Uso de meio condicionado por células estromais mesenquimais uterinas durante o cultivo in vitro de embriões bovinos

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dc.contributor.advisorLandim-Alvarenga, Fernanda da Cruz [UNESP]
dc.contributor.authorCintra, Lais do Nascimento
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2018-11-21T10:58:00Z
dc.date.available2018-11-21T10:58:00Z
dc.date.issued2018-11-05
dc.description.abstractAs tecnologias de reprodução assistida, tais como a fertilização in vitro (FIV), transferência de embriões, transgenia e clonagem, ainda não tem o impacto comercial desejado devido a baixa produção embrionária. Apenas 30 a 40% dos blastocistos desenvolvidos são obtidos de oócitos após a MIV, fertilização e cultivo dos embriões, embora 80% dos oócitos maturados in vitro sejam fertilizados com sucesso. O soro fetal bovino (SFB) é o suplemento mais utilizado no cultivo de embriões in vitro, uma vez que melhora o desenvolvimento dos blastocistos. Apesar disso, sua presença está relacionada a alterações do metabolismo embrionário, perda de qualidade e indução de modificações na expressão de vários genes embrionários. Na tentativa de minimizar os efeitos deletérios do SFB, várias citocinas e fatores de crescimento têm sido acrescentados aos meios de cultivo embrionários in vitro, com a intenção de mimetizar as condições de cultivo in vivo. O presente experimento tem como objetivo avaliar e comparar os efeitos da adição do SFB e de meio condicionado por células mesenquimais estromais (MSCs) durante o cultivo embrionário. Os parâmetros analisados foram a viabilidade embrionária, apoptose e o perfil transcricional de genes relacionados à qualidade dos embriões. Não foi observado uma diferença (P≥0,05) na clivagem dos blastocistos, porém observou-se que a taxa de produção de embriões utilizando SFB no CIV foi maior (P≤0,05) quando comparada com MC, mas não diferiu (P≥0,05) do grupo produzido com BSA. A expressão relativa de mRNA para ELOVL6 foi maior no grupo MC, para CASP3 no grupo BSA, e para ACSL3 e VEGF no grupo SFB. Em conjunto, esses dados sugerem que o MC pode ser utilizado como uma alternativa ao SFB. Observamos um perfil de expressão gênica diferente, sugerindo que o MC inibiu o aumento da expressão relativa de mRNA para CASP3. Ademais, o MC favoreceu o número total de células, inibiu a porcentagem de células em apoptose e produziu um embrião de melhor qualidade.pt
dc.description.abstractEndometrial mesenchymal stromal cell (eMSCs) secretes bioactive molecules such as cytokines and growth factors which are released as soluble factors or through extracellular vesicles (EVs). Conditioned medium (CM) of the MSCs maintains the immunomodulation and regenerative potential properties of the cells that produced it. This study investigated the use of CM by eMSC plus BSA as alternative to FBS in embryo culture medium. The developmental ability and quality of bovine embryos were determined by assessing their cell number and gene expression. The percentage of embryos that underwent cleavage was similar (P>0.05) among the groups but blastocyst formation was higher (P<0.05) in FBS group. The total cell number was higher in CM group, but not statistically different from the others (P>0.05). The relative mRNA expression of ELOVL6 was higher in the CM group, CASP3 in the BSA group, ACSL3 and VEGF in the FBS group. Taken together, these data suggest that CM can be used as an alternative supplement to FBS. We observed a different gene expression profile, suggesting the CM inhibited an increase in the relative mRNA levels for CASP3. Moreover, the CM favored the total number cells, inhibited the percentage of cells in apoptosis and produces better quality embryo.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipId1636076
dc.identifier.aleph000910158
dc.identifier.capes33004064086P1
dc.identifier.lattes8456490300814833
dc.identifier.orcid0000-0002-2420-2550
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/158307
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.subjectRT-qPCRpt
dc.subjectsuplementaçãopt
dc.subjectmeio condicionadopt
dc.subjectcélula mesenquimal estromal endometrialpt
dc.subjectcultivo embrionáriopt
dc.subjectpt
dc.subjectsupplementationen
dc.subjectendometrial mesenchymal stromal cellen
dc.subjectconditioned mediumen
dc.subjecttotal cell numberen
dc.subjectembryo cultureen
dc.titleUso de meio condicionado por células estromais mesenquimais uterinas durante o cultivo in vitro de embriões bovinospt
dc.title.alternativeEffect of bovine endometrial mesenchymal cell conditioned medium on bovine embryo developmenten
dc.typeDissertação de mestrado
unesp.advisor.lattes8456490300814833
unesp.advisor.orcid0000-0002-2420-2550
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Botucatupt
unesp.embargo6 meses após a data da defesapt
unesp.graduateProgramBiotecnologia Animal - FMVZpt
unesp.knowledgeAreaReprodução animalpt
unesp.researchAreaBiotécnicas da Reproduçãopt

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