Teses - Odontologia - FOAR

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Influência de substâncias antimicrobianas sobre biofilmes simples e misto formados em resinas acrílicas para base e reembasamento de prótese
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-08-07) Tasso, Camilla Olga; Jorge, Janaina Habib [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de substâncias antimicrobianas sobre biofilmes simples e misto (C. albicans e S. mutans) formados em resinas acrílicas para base e reembasamento de prótese. Amostras das resinas foram confeccionadas (14 mm de diâmetro e 1,2 mm de espessura) e divididas em grupos: G1: imersão em solução de sabonete líquido desinfetante por 7, 14 e 28 dias (por 8 horas a temperatura ambiente, seguido de imersão em PBS (phosphate buffered saline) por mais 16 horas à 37 ºC, simulando a desinfecção noturna das próteses, sendo a solução desinfetante e o PBS trocados diariamente) antes da formação dos biofilmes simples e misto; G2: imersão em solução de hipoclorito de sódio 0,5% (controle positivo) por 7, 14 e 28 dias (por 8 horas a temperatura ambiente, seguido de imersão em PBS por mais 16 horas à 37 ºC, simulando a desinfecção noturna das próteses, sendo a solução desinfetante e o PBS trocados diariamente) antes da formação dos biofilmes simples e misto; G3: imersão em PBS (controle negativo) por 7, 14 e 28 dias (por 8 horas a temperatura ambiente, seguido da troca após 16 horas, à 37 ºC) antes da formação dos biofilmes simples e misto; G4: imersão em solução de sabonete líquido desinfetante por 8 horas depois da formação dos biofilmes simples e misto; G5: imersão em solução de solução de hipoclorito de sódio 0,5% (controle positivo) por 8 horas depois da formação dos biofilmes simples e misto; G6: imersão em PBS (controle negativo) por 8 horas a temperatura ambiente, após a formação dos biofilmes simples e misto; G7: tratamento superficial com solução de extrato de Cryptocarya moschatta depois da formação do biofilme, por 2 horas; G8: tratamento com solução de Nistatina a 100.000 IU/mL (controle positivo) depois da formação do biofilme, por 2 horas; G9: tratamento com solução de antibiótico (controle positivo) depois da formação do biofilme, por 2 horas; G10: tratamento PBS (controle negativo) depois da formação do biofilme, por 2 horas. Biofilmes simples e mistos de C. albicans e S. mutans foram formados sobre as amostras em todos os grupos. Para a análise da atividade antimicrobiana, os seguintes testes foram realizados: contagem de colônias, avaliação do metabolismo celular, análise quantitativa e qualitativa por microscopia de varredura confocal a laser. Os ensaios foram realizados em triplicata (3 amostras de cada resina e para cada teste), em 3 ocasiões diferentes (n=9). Os dados foram submetidos ao método estatístico mais adequado para cada teste e o nível de significância de 5% foi selecionado (α=0.05). Os resultados mostraram quea solução de sabonete Lifebuoy® foi capaz de reduzir o número de unidades formadoras de colônias e o metabolismo celular dos biofilmes simples e misto de C. albicans, S. mutans formados sobre amostras de ambas as resinas, comprovando seu efeito antimicrobiano, tanto para o protocolo de prevenção como também para o protocolo de desinfecção. Em relação à eficácia do extrato de C. moschata, houve redução do número de unidades formadoras de colônias e do metabolismo celular, para biofilmes simples e misto formados sobre as amostras de resinas para base e reembasamento de próteses. Concluiu-se que a solução de Lifebuoy® e o tratamento com extrato de C. moschata foram eficazes na redução dos biofilmes simples e misto de C. albicans e S. mutans formados sobre amostras de resina acrílica para base e reembasador de próteses.
