Teses - Patologia - FMB

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Os receptores de vitamina D e retinoide X alfa em lesões malignas e benignas de pele: análise imunohistoquímica e transcriptômica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-23) Ocanha-Xavier, Juliana Polizel; Marques, Mariângela Esther Alencar [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
INTRODUÇÃO: A vitamina D se liga a seu receptor (VDR) para exercer suas funções e este se heterodimeriza com um receptor retinoide X (RXRα) e desta forma, em heterodimero, atua em regiões genéticas responsivas a vitamina D (VDRE) ativando ou inibindo transcrições gênicas. A principal fonte de vitamina D é a exposição à radiação ultravioleta, mas a mesma também é a principal causadora de cânceres de pele. Entretanto, diversos estudos, principalmente experimentais demonstraram efeito antiproliferativo, pró-apoptótico, anti-angiogênico e favorável a senescência celular pela vitamina D e seus metabólitos em células de melanoma. Da mesma forma, estudos demonstraram atividade antiproliferativa dos retinoides e seus análogos, levando, inclusive, a seu uso em transplantados renais e em algumas síndromes cutâneas, visando a prevenção de cânceres de pele, especialmente os não melanoma. OBJETIVO: Analisar a expressão do VDR e do RXRα em lesões de pele não melanocíticas (queratose actínica, carcinoma basocelular e carcinoma espinocelular) e melanocíticas (nevo intradérmico, nevo displásico e melanoma) através de análise imuno-histoquímica e transcriptômica e compará-las a grupo controle. MÉTODOS: Estudo retrospectivo transversal, com materiais histopatológicos embebidos em parafina provenientes de exéreses realizadas entre 2012 a 2018, no Hospital das Clinicas de Botucatu, da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Foi considerado controle o grupo de peles provenientes de ampliação de margem de melanomas, com ausência de qualquer lesão no material. Após todos os grupos serem submetidos aos critérios de inclusão e exclusão, foram submetidos à análise imuno-histoquímica para VDR da marca Abcam e RXRα da marca Novus Biologicals. Foram considerados positivos os casos cujo escore, que observava intensidade e porcentagem de positividade das células, fosse maior que 4. Posteriormente, alguns grupos foram selecionados para análise molecular em plataforma para análise múltipla de RNAm (Nanostring®). Para esta etapa foram selecionados outros 20 genes correlacionados a VDR e RXRα e mais 2 genes housekeeping (GAPDH e B-actina) para terem seus respectivos RNAm analisados em conjunto. Os genes selecionados foram: NCOA1, NCOA2, NCOA3, NCOR1, NCOR2, RAR A, RAR B, RAR G, RXR G, MED1, SMAD3, FOXO3, CYP27B1, CYP24A1, AhR, XPA, XPC. TP53, CREBB e EP300. Todos os dados foram submetidos a análise estatística, considerando p< 0,05 significativo. O trabalho foi submetido e aprovado no comitê de Ética da instituição. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Nas lesões não melanocíticas, ocorreu perda de RXRα nas queratoses actínicas e perda de ambos os receptores no carcinoma espinocelular. Estes dados favorecem a hipótese de que a vitamina D seria importante no processo de carcinogênese das lesões escamosas. Nas lesões melanocíticas, se observou perda de ambos os receptores em todas as lesões quando comparadas ao grupo controle. Houve correlação estatística da perda dos receptores com a exposição solar, corroborado pela análise do grupo controle em separado. Houve também correlação significativa entre VDR nuclear e regressão histológica, bem como correlação inversa entre RXRα e mitoses. Estas informações favorecem a hipótese de que a exposição solar seria um fator fundamental na perda dos mecanismos de proteção do VDR e RXRα e que provavelmente essa perda ocorra no início da formação das lesões melanocíticas já que não houve diferença estatística entre as lesões avaliadas, a despeito de sua malignidade ou benignidade. Por fim, a análise transcriptômica comprovou a perda de VDR e RXRα nas lesões melanocíticas (nevo intradérmico e melanoma) e demonstrou perda de VDR e RXRα também em carcinomas basocelulares e espinocelulares. Houve diferença estatística com relação a maioria dos RNAm analisados comparando as lesões com o controle, porém quando comparamos as lesões entre si, carcinoma basocelular se diferenciou de carcinoma espinocelular, mas nevo intradérmico não se diferenciou de melanoma. Houve também diminuição de FOXO3, TP53 e XPC nos melanomas. CONCLUSÃO: A expressão de VDR e RXRα se demonstrou afetada pela exposição solar, mecanismo pelo qual poderia haver diminuição dos efeitos protetivos da vitamina D e RXRα. Os resultados da análise imuno-histoquímica foram corroborados pelos da análise transcriptômica, indicando um importante papel do VDR e RXRα na carcinogênese das lesões escamosas de pele. Com relação às lesões melanocíticas, a perda dos receptores provavelmente não se relaciona ao processo de carcinogênese, haja vista que não houve apresentação diferencial deles nas lesões benignas se comparadas às malignas. A maior compreensão desta via fisiopatogênica abre oportunidade para novos estudos e pesquisas, podendo se tornar alvo de estratégias terapêuticas.
Efeitos da oleorresina de tomate sobre o metaboloma hepático de ratos portadores de síndrome metabólica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-28) Costa, Mariane Róvero [UNESP]; Moreto, Fernando; Corrêa, Camila Renata [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Introdução: A síndrome metabólica (SM) é uma condição caracterizada pela presença de um grupo de fatores de risco que englobam a obesidade abdominal, hiperglicemia, resistência à insulina, dislipidemia e hipertensão. A interação dos mecanismos fisiopatológicos da SM desencadeia o desenvolvimento da doença hepática gordurosa não alcoólica. No contexto das doenças metabólicas, a busca por alternativas terapêuticas como a suplementação com compostos que apresentam efeitos protetores tem sido muito explorada. O licopeno é um carotenoide que possui potente atividade antioxidante e anti-inflamatória, cujos efeitos sobre a SM e suas consequências no fígado tem sido investigados. Objetivo: Verificar o efeito da suplementação com o licopeno sobre o metaboloma hepático de ratos portadores de SM. Métodos: Ratos Wistar (oito semanas de idade) foram distribuídos em dois grupos e alimentados com diferentes dietas: dieta controle (n=12) e dieta rica em gordura e açúcar (n=12). Após vinte semanas foram encontradas mudanças no peso corporal, glicemia de jejum e triglicerídeos plasmáticos. Para o tratamento com suplementação de oleorresina de tomate, os animais foram redistribuídos em quatro grupos: controle (Co, n=6), controle suplementado com oleorresina de tomate (Co+Lyc, n=6), síndrome metabólica (MetS, do inglês metabolic syndrome, n=6) e MetS suplementado com oleorresina de tomate (MetS+Lyc, n=6). O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética. Resultados: A suplementação com licopeno diminuiu os níveis plasmáticos de triglicérides, e aumentou os níveis de lipoproteína de alta densidade. Além disso, atenuou os níveis de triglicérides no tecido hepático. A análise de metabolômica revelou alteração do perfil de metabólitos induzidos pela MetS e efeito do licopeno sobre esse perfil, incluindo os metabólitos ácido úrico, biliar e cólico, glicolato, calcitriol, farnesil difosfato, all-trans hexaprenil difosfato, xantosina, xantina, s-adenosyl-L-metionina, L-homocisteína, esfingosina-1- fosfato, L-leucina, D-leucina e L-isoleucina. Conclusão: O composto apresentou efeito protetor em relação à parâmetros característicos da SM, assim como para indicador de esteatose hepática. A suplementação com licopeno restaurou níveis dos aminoácidos de cadeia ramificada, L-leucina, D-leucina e L-isoleucina, depletados nos animais portadores de SM.
