semelhantes quanto à proporção de neoformação óssea. Aos 30 dias na proporção de neoformação lamelar, GF apresentou maiores resultados estatisticamente com GB (GBvs.GF, p = 0,0256). Em relação ao fechamento do defeito, aos 30 dias o GF apresentou diferença estatística ao GC (GFvs.GC, p = 0,0374) e aos 60 dias o GB apresentou diferença estatística ao GC (GBvs.GC, p = 0,0374). Por meio da estatística descritiva, foi possível observar que o FRP tem ação positiva para o processo inicial de neoformação óssea. A associação Bio-Oss® e L-PRF parece estar relacionada à manutenção da arquitetura de neoformação óssea. No entanto, mais estudos são necessários para confirmar esse achado.
Extratos de romã e hamamélis: existe ação antimicrobiana sobre cepas clínicas de Acinetobacter baumannii e Klebsiella pneumoniae multirresistentes?
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-05) Liberato, Sabrina Ferreira dos Santos; Oliveira, Luciane Dias de [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Acinetobacter baumannii e Klebsiella pneumoniae são patógenos prioritários globais resistentes a antibióticos, portanto, é relevante encontrar métodos alternativos para controlá-los, e os fitoterápicos têm sido investigados para essa finalidade. Em vista disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana e antibiofilme do extrato glicólico de Hamamelis virginiana (hamamélis) e do extrato hidroalcóolico de Punica granatum (romã) isolados e em combinação sobre cepas ATCC e clínicas de A. baumannii e K. pneumoniae. Primeiramente, foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Microbicida Mínima (CMM) pelo teste de microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), após, o potencial antimicrobiano da combinação entre esses extratos foi analisado sobre esses micro-organismos por meio da técnica “checkerboard”. Posteriormente, a redução da atividade metabólica dos biofilmes foi avaliada pelo teste de MTT (contato de 5 min e 24h), para tanto a CMM e as duas concentrações acima dela foram utilizadas. A concentração correspondente a 2X a CMM dos extratos combinados foi utilizada no teste de MTT para o tratamento dos biofilmes no tempo de 5 min e 24h. Os extratos isolados e combinados apresentaram ação microbicida contra A. baumannii e K. pneumoniae na forma planctônica. O extrato de romã apresentou CMM de 1,71 a 3,43 mg/mL para A. baumannii e de 3,43 a 13,75 mg/mL para K. pneumoniae, enquanto que Hamamélis exibiu CMM de 12,5 a 25 mg/mL para A. baumannii e de 25 a 50 mg/mL para K. pneumoniae. O uso combinado dos extratos resultou em treze concentrações aditivas para A. baumannii e quinze para K. pneumoniae. A redução de viabilidade em biofilmes de A. baumannii chegou a 64,94% para o extrato de romã, e 83,45% para o extrato de Hamamélis. K. pneumoniae apresentou redução máxima de 75,66% com extrato de Romã e de 76,56% com o extrato de Hamamelis. A redução do biofilme variou conforme a concentração e cepa quando tratado com a combinação dos extratos. Com isso, pode-se concluir que os extratos apresentam importante ação antibacteriana e antibiofilme sobre os patógenos avaliados, podendo ser considerados potenciais agentes terapêuticos para o combate destes patógenos.
