Efeito do cloridrato de verapamil, cloridrato de fluoxetina e paroxetina isolados e combinados com anfoteicina B contra Cryptococcus neoformans: estudo in vitro e in vivo

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dc.contributor.advisorScorzoni, Liliana
dc.contributor.authorPereira, Thaís Cristine [UNESP}
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2019-06-05T20:26:38Z
dc.date.available2019-06-05T20:26:38Z
dc.date.issued2019-05-27
dc.description.abstractCryptococcus neoformans são leveduras que acometem principalmente indivíduos imunocomprometidos, podendo causar a meningoencefalite dependendo do estado imunológico do hospedeiro. Os tratamentos convencionais têm enfrentado grandes desafios. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos antifúngicos dos fármacos cloridrato de verapamil (CV), cloridrato de fluoxetina (CF) e cloridrato de paroxetina (CP) isolados e combinados com anfotericina B (AmB) contra C. neoformans. Foram determinados os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) de acordo com a técnica de microdiluição em caldo proposta pelo Comitê Europeu de Teste de Susceptibilidade Antimicrobiana (EUCAST). Posteriormente, foi avaliada a atividade sinérgica dos fármacos combinados com AmB (EUCAST). Os efeitos das CIMs e das concentrações sinérgicas selecionadas foram avaliados em biofilmes, quantificando a biomassa por cristal violeta e sua viabilidade por contagem de colônias (UFC/mL). Além disso, foram analisados os efeitos dos mesmos na cápsula induzida desta levedura. Os ensaios in vivo foram realizados em Galleria mellonella avaliando a toxicidade dos compostos e a eficácia por análise de curva de sobrevivência e também o efeito em concentração de hemócitos. Os fármacos CV, CF e CP apresentaram valores de CIM de 113, 9,6 e 41µg/mL, respectivamente, e quando combinados com AmB resultaram em vinte concentrações sinérgicas, e uma concentração de cada combinação foi eleita para os ensaios seguintes. CV reduziu a biomassa do biofilme em até 38%, já CF e CP reduziram a biomassa de 22-30% quando isolados, e as combinações reduziram até 35 % da biomassa. O CP diminuiu a viabilidade do biofilme em até 25 % e quando o CF e CP foram combinados com AmB a redução chegou a 11 %. Além disso, todos os fármacos isolados e combinados reduziram o tamanho da cápsula da levedura, de 48-72 %. Em G. mellonella os fármacos não apresentaram toxicidade, eficácia ou ação na concentração de hemócitos. Assim, os fármacos avaliados apresentaram potencial antifúngico frente C. neoformans em todos os ensaios in vitro, podendo ser considerados novas alternativas para o tratamento destes patógenos.pt
dc.description.abstractCryptococcus neoformans are yeasts that mainly affect immunocompromised individuals, and may cause meningoencephalitis depending on the immunological state of the host. Conventional treatments have faced major challenges. Verapamil hydrochloride (CV), fluoxetine hydrochloride (CF) and paroxetine hydrochloride (CP) were isolated and combined with amphotericin B (AmB) against C. neoformans. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and minimum Fungicidal Concentration (CFM) values were determined according to the broth microdilution technique proposed by the European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). Subsequently, the synergistic activity of drugs combined with AmB (EUCAST) was evaluated. The effects of MICs and selected synergistic concentrations were evaluated in biofilms, quantifying the biomass by violet crystal and its viability by colony-forming unit analysis (CFU / mL). In addition, the effects of the same in the induced capsule of this yeast were evaluated. In vivo assays were performed in Galleria mellonella evaluating the toxicity of the compounds and the efficacy by analysis of survival curve and also the effect on hemocyte concentration. The CV, CF and CP drugs had MIC values of 113, 9.6 and 41 μg / mL, respectively, and when combined with AmB resulted in twenty synergistic concentrations, and a concentration of each combination was chosen for the following trials. CV reduced biofilm biomass to 38%, while CF and CP reduced biomass to 22-30% when isolated, and combinations reduced to 35% of biomass. CP decreased biofilm viability to 25% and when CF and CP were combined with AmB the reduction reached to 11%. In addition, all drugs isolated and combined reduced the size of the yeast capsule to 48-72%. In G. mellonella the drugs did not present toxicity, efficacy or action in the concentration of hemocytes. We suggest that the liposolubility of the compounds has been a limiting factor in vivo analyzes. Thus, the evaluated drugs presented antifungal potential against C. neoformans in all in vitro assays, and could be considered new alternatives for the treatment of these pathogens.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.identifier.aleph000917380
dc.identifier.capes33004145081P0
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/182233
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.subjectCryptococcus neoformanspt
dc.subjectAnfotericina Bpt
dc.subjectReposicionamento de fármacospt
dc.subjectSinergismopt
dc.subjectCryptococcus neoformansen
dc.subjectAmphotericin Ben
dc.subjectRepositioning of drugsen
dc.subjectSynergismen
dc.titleEfeito do cloridrato de verapamil, cloridrato de fluoxetina e paroxetina isolados e combinados com anfoteicina B contra Cryptococcus neoformans: estudo in vitro e in vivopt
dc.title.alternativeEffect of verapamil hydrochloride, fluoxetine hydrochloride and paroxetine alone and combined with amphotericin B against Cryptococcus neoformans: in vitro and in vivo studypt
dc.typeDissertação de mestrado
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Ciência e Tecnologia, São José dos Campospt
unesp.embargo6 meses após a data da defesapt
unesp.graduateProgramBiopatologia Bucal - ICTpt
unesp.knowledgeAreaMicrobiologia e imunologiapt
unesp.researchAreaDoenças infecciosas de interesse médico-odontológicopt

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