Aspectos da microbiota vaginal relacionados à resposta inflamatória local e infecção pelo papilomavírus humano
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-11) Novak, Juliano; Marconi, Camila [UNESP]; Silva, Márcia Guimarães da [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A microbiota vaginal normal é composta por espécies de Lactobacillus que, principalmente devido a capacidade de produção de ácido lático, conferem um ambiente protetor contra as infecções sexualmente transmissíveis (ISTs), incluindo pelo papilomavírus humano (HPV), que é a IST mais prevalente mundialmente. Quando há substituição de Lactobacillus spp. por espécies anaeróbias e facultativas como Gardnerella vaginalis, Fannyhessea vaginae, Prevotella spp. entre outras, tem-se uma condição conhecida como vaginose bacteriana (VB). A microbiota vaginal pode ser classificada molecularmente, de acordo com o perfil dos genes bacterianos codificantes do RNA ribossômico 16S em cinco tipos de comunidades bacterinas (CSTs, do inglês community-state types) após sequenciamento. Em quatro CSTs, observa-se o predomínio de Lactobacillus spp., sendo: L. crispatus a espécie dominante na CST I, L. gasseri na CST II, L. iners na CST III e L. jensenii na CST V. Na CST IV, observa-se a depleção de Lactobacillus, acompanhada por uma microbiota diversa, com abundância de espécies anaeróbias e facultativas, compreendendo a maioria dos casos de VB. Na VB, observa-se o aumento dos níveis cérvico-vaginais de citocinas inflamatórias e de produtos bacterianos, como as sialidases. Tais alterações nos componentes cérvico-vaginais reduzem a capacidade de proteção da barreira física e imunológica local. Portanto, alinhado ao objetivo de correlacionar os parâmetros da microbiota vaginal e os níveis de citocinas no ambiente cérvico-vaginal nas diferentes CSTs vaginais, foi verificado que, em geral, a CST II apresenta um perfil distinto de correlações, principalmente entre carga bacteriana e citocinas, quando comparado às outras CSTs dominadas por Lactobacillus (CST I e CST III). Embora os mecanismos pelos quais a VB contribua para a aquisição e persistência de ISTs não sejam completamente elucidados, acredita-se que o aumento das sialidases bacterianas locais esteja envolvido. Neste sentido, objetivou-se comparar as cargas do gene nanH3 que codifica a sialidase de Gardnerella spp. no fluido cérvico-vaginal de mulheres com persistência da infecção pelo HPV de alto risco oncogênico (hrHPV, do inglês high-oncogenic risk HPV) e aquelas que eliminaram a infecção (clearance) após 12 meses. Observou-se que, embora não haja diferença na carga de nanH3 entre os grupos com persistência e clearance de hrHPV, quando considerado apenas o genótipo HPV16, a carga de nanH3 é significativamente maior em mulheres com a persistência viral. Portanto, a classificação molecular da microbiota vaginal e a correlação dos parâmetros microbiológicos com citocinas permitem o melhor entendimento nos mecanismos envolvidos na relação entre a microbiota vaginal e a maior vulnerabilidade às ISTs. Além disso, a identificação de fatores de virulência bacterianos, como as sialidases, produzidos por componentes da microbiota vaginal alterada poderá contribuir para a identificação de preditores da microbiota associados à persistência de ISTs, como o HPV e as lesões HPV-induzidas.
Avaliação de biomarcadores circulantes para monitoramento da esteato-hepatite e fibrose na doença gordurosa hepática não alcoólica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-01) Lima, Rodrigo Santos; Grotto, Rejane Maria Tommasini [UNESP]; Golim, Márjorie de Assis [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Neste trabalho foi descrito um panorama acerca da Doença Gordurosa Hepática (NAFLD). O conteúdo deste estudo foi subdividido em Capítulos I e II. O Capítulo I versa sobre uma revisão da literatura no que diz respeito à temas como apresentação da doença, fisiopatologia, epidemiologia atual, a relevância da biópsia hepática para o estadiamento de lesões inerentes à progressão da doença, a utilização de métodos não invasivos para avaliação de fibrose hepática e a participação de citocinas, quimiocinas, TIMPs e células do sistema imune no contexto inflamatório que deflagra as lesões progressivas da doença. No Capítulo II foi apresentado o estudo decorrente das pesquisas realizadas para esta tese, o qual avaliou o potencial de biomarcadores circulantes para o monitoramento de esteato-hepatite e fibrose hepática na NAFLD. Nestas análises foi possível observar a relevância de moléculas como TIMP-1, IL-8, MIG, IP-10, MCP-1 e RANTES para o acompanhamento de pacientes diagnosticados com a NAFLD, resultados estes que poderiam propiciar o desenvolvimento de novos algoritmos para o acompanhamento clínico de pacientes com NAFLD.
Ação de compostos fenólicos nas propriedades in vitro de células malignas humanas derivadas de adenocarcinomas de mama e de próstata
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-11-18) López-Castañeda, Brayan [UNESP]; Oliveira, Deilson Elgui de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Os cânceres de mama e de próstata são doenças agressivas que constituem um importante problema de saúde pública em todo o mundo. Embora diversas drogas tenham sido desenvolvidas para o tratamento dessas doenças oncológicas, com frequência são observadas baixa seletividade para células neoplásicas, efeitos colaterais relevantes e resistência tumoral à quimioterapia, situações que motivam o desenvolvimento de novos fármacos com ação antineoplásica. Compostos fenólicos tem sido considerados potenciais candidatos a novos agentes antineoplásicos com base em estudos que sugerem ação citotóxica, citostática e antimetastática para essas substâncias. Entretanto, diversos estudos na literatura sobre o potencial efeito antineoplásico de compostos fenólicos apresentam inconsistências relevantes e seus possíveis mecanismo de ação não são adequadamente elucidados. No presente estudo, foi avaliado possíveis efeitos do tratamento de células malignas humanas derivadas de cânceres de mama e próstata com os ácidos cafeico (ACA), cinâmico (ACI) e ferúlico (AFE), compostos fenólicos obtidos de diferentes fontes naturais, tais como a própolis produzida por abelhas. Foram empregadas linhagens de células humanas com níveis diferentes de agressividade biológica, avaliadas quanto a viabilidade celular, taxas de migração e invasão in vitro. As células foram incubadas com os compostos fenólicos em concentrações finais de 25 - 800µM por 24, 48 e 72h. A viabilidade celular foi estimada pelo ensaio MTT e as taxas de migração e invasão celular foram avaliadas em ensaios com câmara de Boyden. Houve consistente redução da viabilidade celular em todas as linhagens expostas ao ACA (dose e tempo dependente), mas não foram observados efeitos com ACI e AFE nas mesmas condições. Os valores de IC50 para o tratamento com o ACA (72h) foram: 177 ± 15,3 µM para células MCF-7 e 260 ± 45,8 µM para MDA-MB-231 (ambas derivadas de adenocarcinomas de mama), e 90 ± 19,4 µM para LNCaP e 59,29 ± 5,3 µM para PC3 (derivadas de adenocarcinomas de próstata). Em concentrações não-citotóxicas, o tratamento com ACA reduziu significativamente a migração das células MCF-7 (p<0.05) e MDA-MB-231 (p<0.0001); ademais, a combinação dos ACA e ACI em concentrações não citotóxicas reduziram significativamente a inibição da migração de células PC3 (p<0.05) e a invasão de células MCF-7 (p<0.05), MDA-MB-231 (p<0.001), LNCaP (p<0.001) e PC3 (p<0.0001). Esses resultados indicam que o emprego de CA, isolado ou combinado com CIA, pode ser promissor para novos protocolos antineoplásicos dirigidos aos cânceres de mama e próstata.