Análise do potencial antifúngico resultante da combinação de extratos de plantas sobre Candida spp.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-07-29) Meccatti, Vanessa Marques; Oliveira, Luciane Dias de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O gênero Candida é responsável por cerca de 80% das infecções fúngicas nosocomiais e o estudo da fitoterapia e sinergismo de substâncias são considerados potenciais alternativas para controle dessas infecções. Com isso, o presente estudo propôs avaliar in vitro: a atividade antifúngica dos extratos de Curcuma longa L. (cúrcuma) e Rosa centifolia L. (rosas brancas), bem como Rosmarinus officinalis L. (alecrim) e Punica granatum L. (romã) isolados e combinados sobre Candida albicans, Candida dubliniensis e Candida tropicalis; ação antibiofilme das combinações aditivas sobre biofilmes monomicrobianos de Candida spp. com diferentes tempos de contato: 5 min, 30 min e 24 h. Inicialmente foram feitas análises da ação antifúngica dos extratos isolados por meio do teste de microdiluição em caldo (Clinical and Laboratory Standards Institute). Baseado nas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) obtidas, foi analisado o potencial antifúngico das combinações por meio da técnica “checkerboard” e adotado o índice de concentração inibitória fracionária (ICIF). As CIMs e as concentrações aditivas foram analisadas sobre biofilmes formados por 48 h em poços de microplacas para posterior determinação da viabilidade celular por meio do teste MTT. Para análise estatística, os dados foram analisados pelos testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn com nível de significância de 5%. Todos os extratos vegetais apresentaram ação fungistática e fungicida; os extratos de cúrcuma e rosas brancas juntos apresentaram uma combinação aditiva para cada espécie de Candida e a mistura dos extratos de alecrim e romã resultaram em três combinações aditivas para C. albicans e quatro para as espécies não-albicans (ICIF > 0,5 e ≤ 1,0). Sobre biofilmes, as combinações e os extratos isolados apresentaram reduções com diferença estatistica em relação ao controle (p < 0,05). Conclui-se que os extratos vegetais de cúrcuma e rosas brancas bem como alecrim e romã apresentam ação antifúngica e antibiofilme, tanto isolados quanto combinados, contra Candida spp. em diferentes concentrações e tempos de ação.
Efeitos in vitro e in vivo dos inibidores da protease do HIV Atazanavir e Darunavir nos fatores de virulência de Candida albicans: formação de biofilme, filamentação e infecção em modelo de Galleria mellonella
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-05-28) Fenley, Juliana De Camargo [UNESP]; Rossoni, Rodnei Dennis [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Candida albicans é um fungo que habitualmente coloniza superfícies mucosas de humanos e pode assumir caráter patogênico a depender de fatores do hospedeiro. Portadores da Síndrome da Imunodeficiência Humana, causada pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), são propícios a apresentar candidose nas mucosas devido a imunodeficiência celular que apresentam. A introdução da Terapia Antirretroviral (TARV), em especial o surgimento dos Inibidores da Protease do HIV (IPs-HIV), reduziu drasticamente a incidência e prevalência destas patologias ao longo dos anos. Estudos clínicos e epidemiológicos com IPs-HIV de primeira geração demostraram que tal redução não se deve exclusivamente à melhora imunológica promovida pela TARV, e pesquisas in vitro já demonstraram propriedades antifúngicas e antibiofilme de alguns IPs-HIV de primeiras gerações em C. albicans. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do Atazanavir (ATV) e Darunavir (DRV), dois IPs-HIV de segunda e terceira geração respectivamente em uso clínico atual no Brasil, em diferentes fatores de virulência de C. albicans. Para isso foram realizados estudos com duas cepas clínicas de C. albicans isoladas de lesões de candidose orofaríngea de pacientes portadores de HIV para avaliar a ação in vitro das drogas na morfogênese, formação de biofilme (contagem de células viáveis e quantificação de biomassa) e na expressão dos genes de virulência BRC1 e SAP2, e in vivo no efeito protetor desses medicamentos na infecção experimental por C. albicans em modelo de Galleria mellonella. Os dados foram analisados por teste t, ANOVA, Kruskal-Wallis, Dunn e Kaplan-Meier (p<0,05). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) para ambos os IPs-HIV testados foi 512 µg/mL. Nos biofilmes, a redução na contagem de UFC/mL de C. albicans nos grupos tratados com IPs-HIV foi de até 6,81 Log. A biomassa dos biofilmes tratados também sofreu reduções significantes para ATV (82%), DRV (81%) comparada ao grupo controle.DRV e ATV promoveram redução estatisticamente significante de expressão gênica de SAP2 e BRC1, respectivamente, quando comparados ao controle (p<0,05). Em relação à morfogênese de C. albicans, ATV e DRV inibiram significativamente a formação de hifas (p=0,0183). No estudo in vivo, o uso profilático de ATV e DRV em G. mellonella infectadas com C. albicans prolongou em até 40% a sobrevivência das larvas (p=0,0004). Conclui-se que ATV e DRV inibiram a filamentação e apresentaram atividade antifúngica, antibiofilme e na expressão de genes de fatores de virulência de C. albicans e preveniram candidose em G. mellonella.