Avaliação do comportamento mecânico e distribuição de forças em implantes dentários híbridos e curtos comparando diferentes designs: análise por ensaios mecânicos e elementos finitos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-26) Casalle, Nicole [UNESP]; Vaz, Luis Geraldo [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo do presente estudo foi analisar o comportamento mecânico e a distribuição de forças de implantes dentários híbridos, de diferentes geometrias, instalados em região de maxila posterior, pelo método de elementos finitos (MEF). Os modelos virtuais e físicos foram incialmente gerados a partir do software de CAD Rhinoceros 7® da McNell, utilizando como base a estrutura óssea de um segmento posterior de maxila, desenvolvida por meio do protocolo BioCAD. Para o MEF foi confeccionada malha 3D tetragonal de primeira ordem. Implantes de duas diferentes conexões protéticas, hexágono externo (HE) e grand Morse (GM), foram simulados na análise computacional e submetidos a cargas oblíquas de 100N com angulação de 30º em relação ao longo eixo do implante. Os campos de deslocamentos e tensões foram comparados entre os implantes. O experimento de correlação digital de imagem (DIC) foi realizado nos modelos físicos para validar a análise computacional. Para a DIC, foram impressos corpos de prova em poliamida por meio da tecnologia de manufatura aditiva SLS (Selective Laser Sintering), pela impressora HIQ (Sinterstation), onde os implantes foram instalados e posteriormente carregados com carga oblíqua de 24N. Em outra análise de elementos finitos, implantes GM modificados na região apical, nomeados de acordo com os cortes realizados no ápice: C- controle (sem corte apical); B- bi-partido; T- tri-partido; Q- quadri-partido, foram submetidos a ação de um movimento de rotação em relação ao eixo longitudinal dos implantes. Uma análise qualitativa foi feita entre os dois experimentos, confirmando a mesma tendência de deslocamentos entre os modelos físicos e virtuais para os dois implantes analisados. Análises de deslocamentos e distribuição de tensões foram obtidas para os implantes GM e HE. Comparativamente, houve maior deslocamento na plataforma do modelo HE, obtendo valores de 1,339E-1 (0,1399 mm), em comparação com o modelo GM, onde para as mesmas condições obteve-se um deslocamento de 2,080E-2 (0,0208 mm). O modelo HE apresentou uma tensão de von Mises menos distribuída e de maior intensidade de 148,4 MPa, enquanto o modelo GM apresentou tensão de von Mises de 99,03 MPa, juntamente com maior dissipação de tensões. Os valores de Tensão Principal Máxima foram maiores para o modelo GM do que para o HE. Os implantes GM modificados também foram comparados em relação aos deslocamentos totais e as tensões de von Mises. Quanto ao deslocamento, o implante C, apresentou maior tendência a deslocar que os demais, 14,36% maior. Os implantes com os cortes, tiveram deslocamentos parecidos, sendo o menor valor evidenciado no implante T. Em relação a tensão de von Mises, o implante T apresentou o maior valor entre os implantes, já no implante C, foi possível notar diferença no padrão de comportamento mecânico em relação aos implantes com os cortes. Os resultados deste estudo mostraram que foi possível encontrar padrões semelhantes no comportamento mecânico dos implantes analisados entre o MEF e a DIC. Porém, um maior controle de ambas as técnicas deve ser tomado para que possa haver uma validação entre os métodos. Pode-se concluir que as diferentes geometrias influenciaram o comportamento mecânico dos implantes analisados.