Caracterização do microbioma intestinal de homens brasileiros com psoríase em comparação com controles onívoros e vegetarianos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-22) Polo, Tatiana Cristina Figueira; Miot, Hélio Amante [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
FUNDAMENTOS: Psoríase é doença inflamatória crônica, associada a inflamação sistêmica e comorbidades. Alterações na composição do microbioma intestinal são envolvidas na patogênese de doenças inflamatórias e síndrome metabólica. Caracterizar o microbioma intestinal de pacientes com psoríase pode ser relevante no entendimento de seu curso clínico e na prevenção de comorbidades. OBJETIVO: Caracterização do microbioma intestinal de homens com psoríase em comparação com controles (sem psoríase) onívoros e vegetarianos. MÉTODO: Estudo transversal envolvendo 42 homens adultos: 21 onívoros com psoríase; e controles: 14 onívoros e 7 vegetarianos. A caracterização do microbioma intestinal foi realizada por análise metagenômica. Avaliaram-se os níveis séricos da proteína ligadora de lipopolissacarídeo (LPB) e proteína C reativa (PCR). RESULTADOS: Os grupos diferiram entre si quanto a aspectos nutricionais e do microbioma, indivíduos com psoríase apresentaram maior consumo de proteínas, e menor de fibras. Níveis de LPB, PCR e a relação Firmicutes/Bacteroidetes foi maior no grupo com psoríase que no grupo vegetariano (p<0,05). Os gêneros Prevotella, Mogibacterium, Dorea, Bifidobacterium e Coprococcus, diferiram no grupo com psoríase em comparação com vegetarianos; já os gêneros Mogibacterium, Collinsella e Desulfovibrio, diferiram dos onívoros. Identificou-se um padrão de microbioma ligado à psoríase (plsPSO) que se associou a maiores níveis de LPB (rho=0,39; p=0,02), e menor ingesta de fibras dietéticas (rho=-0,71; p<0,01). LIMITAÇÕES: Avaliaram-se apenas homens adultos. CONCLUSÃO: Houve diferença no microbioma intestinal de homens adultos com psoríase, em relação a onívoros e vegetarianos saudáveis. O padrão de microbioma encontrado correlacionou-se com a ingesta de fibras alimentares, e com os níveis séricos de LPB.
Produção de citocinas inflamatórias e indução da transição epitelial-mesenquimal de células amnióticas no cenário de infecção polimicrobiana
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-14) Silva, Mariana de Castro; Silva, Márcia Guimarães da [UNESP]; Polettini, Jossimara; Ramos, Bruna Ribeiro de Andrade; Noda-Nicolau, Nathalia Mayumi; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Introdução: O parto pré-termo espontâneo (PP) é considerado um dos principais problemas da clínica obstétrica e tem como uma das principais causas associada a infecção polibacteriana e consequente inflamação dos tecidos da interface materno-fetal. Esse desfecho gestacional desfavorável resulta da combinação de vários mecanismos, incluindo a elevada produção de mediadores inflamatórios e a senescência celular. O objetivo desse estudo foi avaliar a produção e cinética de mediadores inflamatórios em modelos in vitro de infecção polimicrobiana de células amnióticas na presença de diferentes espécies de lactobacilos, além de avaliar fatores indutores da transição epitelial-mesenquimal em células amnióticas. Metodologia: Células amnióticas epiteliais imortalizadas foram cultivadas em modelos in vitro e submetidas a diferentes estímulos compostos por espécies bacterianas comumente identificadas em gestações complicadas por PP. Os sobrenadantes da cultura foram coletados em cinco momentos diferentes: 0h, 6h, 12h, 18h e 24h. As Interleucinas (IL) -6, IL-8, IL-10, IL-13, fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) e fator de necrose tumoral α (TNF-α) foram mensurados empregando-se ensaio imunoenzimático (ELISA) e a análise morfológica foi realizada por meio de análise de cell shape index. Resultados: A produção de citocinas pró-inflamatórias foi maior nos grupos estimulados com Lactobacillus iners em combinações com Mycoplasma hominis e diferentes bactérias. A resposta anti-inflamatória foi maior nos grupos de bactérias anaeróbias estimulados junto com L. crispatus. A transição epitelial-mesenquimal foi significativamente maior no grupo estimulado com L. iners e M. hominis, assim como em combinação com Fusobacterium nucleatum, depois de 24h de estímulo. Esse aumento na transição epitelial-mesenquimal não foi observado quando as células eram tratadas com LPS, mas houve um aumento significativo da quantificação de células mesenquimais quando o estímulo era inflamatório, sendo esse tempo e dose dependente. Conclusão: O cenário induzido por estimulação, das células epiteliais amnióticas, com bactérias Gram-variáveis, na presença de L. iners, apresentou maiores níveis de citocinas pró-inflamatórias, assim como a transição epitelial-mesenquimal esteve associada à presença de mediador inflamatório (TNFα) e às combinações específicas de bactérias.