Influência da funcionalização do biovidro, preparado pela rota sonoquímica, com o fármaco teriparatida 10 na resposta celular in vitro e in vivo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-04-06) Souto, Juliani Caroline Ribeiro de Araújo; Vasconcellos, Luana Marotta Reis de [Unesp]; Okamoto, Roberta; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo neste estudo foi avaliar a influência do biovidro 45S5 funcionalizado com teriparatida 10% na diferenciação e atividade de células mesenquimais, e no reparo ósseo em defeitos críticos realizados em ratas ovariectomizadas. O biomaterial foi produzido e caracterizado antes e após a funcionalização. Para o estudo in vitro, foram diferenciados osteoblastos obtidos a partir de células mesenquimais, isoladas de fêmures de ratas ovariectomizadas. Após diferenciação, as células foram submetidas ao MEV, MTT, conteúdo de proteína total, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de nódulos de mineralização. No estudo in vivo, foram utilizadas 40 ratas Wistar, as quais foram divididas em dois grupos (n=20), grupo submetido à ovariectomia bilateral (OVX) e grupo submetido à cirurgia simulada de ovariectomia (Sham). Após 60 dias destes procedimentos, independente do grupo, todas as ratas foram submetidas à confecção de defeitos ósseos críticos de 5,0 mm, na calvária. No lado direito foram preenchidos com coágulo (controle) ,enquanto do lado esquerdo metade dos animais receberam preenchimento no defeito ósseo de biovidro (BG) e a outra metade recebeu como material de preenchimento o biovidro funcionalizado com teriparatida 10% (BGT). Após 2 e 6 semanas, os animais foram eutanasiados (n=10). A caracterização por MEV, espectroscopia de energia dispersiva (EDS), espectroscopia de infravermelho por transformação de Fourier (FTIR) e o potencial Zeta demonstraram que as amostras após a funcionalização apresentaram características morfológicas topográficas e químicas modificadas, indicativas de que a superfície foi alterada pelo processo de funcionalização. Na análise in vitro, observou que os grupos experimentais não foram citotóxicos, propiciaram um ambiente adequado à atividade e diferenciação celular e permitiram o espraiamento celular sobre as amostras. Na análise histológica descritiva os grupos experimentais, demonstraram neoformação óssea na região do defeito em ambos grupos e períodos. Na análise histomorfométrica, somente o grupo biovidro funcionalizado com o fármaco no grupo OVX no período de 6 semanas diferiu estatisticamente dos demais grupos (p<0,05) no período de 2 semanas. Conclui-se que estudos de longo prazo devem ser realizados para fornecer informações adicionais sobre o desempenho biológico da ação sinérgica entre os biovidros e a liberação do fármaco teriparatida.
