Detecção de parvovirus canino 2 com uso de nanopartículas de ouro

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dc.contributor.advisorAraújo Junior, João Pessoa [UNESP]
dc.contributor.authorYamakawa, Ana Carolina
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2022-07-06T15:50:52Z
dc.date.available2022-07-06T15:50:52Z
dc.date.issued2022-06-30
dc.description.abstractA parvovirose canina, causada pelo parvovírus canino 2 (PVC-2), acomete principalmente cães jovens não vacinados, causando um quadro gastrointestinal grave que pode levar a morte. O desenvolvimento de técnicas diagnóstico de baixo custo e rápidas são necessários, uma vez que somente o diagnóstico clínico não é conclusivo. Biossensores, como as nanopartículas de ouro, possuem características físico-químicas dinâmicas que possibilitam a transdução de diversos sinais (ópticos, plasmônicos, eletroquímicos), o que os torna eficientes sensores. O objetivo do presente projeto foi desenvolver e padronizar a identificação de PVC-2 a partir de amostras de fezes, utilizando nanopartículas de ouro modificadas com a deposição de anticorpos. Protocolo foi padronizado com uso de anticorpo monoclonal, policlonal e a combinação de ambos. Um total de 60 amostras de fezes positivas e 5 negativas na qPCR para PVC-2 foram submetidas a técnica após diluição na proporção 1:150 em PBS. Para todos os anticorpos houve um aumento significativo no comprimento de onda pela técnica de LSPR após a adição das amostras positivas. A combinação de ambos os anticorpos apresentou a maior diferença. Em contrapartida, ao adicionar as amostras negativas, não houve diferença estatisticamente significativa no comprimento de onda em comparação a etapa com os anticorpos. Amostras de adenovirus e circovirus suíno 2 também foram submetidas a técnica, não sendo detectado ligações inespecíficas. Ao comparar os valores de aumento do comprimento de onda, com os resultados de qPCR e hemaglutinação, não foi constatada uma correlação de valores, evidenciando que esse protocolo apresenta resultados qualitativos (positivo e negativo). Em conclusão, a detecção do PVC-2 foi confirmada pela análise de LSPR, sendo essa uma técnica que proporciona um diagnóstico sensível e específico de forma rápida (~ 40 min) e com baixo custo (~R$5/amostra). Os resultados aqui encontrados são promissores, podendo servir de base para futuros protocolos de point of care testing.pt
dc.description.abstractCanine parvovirosis, caused by canine parvovirus 2 (CPV-2), affects mostly young unvaccinated dogs, causing a severe gastrointestinal condition that can lead to death. The development of low-cost and rapid diagnostic techniques is necessary, since only clinical diagnosis is not conclusive. Biosensors, such as gold nanoparticles, have dynamic physicochemical characteristics that allow the transduction of various signals (optical, plasmonic, electrochemical), which makes them efficient sensors. The objective of the present project was to develop and standardize the identification of CPV-2 from stool samples using gold nanoparticles modified with antibody deposition. Protocol was standardized using monoclonal antibody, polyclonal antibody, and combination of both. A total of 60 stool samples positive and 5 negatives in qPCR for CPV-2 were submitted to the technique after dilution at a ratio of 1:150 in PBS. For all antibodies there was a significant increase in wavelength by the LSPR technique after the addition of the positive samples. The combination of both antibodies showed the greatest difference. In contrast, when adding the negative samples, there was no statistically significant difference in wavelength compared to the step with the antibodies. Samples of adenovirus and porcine circovirus 2 were also submitted to the technique, and no nonspecific binding was detected. When comparing the wavelength increase values, with the qPCR and hemagglutination results, no correlation of values was found, evidencing that this protocol presents qualitative results (positive and negative). In conclusion, the detection of CPV-2 was confirmed by LSPR analysis, and this is a technique that provides a sensitive and specific diagnosis quickly (40 min) and at low cost (~R$5/sample). The results found here are promising and may serve as a basis for future point of care testing protocols.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.description.sponsorshipIdFAPESP: (Processo: 2020/01629-3)
dc.description.sponsorshipIdCAPES: 001
dc.identifier.capes33004064022P3
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/235500
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.subjectBiossensorespt
dc.subjectNanopartículas de ouropt
dc.subjectPCV-2pt
dc.subjectParvovirus caninopt
dc.titleDetecção de parvovirus canino 2 com uso de nanopartículas de ouropt
dc.title.alternativeCanine parvovirus 2 detection with a gold nanoparticles protocol.en
dc.typeDissertação de mestrado
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Botucatupt
unesp.embargoOnlinept
unesp.examinationboard.typeBanca públicapt
unesp.graduateProgramMedicina Veterinária - FMVZpt
unesp.knowledgeAreaMedicina veterinária preventivapt
unesp.researchAreaMedicina Veterinária Preventiva e Saúde Única.pt

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