Ação dos compostos bioativos do café durante a carcinogênese de cólon em modelos in vitro e in vivo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-07-26) Bartolomeu, Ariane Rocha [UNESP]; Barbisan, Luis Fernando [UNESP]; Chaves, Maria Angel Garcia; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O câncer colorretal (CCR) ocupa a terceira posição no ranking das neoplasias mais mortíferas do mundo. A incidência está aumentando constantemente, especialmente nos países em desenvolvimento, devido ao modo de vida "ocidental". De acordo com o relatório estatístico mais recente, mais de 1,9 milhão de novos casos e 935 mil mortes foram identificados no ano de 2020 em todo o mundo. Atualmente, as opções antitumorais e/ou citotóxicas disponíveis na terapia do câncer de cólon são cerca de 50% eficazes e têm um impacto modesto na sobrevida, devido à resistência primária ou adquirida aos medicamentos convencionais, para os quais quase metade dos pacientes recai com metástases. A dieta é um fator importante no desenvolvimento do CCR, nas últimas décadas extensos estudos epidemiológicos e experimentais associaram hábitos alimentares à prevenção e baixo índice de risco. O café está incluído na dieta diária de quase todas as pessoas cujos benefícios foram evidenciados na literatura. A atividade antitumoral relacionada ao consumo de café segue vários mecanismos moleculares que estão sendo gradualmente elucidados. Os três principais compostos bioativos do café são os alcalóides cafeína e trigonelina, e o polifenol ácido clorogênico. Nosso trabalho visa fornecer informações ainda não exploradas sobre estes compostos, isolados ou combinados, contra o CCR. Portanto, o objetivo principal deste trabalho foi demonstrar a ação dos principais compostos do café contra modelos experimentais de CCR in vitro e in vivo, além de avaliar se esses efeitos atuam na subpopulação quiescente de células-tronco cancerígenas. Para isso foram utilizadas linhagens de células tumorais de adenocarcinoma de cólon humano (HCT-116 e HT-29) cultivadas em monocamada e em colonoesferas, bem como modelos experimentais in vivo de indução química de carcinogênese em camundongos Swiss Webster e enxertos xenográficos com camundongos NSG. Após o tratamento com compostos de café, avaliamos sua citotoxicidade e seus mecanismos moleculares, por meio de estudos histológicos e da modulação de alguns alvos envolvidos em marcadores de CRC. Nossos resultados mostram propriedades quimiopreventivas de compostos de café (cafeína e ácido clorogênico) contra o modelo de carcinogênese de cólon induzida por DMH/DCA em camundongos, através da modulação de importantes citocinas (IL-6, TNF-α e IL-17). Também foi observada a ação antiproliferativa com a diminuição da expressão da proteína ki-67 e regulação negativa de um biomarcador crucial no CCR, oncomir miR-21. Da mesma forma, efeitos antiproliferativos foram observados em células de câncer de cólon (HCT-116 e HT-29) cultivadas em monocamada, enquanto o composto trigonelina não produziu nenhum efeito significativo. As 14 / 105 colonosferas secundárias enriquecidas em células-tronco cancerígenas (CSC) formadas com as mesmas linhagens celulares mostraram sensibilidade significativa aos compostos isolados ou combinados durante sua exposição com 72 horas de forma dose-dependente. Diferentes interações antitumorais foram observadas entre os dois compostos cafeína e ácido clorogênico; esta mistura apresentou um forte efeito antagônico nas colonosferas enriquecidas em CSCs da linha HCT-116, enquanto tal efeito foi diferente nas colonosferas enriquecidas em CSCs da linha HT-29, que dependia da concentração escolhida, observado com o IC90 um forte efeito antagônico, com IC50 um leve efeito aditivo e com IC10 um forte efeito sinérgico. Os marcadores de células-tronco do câncer foram drasticamente reduzidos (CD44 e CD326), assim como a atividade da enzima ALDH após o tratamento. Houve um aumento na retenção de Hoescht 33342 que também indicou a redução das subpopulações de CSCs após exposição aos compostos do café. Realizamos dois protocolos de inoculação de colonosfera em camundongos, um de pré-tratamento oral com os compostos de café mais eficazes isolados ou combinados e outro de abordagem de pós-tratamento da mesma forma, levando em consideração que as doses foram baseadas no consumo médio humano de café. Os tumores de CSCs mostraram uma diminuição significativa no grupo de camundongos que recebeu o pré tratamento em comparação ao grupo controle, bem como no grupo pós-tratamento. Nossos resultados, portanto, mostram que as proporções dos compostos de café acima mencionados baseado no consumo humano médio alto podem ter propriedades preventivas ou mesmo terapêuticas quanto ao desenvolvimento do CCR, abrindo uma nova abordagem para pesquisas futuras.
Ensaios clínicos de eficácia no tratamento do melasma facial em mulheres: tiamidol 0,2% e cisteamina 5% tópicos, e picnogenol 150 mg oral
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-06-30) Lima, Paula Basso [UNESP]; Miot, Hélio Amante [UNESP]; Espósito, Ana Cláudia; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
FUNDAMENTOS: Melasma é uma hipermelanose crônica que afeta áreas fotoexpostas, especialmente de mulheres em idade fértil. Até o momento, nenhum dos tratamentos descritos têm grande eficácia ou resultados sustentados. Novas abordagens terapêuticas precisam ser exploradas. OBJETIVO: (1) Avaliar a segurança e eficácia da terapia tópica com tiamidol 0,2% versus hidroquinona 4% tópica e fotoproteção no tratamento do melasma facial em mulheres por um período de 90 dias. (2) Avaliar a segurança e eficácia do picnogenol 75 mg via oral duas vezes ao dia versus placebo, associado à combinação tripla e fotoproteção no tratamento do melasma facial em mulheres por um período de 60 dias. (3) Avaliar a segurança e eficácia da terapia tópica com cisteamina 5% versus hidroquinona 4% tópica e fotoproteção no tratamento do melasma facial em mulheres por um período de 120 dias. MÉTODOS: (1) Ensaio clínico de intervenção, randomizado, paralelo, avaliador-cego e controlado envolvendo 50 mulheres com melasma facial. Além do filtro solar com cor (FPS 60, PPD 20), as participantes foram randomizadas por simulação computacional e alocadas consecutivamente para utilizar hidroquinona 4% creme ao deitar ou uma dupla camada de tiamidol 0,2% creme duas vezes ao dia, por 90 dias. As participantes foram avaliadas no T0, T30 e T90, e o principal desfecho foi a diferença na pontuação do mMASI. Os desfechos secundários foram melhorias na qualidade de vida dos pacientes (MELASQoL), colorimetria e avaliação do GAIS. Os dados longitudinais foram analisados como intenção de tratamento e um modelo linear misto generalizado foi usado para analisar os dados longitudinais e os dropouts. (2) Ensaio clínico de intervenção, randomizado, paralelo, duplo-cego e controlado por placebo realizado com 44 mulheres portadoras de melasma facial. Pacientes foram randomizadas por simulação computacional e alocadas consecutivamente para tomar 75 mg de picnogenol ou placebo por via oral duas vezes por dia durante 60 dias. A sequência de alocação foi ocultada do avaliador e as cápsulas foram formuladas em embalagens exatamente iguais. Ambos os grupos também receberam filtro solar com cor (FPS 50, PPD 17) para uso diurno e combinação tripla tópica ao deitar. As participantes foram avaliadas no T0 e T60, o principal desfecho foi a diferença na pontuação do mMASI. Os desfechos secundários foram melhorias na qualidade de vida dos pacientes (MELASQoL), colorimetria