Influência de scaffolds à base de cimento de aluminato de cálcio incorporados com células mesenquimais na regeneração óssea: estudo in vivo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-04-01) Bronze, Carla da Silveira e Oliveira; de Vasconcellos, Luana Marotta Reis; de Oliveira, Ivone Regina; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O cimento de aluminato de cálcio (CAC) tem se tornado um biomaterial de destaque para a neoformação óssea devido às suas propriedades físicas, mecânicas e biocompatibilidade, além de possuir coeficiente de expansão térmica similar ao osso humano. O objetivo neste trabalho foi avaliar o potencial de regeneração óssea de scaffolds à base de CAC, incorporados ou não com células mesenquimais (MSC) em defeitos ósseos realizados em fêmures de ratos. Foram produzidos 48 scaffolds de CAC e suas blendas fosfato tricálcico (FOSF), óxido de zinco (ZNO) e zircônia (ZIRC), sendo que metade destes foram incorporados com MSC. Vinte e três ratos Wistar foram utilizados, sendo 03 para isolamento das MSC e 20 para confecção de defeitos ósseos em ambos os fêmures. Estes, receberam scaffolds do mesmo material incorporados com MSC do lado esquerdo e não incorporados do lado direito (n=5); e foram eutanasiados 21 dias após o procedimento cirúrgico.Na análise dos scaffolds por microscopia eletrônica de varredura foram verificadas estruturas com poros abertos e interconectados, além de adesão celular em todos os grupos.Na análise histológica, foi observado que todos os grupos apresentaram trabéculas ósseas neoformadas, entremeadas por células da medula óssea e tecido conjuntivo. Na histomorfometria, para os scaffolds não incorporados com MSC, observou-se que o grupo ZIRC apresentou maior neoformação óssea e nos scaffolds incorporados com MSC, o grupo FOSF demonstrou melhores resultados, ambos exibindo diferença estatística para os demais grupos (p<0,05). Na análise intragrupos, todos os grupos exibiram maior neoformação óssea quando incorporados com MSC, exceto o grupo ZIRC, único que apresentou melhores resultados quando não incorporado com MSC. Concluiu-se que scaffolds da blenda ZIRC promovem maior neoformação óssea, porém, quando estes são incorporados com MSC, a blenda FOSF exibe os melhores resultados. A incorporação de MSC influenciou positivamente a neoformação óssea, exceto na blenda ZIRC. Concluiu-se ainda que, dentre todos os grupos, o ZIRC sem células e o FOSF com células mostraram-se mais promissores na neoformação óssea, sem diferença estatística entre eles (p<0,05).
Identificação de possíveis biomarcadores metabolômicos salivares e vias metabólicas alteradas em pacientes com carcinoma de células escamosas bucal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-02-23) Alves, Mariana de Sá; Almeida, Janete Dias [Unesp]; Alves, . Levy Anderson César; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O carcinoma de células escamosas bucal (CCEB) representa 90% das neoplasias malignas da região intrabucal. O desenvolvimento dessa doença é multifatorial, envolvendo fatores genéticos e ambientais que podem ser, muitas vezes, desconhecidos e que podem apresentar modificação das vias metabólicas. Assim, o objetivo desta pesquisa foi identificar os metabólitos salivares de pacientes com CCEB na busca de vias metabólicas alteradas, assim como possíveis biomarcadores metabólicos. Os metabólitos salivares de 27 pacientes com CCEB foram comparados aos metabólitos de 41 pacientes controles. As amostras de metaboloma salivar foram analisadas por meio de cromatógrafo gasoso acoplado a um espectrômetro de massa (GC-MS). Os resultados indicaram 26 metabólitos específicos para o grupo CCEB e 5 específicos do grupo controle. No diagrama de Venn foram observados 77 metabólitos comuns aos dois grupos. Esta análise foi crucial para a descoberta de três vias metabólicas com diferença estatística entre os grupos: a lançadeira malato-aspartato, a via do metabolismo da beta-alanina e o efeito Warburg. Todas essas vias relacionam-se com a produção de energia celular na carcinogênese, promovendo um ambiente favorável para o alto consumo energético e sobrevivência celular. Ao comparar os metabólitos salivares de pacientes controles e com câncer bucal, 40 metabólitos foram capazes de distinguir os grupos estatisticamente, sendo 20 metabólitos aumentados nos pacientes com carcinoma e 20 aumentados nos pacientes sem a doença. Com a finalidade de identificar os metabólitos como possíveis biomarcadores salivares, a curva ROC foi traçada e um corte de 0,8 no AUC foi construído descobrindo-se 24 metabólitos. Após um novo corte nos metabólitos com AUC de 0,9, metabólitos como ureia, leucina, inosina e metionina puderam ser explorados como candidatos a biomarcadores metabolômicos salivares de pacientes com CCEB já relatados na literatura. Além destes, 6 outros metabólitos apresentaram AUC acima de 0,9 e são relatados pela primeira vez em um estudo de metaboloma salivar de pacientes sul-americanos com câncer bucal, são estes: o ácido málico, maltose, ácido protocatecuico, lactose, ácido-2-cetoadípico e catecol. Essas alterações metabólicas auxiliam na descoberta de biomarcadores salivares de pacientes com câncer bucal e despertam o interesse para que haja outros estudos com maior número de amostras no intuito de validar nossos resultados.
Efeito do cloridrato de duloxetina frente a Cryptococcus neoformans: abordagem in vitro e in vivo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-04-27) Menezes, Raquel Teles; Scorzoni, Liliana; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A criptococose se destaca pela alta incidência principalmente em pacientes imunocomprometidos, sendo responsável por um terço de todas as mortes em pacientes HIV positivos. Cryptococcus neoformans é o agente etiológico dessas infecções e possui uma cápsula composta, principalmente, por glucuronoxilomanana (GXM) e galactoxilomanana (GalXM) e é o maior fator de virulência dessa levedura. Devido ao limitado número de antifúngicos disponíveis, a toxicidade e a resistência a esses fármacos, o reposicionamento de medicamentos, ou seja, o uso de fármacos convencionalmente utilizados para outras finalidades no tratamento de uma nova doença, bem como a combinação entre os mesmos, podem ser opções importantes para o tratamento da criptococose. Os animais invertebrados têm sido amplamente utilizados na avaliação de eficácia e toxicidade de compostos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica do composto cloridrato de duloxetina (CD) isolado e em combinação com o antifúngico fluconazol (FLZ) utilizando técnicas in vitro e in vivo. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM) foi realizada a técnica de microdiluição de acordo com a European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). Em seguida, foi realizada a avaliação da atividade sinérgica de CD em combinação com FLZ. Além disso, foram avaliados os efeitos isolados de CD bem como as combinações sinérgicas com FLZ em cápsula induzida desta levedura e também na liberação de GXM. Em relação aos ensaios in vivo, o efeito tóxico de CD foi avaliado nos modelos de Caenorhabditis elegans e em Galleria mellonella. Além disso, a eficácia de CD por análise de curva de sobrevivência e o efeito na concentração de hemócitos também foram avaliados em G. mellonella. O fármaco CD apresentou o valor de CIM e CFM de 18,5 µg/mL e quando em combinação com FLZ resultaram em 12 concentrações sinérgicas reduzindo o valor de CIM em 4 a 16 vezes para CD e 4 vezes para FLZ. A análise do efeito de CD e combinações com FLZ mostrou diminuição de 12,5% a 67% no tamanho da cápsula quando avaliadas em concentração sub-inibitória, e em combinação com o FLZ. CD foi capaz de induzir a liberação de GXM em concentração dose-dependente. Em C. elegans e G. mellonella, CD não apresentou efeito tóxico. A dose 18,5 µg/larva de CD em G. mellonella diminuiu 35 vezes a concentração de hemócitos em relação ao grupo PBS. O tratamento isolado e em combinação com FLZ não aumentou o porcentual de sobrevivência de G. mellonella em relação ao grupo controle, fato que pode estar relacionado à alta lipossolubilidade do composto mantendo ligado ao corpo de gordura e impedindo assim seu efeito. Portanto, esse estudo mostrou que CD é ativo frente a C. neoformans in vitro, quando isolado e em combinação com fluconazol, sendo ainda capaz de agir na cápsula desta levedura e liberação de GXM.