e avaliação do GAIS. Os dados longitudinais foram analisados como intenção de tratamento e um modelo linear misto generalizado foi usado para analisar os dados longitudinais e os dropouts. (3) Ensaio clínico de intervenção, quasi-randomizado, paralelo, avaliador cego e controlado realizado em 40 mulheres com melasma facial. Pacientes foram submetidas à aplicação de curto contato de cisteamina 5% ou hidroquinona 4% por 120 dias. Ambos os grupos utilizaram filtro solar com cor (FPS 50, PPD 19). Os indivíduos foram avaliados na inclusão e após 60 e 120 dias de tratamento. O principal desfecho foi a diferença na pontuação do mMASI. Os desfechos secundários foram melhorias na qualidade de vida dos pacientes (MELASQoL), colorimetria e avaliação do GAIS. A avaliação estatística foi realizada por um avaliador cego e os dados longitudinais foram analisados como intenção de tratamento e um modelo linear misto generalizado foi usado para analisar os dados longitudinais e os dropouts. RESULTADOS: (1) Houve somente um dropout no grupo hidroquinona, não relacionado a efeitos adversos. A idade média dos participantes foi de 43 anos, e 86% eram fototipos III–IV. Ambos os grupos apresentaram redução nos escores de mMASI, MELASQoL e contraste de cor após 90 dias (p<0,01). A redução média [intervalo de confiança de 95% (IC 95%)] dos escores mMASI foi de 43% (35-50%) para tiamidol e 33% (23-42%) para hidroquinona. Não houve diferença entre os grupos nas reduções nos escores mMASI, MELASQoL, contraste colorimétrico e GAIS (p ≥ 0,09). A análise GAIS resultou em uma melhora de 84% (IC: 95% 67–97%) para os participantes do grupo tiamidol e 74% (IC: 95% 61–93%) para aqueles do grupo hidroquinona. Houve apenas efeitos adversos leves no grupo tiamidol, dermatite alérgica de contato foi evidenciada em dois (8%) participantes. (2) Todos os participantes completaram o estudo. A idade média dos participantes foi de 39 anos, e 91% eram fototipos III–IV. Ambos os grupos apresentaram redução nos escores mMASI, MELASQoL e contraste de cor após 60 dias(p<0,01). As reduções médias (IC 95%) dos escores mMASI foram de 49% (36–61%) para o grupo picnogenol e 34% (16–47%) para o grupo placebo. As reduções nos escores mMASI e contraste colorimétrico foram superiores para o grupo picnogenol (p<0,05). A análise do GAIS resultou em uma melhora de 86% (IC 95%: 68–96%) para os participantes do grupo picnogenol e 55% (IC 95%: 32–73%) para aqueles do grupo placebo, com diferença significante entre os grupos. Não foram identificados efeitos adversos relacionados ao tratamento oral. (3) Houve somente um dropout no grupo cisteamina, não relacionado a efeitos adversos. O mMASI reduziu progressivamente ao longo do estudo em ambos os grupos, apesar do grupo HQ apresentar uma despigmentação mais rápida. A redução média dos escores mMASI foi de 24% para CYS e 41% para hidroquinona (P = 0,015) em 60 dias, e 38% para CYS e 53% para hidroquinona (P = 0,017) em 120 dias. A avaliação fotográfica revelou até 74% de melhora para ambos os grupos, sem diferença entre eles (P = 0,087). O escore MELASQoL mostrou uma diminuição progressiva para ambos os grupos ao longo do tempo, apesar da maior redução para hidroquinona após 120 dias (P = 0,018). A avaliação colorimétrica revelou despigmentação progressiva em ambos os grupos, sem diferença entre eles (P > 0,160). Nenhum efeito adverso grave foi identificado em nenhum dos grupos. Eritema e queimação foram os efeitos adversos locais mais importantes com cisteamina, embora sua frequência não tenha diferido entre os grupos (P > 0,170). CONCLUSÃO: (1) A melhora do melasma obtida com o tiamidol a 0,2% não diferiu do creme de hidroquinona a 4%. O tiamidol pode ser considerado uma opção adequada para pacientes com melasma com baixa tolerabilidade ou falha do tratamento com hidroquinona. (2) Picnogenol 75 mg duas vezes ao dia é bem tolerado e aumenta a eficácia do filtro solar de amplo espectro e da combinação tripla no tratamento do melasma facial em mulheres. (3) A cisteamina mostrou-se segura, bem tolerada e eficaz, apesar de seu desempenho inferior à hidroquinona na diminuição do mMASI e MELASQoL no tratamento do melasma.
Influência da intervenção com γ-orizanol na prevenção da síndrome metabólica cardiorrenal em ratos obesos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-27) Garcia, Jéssica Leite [UNESP]; Correa, Camila Renata [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Introdução: O padrão alimentar atual, conhecido como Dieta Ocidental, é caracterizado por alimentos de alta densidade energética ricos em açúcares e gordura, associado à prevalência da obesidade, um problema de saúde pública e plano de fundo para desenvolvimento de outras doenças como a síndrome metabólica cardiorrenal (SMCR). A SMCR define a coexistência de disfunção cardíaca e renal que compartilham mecanismos fisiopatológicos decorrentes da obesidade. Considerando a busca de alternativas para prevenir esses desfechos nocivos, o composto bioativo gama-orizanol (γOz) se destaca por apresentar efeitos benéficos, como a ação anti-inflamatória e antioxidante. Objetivo: Avaliar o efeito preventivo do γOz sobre a SMCR em modelo experimental de obesidade induzida por dieta rica em açúcares e gordura. Materiais e métodos: O estudo foi aprovado pela Comissão Ética no Uso de Animais da Faculdade de Medicina de Botucatu (1309/2019). 21 ratos Wistar, foram aleatoriamente distribuídos em 3 grupos: controle (n=7), high-sugar fat (HSF, n=7) e HSF + γOz (n=7), por 30 semanas. O grupo controle recebeu dieta padrão + água, os grupos HSF receberam dieta rica em açúcares e gordura + água acrescida da 25% de sacarose. O grupo HSF + γOz recebeu o composto isolado na dose de 0.5% adicionado à ração. O peso corporal foi acompanhamento semanalmente. Na 30ª semana, foram realizadas as análises de pressão arterial sistólica, ecocardiograma e coleta de urina 24 horas. Posteriormente, os animais foram submetidos a jejum por 8 horas e à eutanásia. Foram coletados o plasma, para analises metabólicas, depósitos de gordura corporal para caracterizar a obesidade, coração e rins para análise do proteoma. Dados paramétricos estão apresentados em média e desvio padrão e não-paramétricos apresentados em mediana e intervalo interquartil, analisados por ANOVA uma via seguido de teste post-hoc de Tukey ou Kruskall Wallis seguindo de teste de Dunn’s, respectivamente. Valores de p<0,05 foram considerados significantes. Resultados: O grupo HSF apresentou maior peso corporal e índice de adiposidade, níveis plasmáticos elevados de glicose, triglicérides, insulina e aumento da AUC (tolerância a glicose) e índice de resistência à insulina. A disfunção renal foi marcada por aumento da razão proteína/creatinina e diminuição da taxa de filtração glomerular e, no coração, foi verificada a presença de alterações estruturais e disfunção sistólica. O γOz preveniu a obesidade, elevação dos níveis de triglicérides, intolerância à glicose e resistência à insulina, assim como a disfunção em ambos os órgãos estudados. No tecido renal, o composto atuou sobre os processos biológicos de formação de espécies reativas de oxigênio, estresse oxidativo e proteínas da cadeia respiratória mitocondrial. No tecido cardíaco, o γOz atuou sobre os processos de síntese lipídica, fibrose, proteínas envolvidas na contratilidade cardíaca e também da cadeia respiratória mitocondrial. Conclusão: O O γOz preveniu alterações no proteoma renal e cardíaco relacionadas ao estresse oxidativo e função mitocondrial, mecanismos fundamentais para o desenvolvimento da doença.