Estudo do metaboloma salivar em pacientes com diagnóstico de câncer bucal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-05-05) Rodrigues, Nayara de Sá; Almeida, Janete Dias [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O presente estudo teve como objetivo comparar o metaboloma salivar de pacientes com diagnóstico de câncer bucal ao de pacientes sem histórico de neoplasias malignas. As amostras de interesse foram obtidas por meio da coleta de saliva em dois grupos: Grupo 1 – CCE: constituído de pacientes diagnosticados com carcinoma de células escamosas que deram entrada para tratamento antineoplásico; e Grupo 2 – Controle: constituído de pacientes sem histórico de neoplasias malignas, emparelhados por idade e sexo aos pacientes do Grupo 1. Os pacientes de ambos os grupos passaram por avaliação do perfil tabágico e grau de dependência nicotínica. As amostras de saliva foram analisadas no Laboratório Demspter de espectrometria de massas do Departamento de Engenharia Química da Escola Politécnica da USP por meio de cromatógrafo gasoso acoplado a um espectrômetro de massa (GC-MS). As análises estatísticas foram realizadas por meio da análise de componentes principais (PCA), testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado foi o valor convencional de 5%. Ao todo foram encontrados 467 metabólitos. Desses compostos, 3 foram expressos apenas no grupo CCE, sendo eles: glicina, ácido glioxílco e ácido oxovalérico. A glicina mostrou ligação biossintética com a serina e correlação com a proliferação nas células cancerígenas. O ácido glioxílico e seu efeito antiproliferativo, foi utilizado com fins terapêuticos no câncer de cólon. Não foram encontrados estudos relacionando o ácido oxovalérico com câncer. Devido a sua propriedade acidogênica, sugerimos que este cetoácido possui ligação com a acidificação no microambiente tumoral. A maior parte dos metabólitos significativos foram aminoácidos, que é um importante fator na carcinogênese pela função de síntese de proteínas, ácidos nucleicos, lipídios e ATP. Embora tenha sido utilizada amostra de conveniência para o presente estudo, os resultados demonstraram sinais promissores para a quantificação de metabólitos estatisticamente significativos identificados e relacionados aos processos metabólicos do câncer bucal.
Superexpressão de genes da via Wnt/β-catenina no carcinoma de células escamosas bucal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-02-14) Carvalho, Bruna Fernandes do Carmo; Almeida, Janete Dias [Unesp]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O presente trabalho tem como proposição avaliar a expressão de genes da via de sinalização Wnt no carcinoma de células escamosas bucal (CCE). Foram avaliados dois grupos: Grupo controle (GCO): 12 amostras de mucosa bucal com aspecto de normalidade. Grupo carcinoma (GCA): 30 amostras com diagnóstico histopatológico de CCE. As informações quanto ao hábito tabágico, consumo de etílicos, gradação e estágio da doença foram extraídas dos prontuários. A expressão dos genes WNT5A, APC, CTNNB1, CCND1, MYC foi avaliada por meio de RT-qPCR e, os resultados de expressão gênica foram correlacionados com os dados clinicopatológicos dos pacientes. Os dados foram analisados por meio do software GraphPad Prism 5.03. Utilizou-se o teste t de Student e os coeficientes de correlação de Pearson e de Sperman, com nível de significância de 5% para todos os testes. Houve superexpressão dos genes, WNT5A (fold increase=0,28; p=0,034), APC (fold increase=0,74; p=0,043), CTNNB1 (fold increase=0,36; p=0,493), CCND1 (fold increase=0,67; p= 0,049) e MYC (fold increase=0,99; p=0,001) no GCA, quando comparado ao GCO. Ainda, a expressão do gene MYC apresentou correlação inversamente proporcional com o consumo de cigarros por dia (-3,76; p=0,040) e carga tabágica (-3,73; p=0,043). Já a expressão do gene CTNNB1 apresentou correlação inversamente proporcional ao Teste de Fagerström (-0,405; p=0,026) e a gradação histopatológica (-0,419; p=0,021). A via de sinalização Wnt/β-catenina mostrou-se envolvida na carcinogênese bucal das amostras estudadas, por meio da superexpressão dos genes WNT5A, APC, CCND1 e MYC. Interessantemente, o aumento da expressão de CTNNB1 correlacionou-se com menor carga tabágica da mesma forma que o MYC com menor número de cigarros diários e menor carga tabágica. Assim, sugere-se que o papel da via Wnt parece ser importante nos estágios iniciais da carcinogênese bucal e que a ativação ou superexpressão dos genes se dá de maneira independente ao hábito tabágico.

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