Desvendando o modo de ação (MOA) cancerígeno do diuron [3-(3,4-Diclofenil)-1,1-Dimetiluréia] no urotélio de ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2013-05-27) Rocha, Mitscheli Sanches da; Cohen, Samuel Monroe [UNESP]; Camargo, João Lauro Viana de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Diuron, a substituted urea herbicide, was carcinogenic to the urinary bladder of Wistar rats at high dietary levels (2500 ppm), with a higher incidence in males. Its proposed carcinogenic mode of action (MOA) includes urothelial cytotoxicity and necrosis followed by sustained regenerative cell proliferation and urothelial hyperplasia. Urothelial cytotoxicity could be induced either by urinary solids or by chemical toxicity by diuron and/or metabolites excreted in the urine. To further elucidate the diuron urothelial MOA in male Wistar rats, this study aimed to: 1) evaluate the possible influence of urinary solids on the development of urothelial lesions; 2) determine the time course and sequence of bladder cytotoxic and proliferative changes; and 3) evaluate the toxicity of the main diuron metabolites on the urothelium. Rats treated with diuron and with NH4Cl for urinary acidification showed decreased urinary pH and reduced amounts of urinary crystals and precipitates. No difference in the incidence of urothelial lesions was found between diuron and diuron+NH4Cl treated groups indicating that cytotoxicity is not due to urinary solids. Rats treated with diuron during 1, 3 and 7 days showed urothelial cell swelling beginning on day 1. Swollen cells at day 7 presented degenerative changes such as distention of the cytoplasm, organelles and nuclei characteristic of cytolysis. By day 28, bladder urothelium in the diuron-treated group showed extensive necrosis, exfoliation and piling up of cells suggestive of hyperplasia. At 8 weeks, the bladder urothelium showed necrosis, exfoliation and significantly increased incidence of simple hyperplasia. The metabolite DCPU was found in rat urine at concentrations above the in vitro IC50 evaluated in a rat urothelial (MYP3) cell line. Moreover, DCPU induced more alterations of gene expression than the other metabolites in rat urothelial cells. Taken together, these results suggest the urothelial carcinogenic MOA of diuron is metabolism to cytotoxic metabolites, producing urothelial cell degeneration, necrosis and exfoliation, followed by sustained regenerative cell proliferation, leading to hyperplasia and eventually tumors after continued diuron exposure.
Mecanismos de citotoxicidade do diuron em células uroteliais – possível papel de lesão mitocondrial
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-30) Lima, Thania Rios Rossi; Pereira, Lílian Cristina [UNESP]; Camargo, João Lauro Viana de [UNESP]; Silva, Carla Adriene da [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Os efeitos tóxicos de substâncias químicas sobre o sistema urinário têm sido estudados ao longo dos últimos anos, sendo que o herbicida diuron e seus metabólitos mostraram potencial cancerígeno na bexiga urinária de ratos Wistar e citotoxicidade em células uroteliais derivadas de ratos e humanos. Assim, estudos que buscam elucidar os principais eventos envolvidos na toxicidade desses compostos são essenciais para compreender o possível mecanismo de ação sobre o urotélio. Este estudo teve como objetivo investigar os mecanismos de toxicidade urotelial exercida pelo diuron e metabólitos, abordando o possível papel da disfunção mitocondrial. Após exposição aos produtos químicos, as células uroteliais humanas 1T1 apresentaram alterações relacionadas à morte e proliferação, instabilidade do ciclo celular, estresse oxidativo, e dano mitocondrial. Além disso, por meio de investigação metabolômica em mitocôndrias uroteliais isoladas de ratos Wistar foram encontradas alterações em moléculas associadas à membrana e em moléculas envolvidas no metabolismo celular. Avaliados em conjunto, tais resultados indicam potencial ação nociva do diuron e seus metabólitos sobre a função mitocondrial, o que pode ser considerado o evento iniciador de um processo sequencial que desencadeia a citotoxicidade observada neste estudo e as alterações morfológicas observadas em estudos anteriores.
Efeitos dos miRNAs humanos miR-100-5p, miR-192-5p e miR-574-3p na expressão gênica e migração em célula imortalizada de nasofaringe
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-21) Müller-Coan, Bárbara Grasiele; Oliveira, Deilson Elgui de [UNESP]; Pinhal, Danillo [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Os cânceres são doenças neoplásicas malignas com etiopatogenia complexa. As células transformadas adquirem diversas propriedades que propiciam alterações em taxas de migração, invasão e sobrevivência celular, facilitando a formação de metástases. Esse processo sofre a influência de diversos fatores, inclusive de pequenos RNAs não codificantes, como os miRNAs. Os miRNAs são moléculas que canonicamente impedem a tradução de um mRNA, podendo agir em diversos processos celulares, incluindo na carcinogênese e progressão do câncer, como o carcinoma de nasofaringe (NPC). O NPC é um câncer agressivo com alta taxa de invasão em tecidos adjacentes, como base do crânio, seios nasais e órbitas, além de alta taxa de metástase para linfonodos regionais. Sua forma não queratinizante compreende mais de 95% dos casos e quando indiferenciado, é fortemente associado ao vírus de Epstein-Barr (EBV). Em um estudo recente de nosso grupo de pesquisa, observamos que células imortalizadas de nasofaringe (NP69) apresentavam um aumento na expressão do miR-100-5p, miR-192-5p e miR-574-3p quando transfectadas com a proteína latente de membrana 1 (Latent Membrane Protein 1 – LMP1) do EBV proveniente da variante viral M81, em comparação com a LMP1 proveniente da variante viral B95-8A. Portanto, este estudo visa elucidar os efeitos do miR-100-5p, miR-192-5p e miR-574-3p na viabilidade, proliferação e migração de células imortalizadas de nasofaringe (NP69) cultivadas in vitro. Para tanto, foi realizada a predição dos alvos dos respectivos miRNAs e o enriquecimento de vias para inferir quais vias de sinalização intracelular poderiam ser moduladas por cada miRNA, seguida pela análise dos transcritos dos genes alvos selecionados. Adicionalmente, células NP69 foram transfectadas com os miméticos do miR-100-5p, miR-192-5p ou miR-574-3p para a análise de comportamento celular. Quando essas foram transfectadas com o mimético do miR-192-5p, foi observada a redução de 40% no transcrito do gene RAB2A e redução de 43% na sua migração celular. No enriquecimento de vias, o miR-192-5p teve sua ação predita em vias como MAPK, GPCRs, TKR e TGF-β. Células NP69 transfectadas com os miméticos do miR-100-5p e miR-574-3p reduziram significativamente os transcritos dos genes FZD8 e STC1, respectivamente. Entretanto, nos ensaios funcionais realizados, não foram observadas alterações significativas no comportamento celular. Com esses resultados pode-se observar que o miR-192-5p possui uma função de supressor tumoral, elucidando parte de sua função em células de nasofaringe. Portanto, isso demonstra sua importância no contexto do NPC e a necessidade de seu estudo adicional.
O efeito de programa de mudança do estilo de vida na evolução da doença hepática gordurosa não-alcoólica do obeso: ações na lipotoxicidade, lipoapoptose e nos agentes lipotrópicos hepáticos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-23) Kano, Hugo Tadashi; Burini, Roberto Carlos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A Doença Hepática Gordurosa Não-Alcoólica (DHGNA) é uma doença silenciosa e está ligada a hábitos comportamentais (sedentarismo e inadequação alimentar), culminando em desfechos patológicos, principalmente as doenças cardiovasculares (DCVs). Concomitante, a disbiose intestinal resulta em endotoxemia metabólica, o que favorece a migração de metabólitos para o fígado. Agentes lipotrópicos como colina, betaína e N-óxido-trimetilamina (TMAO) são fatores importantes na regulação do acúmulo de gordura hepática. Diante disso, a mudança do estilo de vida apresenta-se como potencial estratégia não farmacológica na modulação da DHGNA. OBJETIVO: Avaliar o efeito do programa de mudança do estilo de vida (MEV) na evolução da DHGNA e nos agentes lipotrópicos. METODOLOGIA: 567 indivíduos (79,7% mulheres) clinicamente selecionados participaram de 10 semanas da MEV "Mexa-Se Pró-Saúde" (exercício físico combinado e aconselhamento nutricional). Foram divididos em ausência (n=397) e presença (n=170) de DHGNA de acordo com o Índice de Gordura Hepática (IGH>60). Antes e após a MEV, os participantes passaram por avaliações: socioeconômica, clínica, composição corporal, dietética, coleta sanguínea e análises laboratoriais. As análises estatísticas foram realizadas pelo software STATISTICA ver.12.0, adotando p<0,05. RESULTADOS: No momento inicial, 30,0% apresentaram DHGNA a qual foi acompanhada de menor aptidão cardiorrespiratória, maior adiposidade, estresse oxidativo-inflamatório, resistência insulínica, elevação das aminotransferases e de dislipidemia. Após a MEV, portadores de DHGNA apresentaram maiores reduções de triacilglicerol (TG) e aminotransferases. Dez semanas da MEV aumentaram a capacidade antioxidante e reduziram TMAO, a endotoxemia metabólica, o estresse oxidativo-inflamatório e a resistência insulínica, explicando 76,0% da variação ocorrida no IGH e, consequentemente, reduzindo 27,0% da DHGNA. CONCLUSÃO: a MEV "Mexa-Se Pró-Saúde" foi estratégia terapêutica não farmacológica na melhora da DHGNA, tendo na redução do TG e da LBP, aumento do glutationa total, e redução do TMAO e do risco de DCVs como principais indicadores desta resposta.
Agonistas dos receptores GLP-1 e GIP no tratamento da doença de Parkinson: revisão sistemática translacional e meta-análise de estudos clínicos e pré-clínicos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-28) Vaccari, Carolina; Camargo, João Lauro Viana de; Lopes, Luciane Cruz; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A Doença de Parkinson (DP) é uma condição neurodegenerativa progressiva e heterogênea na qual são observados, em intensidades variáveis, sinais motores e não motores. Apesar de por muito tempo ter sido essencialmente associada à morte de neurônios dopaminérgicos da substantia nigra pars compacta e diminuição dos níveis de dopamina estriatais, a DP têm se mostrado um distúrbio mais disseminado, com o envolvimento de outros neurotransmissores e interação entre o acúmulo de uma proteína anômala, a α-sinucleína, e o sistema imunológico. Independente do seu subtipo, ainda não há cura para a DP. Levodopa e medicamentos dopaminérgicos são utilizados como tratamento sintomático e não como agentes modificadores da doença. Recentemente, o Diabetes Mellitus tipo II (DMT2) tem sido associado a sintomas mais graves e progressão acelerada da DP, sugerindo possível ligação entre essas duas condições. Medicamentos utilizados ou mapeados como tratamento para a DMT2 têm sido sugeridos como possíveis tratamentos da DP, a exemplo dos agonistas dos receptores GLP-1 e GIP. Além de importantes para o controle glicêmico, a ativação desses receptores no sistema nervoso central pode estar envolvida em processos como autofagia, apoptose, função mitocondrial e neuroinflamação, bem como no aprendizado, memória e modulação da plasticidade sináptica. Este trabalho objetivou avaliar a força e o peso das evidências sobre a eficácia e segurança dos agonistas desses receptores no tratamento da DP por meio de revisão sistemática e metanálise de estudos clínicos e pré-clínicos. O risco de viés dos estudos clínicos foi avaliado pela ferramenta Cochrane (RoB 2) e dos estudos pré-clínicos por uma versão adaptada das ferramentas SYRCLE e CAMARADES. O sistema GRADE foi usado para classificar o nível de confiança dos estudos clínicos. Possíveis efeitos anti-parkinsonianos (avaliados pela melhora na atividade locomotora espontânea, coordenação, equilíbrio e força muscular) foram detectados em roedores por diferentes modelos de DP e diferentes esquemas de tratamento com os agonistas dos receptores GLP-1 e GIP. Já em ensaios clínicos (considerados baixo nível de evidência pelo GRADE), houve melhora significativa na atividade locomotora de pacientes com DP após tratamento com a exenatida, um dos agonistas do receptor GLP-1, após a retirada do medicamento por algumas semanas (washout). Tanto os estudos pré-clínicos como os clínicos aqui analisados apresentam limitações e vieses importantes, impedindo definir se os efeitos dos agonistas estudados são neuroprotetores ou sintomáticos. Estudos experimentais mais bem delineados e ensaios clínicos com maior período de washout são necessários para avançarmos no esclarecimento da ação desses potenciais fármacos para a DP.
Efeitos de miR-BARTs do vírus de Epstein-Barr na modulação de vias de sinalização intracelular em células derivadas de linfomas humanos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-01-31) Caetano, Brunno Felipe Ramos; Oliveira, Deilson Elgui de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O linfoma de Burkitt (LB) é um linfoma não-Hodgkin de células B altamente agressivo, associado à infecção pelo vírus de Epstein-Barr (EBV) em virtualmente todos os casos de forma endêmica da doença. O EBV foi o primeiro vírus humano descoberto codificar miRNAs no genoma viral, agrupados em duas regiões distintas: BamHI fragment H rightward open reading frame 1 (miR-BHRFs) e BamHI-A rightward transcripts (miR-BARTs). Embora extensivamente estudado no contexto de neoplasias epiteliais, o papel dos EBV miR-BARTs na patogênese de linfomas associados à infecção pelo EBV é essencialmente desconhecido. Este estudo tem como objetivo investigar os efeitos da supressão dos EBV miR-BART7 e miR-BART9 em células Akata EBV-positivas através da edição dirigida do genoma viral por CRISPR/Cas9. Ambos os mutantes gerados apresentaram baixos níveis de expressão dos miRNAs virais, demonstrando a eficácia da edição mediada por CRISPR/Cas9. A supressão de ambos miRNAs nos mutantes acarretou em uma diminuição drástica de viabilidade e proliferação celular, levando ao aumento da expressão de genes líticos virais. A análise do perfil protêomico dos mutantes demonstrou que a supressão do EBV miR-BART7 aumentou a expressão de diversas proteínas de ligação de RNA, enquanto a supressão de miR-BART9 levou ao aumento da expressão de DNA topoisomerases e proteínas associadas a via ubiquitina-proteossoma. Nossos resultados demonstram importantes papéis e mecanismos associados a expressão de EBV miR-BART7 e miR-BART9 no aumento da proliferação celular e manutenção da latência viral, sequestrando vias celulares importantes associadas ao ciclo lítico viral.
Avaliação de parâmetros imunológicos, inflamatórios e bioquímicos em pacientes HIV-positivos sob uso da terapia antirretroviral em associação com a própolis
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-04-07) Conte, Fernanda Lopes [UNESP]; Sforcin, José Maurício [UNESP]; Tasca, Karen Ingrid; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A infecção pelo HIV representa um grave problema de saúde pública no mundo, contando com milhões de pessoas infectadas e novos casos registrados anualmente. A terapia antirretroviral (TARV) mudou completamente o cenário da infecção, propiciando marcante redução da mortalidade das pessoas que vivem com HIV/aids (PVHA). Apesar dos benefícios da TARV, seu uso crônico pode resultar em efeitos adversos, como citotoxicidade e distúrbios metabólicos, processos que contribuem com a persistente ativação imune e estado inflamatório intenso que as PVHA apresentam. Assim, objetivamos investigar se a própolis, produto apícola que possui inúmeras propriedades terapêuticas, seria capaz de promover benefícios à saúde de PVHA assintomáticas em uso de TARV. Para isso, após randomização de 40 pacientes em caráter duplo-cego, os dois grupos (500 mg/dia própolis versus placebo) foram analisados em dois momentos: antes (M0) e 3 meses após (M1) a intervenção. Resultados da carga viral plasmática do HIV, contagem de células T CD4+/CD8+, hemograma e o perfil bioquímico/metabólico foram obtidos via prontuário eletrônico. A concentração de citocinas plasmáticas (TNF-α, IL-6, IL-10, IL-17, IL-2 e IL-4) e a proliferação de linfócitos foram determinadas por citometria de fluxo. A produção de citocinas (IFN-γ, IL-5, IL-17, IL-10, IL-18, IL-1β e IL-33) por células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foi determinada por método imunoenzimático (ELISA). A expressão dos genes T-bet, GATA-3, RORγt e Foxp3 foi avaliada pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR). Houve aumento na atividade de creatinofosfoquinase no grupo tratado com própolis, embora sem significância clínica. Observou-se, no mesmo grupo, aumento na concentração de magnésio, correlação positiva entre IL-10 (citocina anti-inflamatória) e contagem de células T CD4+, correlação negativa entre IL-10 e IFN-γ (citocina pró-inflamatória), além do aumento da expressão de Foxp3 e da proliferação de linfócitos T CD4+. Assim, os resultados indicam que o uso da própolis é seguro e pode ser uma alternativa para melhora da resposta imune e redução da inflamação nos pacientes assintomáticos, através da indução de células T reguladoras. Resultados adicionais obtidos com linhagem celular de monócitos humanos, em projeto paralelo, indicaram que a própolis exerce atividade antioxidante, potencialmente envolvida em sua ação anti-inflamatória e antialérgica, o que também pode ser uma contribuição para as PVHA. No entanto, mais estudos são necessários para confirmar esses achados e poder considerar a própolis uma intervenção efetiva para as PVHA, em especial àquelas com comorbidades ou falha terapêutica, não contempladas neste estudo.
Análise imuno-histoquímica do sistema nervoso entérico na Displasia neuronal intestinal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-02-10) Lourenção, Simone Terra; Rodrigues, Maria Aparecida Marchesan [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Introdução: A Displasia neuronal intestinal do tipo B (DNI-B) é uma entidade complexa que compromete o sistema nervoso entérico e se manifesta clinicamente com constipação intestinal grave na infância. O diagnóstico é estabelecido por análise histopatológica de biópsias do reto. Contudo, os critérios para o diagnóstico morfológico têm sido modificados, dificultando a interpretação diagnóstica. Objetivos: Analisar a aplicabilidade dos marcadores neurais imuno-histoquímicos Hu C/D e PTEN na investigação diagnóstica de pacientes com DNI-B. Pacientes e Métodos: Foram analisadas retrospectivamente amostras de cólon distal de 29 crianças com diagnóstico prévio de DNI-B e de 10 crianças do grupo controle. As amostras foram submetidas à análise histológica convencional pela hematoxilina & eosina (H&E) e à análise imuno-histoquímica pelo Hu C/D e PTEN. A análise quantitativa dos neurônios nos plexos nervosos submucosos e mioentéricos foi feita pelos métodos H&E e Hu C/D. O padrão de expressão imuno-histoquímica do PTEN foi analisado nos plexos nervosos submucosos, mioentéricos e nos filetes nervosos da camada muscular própria. Resultados: O método Hu C/D promoveu aumento significativo da identificação do número de neurônios nos plexos nervosos, quando comparado ao método H&E. Entretanto a análise quantitativa dos neurônios pelo Hu C/D não discriminou o grupo DNI-B do grupo controle. O grupo DNI-B apresentou ausência ou perda da expressão do PTEN nos plexos nervosos submucosos e mioentéricos e nos filetes nervosos da camada muscular própria, enquanto a expressão do PTEN foi positiva nas mesmas estruturas neurais do grupo controle. Conclusão: O método imuno-histoquímico do Hu C/D e o PTEN podem ser aplicados na análise histopatológica de amostras de intestino de pacientes em investigação diagnóstica para DNI-B.
Ação imunomoduladora da própolis vermelha sobre monólitos humanos e citotóxica sobre células de câncer prostático
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-01-11) Rodrigues, João Carlos Zamae [UNESP]; Sforcin, José Maurício [UNESP]; Oliveira, Deilson Elgui de [UNESP]; Santiago, Karina Basso [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A própolis vermelha do Brasil (BRP- brazilian red propolis) apresenta diversas atividades, tais como anti-inflamatória e citotóxica contra várias linhagens tumorais. Visto que há poucos trabalhos científicos realizados com a BRP, no presente trabalho investigamos os efeitos da mesma sobre monócitos humanos e sobre as linhagens tumorais prostáticas LNCaP e PC3. Para tanto, avaliamos a composição química da BRP e o efeito do seu extrato etanólico em comparação ao docetaxel sobre a expressão de marcadores celulares (TLR-2, TLR-4, HLA-DR, CD80) em monócitos humanos, e também sobre a viabilidade das linhagens tumorais LNCaP e PC3. Os compostos predominantes na BRP foram liquiritigenina, isoliquiritigenina, vestitol, neovestitol, medicarpina, 7-O-metilvestitol, gutiferona E e oblongifolina B. A BRP não afetou a viabilidade dos monócitos e manteve a expressão de TLR-2, TLR-4 e HLA-DR em todas as concentrações avaliadas, e estimulou a expressão de CD80 na concentração de 75 µg/mL. Quanto às linhagens tumorais, a PC3 mostrou-se mais resistente à ação da BRP do que a linhagem LNCaP em todas e as concentrações e momentos avaliados (24, 48 e 72h), mas às 48h e 72h para LNCAP nas concentrações de 50 a 100 μg/ml, e para PC-3 com 25 μg/ml, foram estatisticamente iguais àqueles gerados pelo tratamento com docetaxel. Tomados em conjunto, esses resultados fazem da BRP um composto promissor para novos estudos na área da terapia oncológica.
O bloqueio da autofagia induzida por drogas aumenta a imunogenicidade das células de câncer colorretal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-12-21) Zamame Ramirez, Jofer Andree; Kaneno, Ramon [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Dendritic cells (DCs) are a heterogenous population of immune cells responsible for antigens processing and presentation to T lymphocytes. They are divided in several subsets with distinct phenotypic and functional features and can be found in the blood, skin, mucosa, lymphoid and non-lymphoid tissues. DCs have a central role in the development of an immune response both against infectious and malignant diseases, and in the regulation of autoimmune and allergic responsiveness. Considering that DC function is usually impaired in cancer patients, several authors have proposed the development of DC-based antitumor therapeutic vaccines, aiming to restart the immune system and improve the CD4+ and CD8+ lymphocytes responsiveness against cancer. In the present review, we overviewed the DCs’ biology and their role in the antitumor immunity, the distinct protocols for preparing DC-based vaccines, and the clinical trials involving different types of cancer, evidencing the feasibility of this approach to personalize the anticancer therapy.

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