Caracterização físico-química da superfície de vitrocerâmicas à base de metassilicato de lítio e dissilicato de lítio submetidas ao protocolo de solubilidade química
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-28) Vallerini, Bruna de Freitas; Pinelli, Lígia Antunes Pereira [UNESP]; Zanotto, Edgar Dutra; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Ao longo dos anos o avanço tecnológico dos materiais vitrocerâmicos (VCs) tem desafiado os fabricantes a aprimorar as propriedades mecânicas e químicas destes materiais, além da tentativa de reduzir o tempo clínico necessário para a produção de próteses dentárias. O objetivo deste estudo foi realizar uma caracterização físico-química da superfície de VCs a base de metassilicato de lítio (ML) e dissilicato de lítio (DL) submetidas ao protocolo de solubilidade química (SQ) com o intuito de avaliar se os materiais seguem os limites estipulados pela norma ISO 6872 e como este protocolo pode afetar a superfícies destas VCs. As VCs foram divididas em sete grupos, sendo dois compostos por materiais experimentais desenvolvidos pelo Laboratório de Materiais Vítreos, que tiveram como fase majoritária o ML: ML experimental 1 (VCE1) e ML experimental 2 (VCE2); e cinco compostos por marcas comerciais à base de DL: Celtra Duo (CD), IPS e.max CAD (IEC), Straumann n!ce (SN), CEREC Tessera (TS) e VITA Suprinity (VS). Oito espécimes (14 mm x 14 mm x 1,5 mm) foram feitos para cada grupo. Para análise de SQ, os espécimes foram imersos em solução de ácido acético a 4% (16h, 80 ± 3ºC, ISO 6872) e os valores obtidos foram determinados pela diferença de massa antes e após imersão na solução divida pela área total. A rugosidade superficial foi realizada por análise de Microscopia de Força Atômica, e a caracterização química por Espectroscopia de Fotoelétrons de Raios-X, ambas as análises foram realizadas antes e após a SQ. Uma análise de lixiviação iônica da solução remanescente após SQ foi realizada por Espectrometria de Massa de Plasma Acoplado Indutivamente de Alta Resolução. As análises estatísticas foram realizadas pelo teste de Kruskal-Wallis com pós-teste de Dunn para SQ, ANOVA a dois fatores com pós-teste de Tukey para rugosidade da superfície, ANOVA a três fatores com pós-teste de Tukey para análise química, adotando-se α = 0,05, e estatística descritiva para os resultados das soluções lixiviadas. Os resultados da SQ mostraram que todos os grupos apresentaram valores dentro do estipulado pela norma (≤ 100 µg/cm2). Não houve diferença estatisticamente significativa em relação aos valores de rugosidade para as VCs antes e após imersão em ácido acético a 4%, exceto para o grupo IEC que apresentou rugosidade aumentada (p<0,001). Após o protocolo de SQ houve mudança nas porcentagens atômicas dos principais elementos constituintes das VCs (Si e Li) para todos os grupos, com uma maior lixiviação do elemento Li que para o elemento Si. Conclui-se que todos os grupos avaliados apresentam valores de SQ dentro dos limites estipulados pela Norma ISO 6872.
Efeito de extratos, frações e moléculas isoladas de Casearia sylvestris contra biofilme cariogênico de Streptococcus mutans
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-03) Ribeiro, Sabrina Marcela; Klein, Marlise Inêz [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este estudo in vitro avaliou o efeito de extratos, frações e moléculas isoladas de Casearia sylvestris (de amostras coletadas em três cidades, contemplando os Biomas Atlântico e Cerrado; variedades sylvestris, lingua e intermediária) no controle do biofilme cariogênico de Streptococcus mutans. Primeiro, foram avaliados os efeitos antimicrobiano (cultura planctônica) e antibiofilme (biofilmes iniciais e pré-formados) contra S. mutans em modelos de exposição prolongada (24 horas) via viabilidade da população bacteriana (unidades formadoras de colônias-UFC/mL). Em segundo lugar, os tratamentos eficazes em biofilmes (iniciais e pré-formados) foram usados para preparar soluções (com e sem fluoreto de sódio e testados quanto ao efeito tópico (breve exposição) em biofilmes de S. mutans cultivados em discos de hidroxiapatita revestidos com saliva. Terceiro, os tratamentos selecionados (com efeito em biofilmes iniciais e pré-formados) foram avaliados através da curva de inibição do crescimento de S. mutans associada à expressão gênica e análises de microscopia eletrônica de varredura (MEV). A caracterização química das frações foi realizada via cromatografia. Nenhum extrato bruto mostrou atividade antimicrobiana. Nos biofilmes iniciais, as frações de acetato de etila (AcOEt) e etanólica (EtOH) de Brasília (BRA/DF; 250 µg/mL) reduziram em média 8- e 6-logs vs. veículo, respectivamente, e as frações preparadas por extração em fase sólida (EFS-C18) de Presidente Venceslau/SP (Água/EtOH 60:40 e Água/EtOH 40:60; 500 µg/mL), reduziram em média 6- e 8-logs vs. veículo, respectivamente. Entre as moléculas (Flavonoide 4, Caseargrewiina F ou CsF, Casearinas X e J), apenas CsF (125 µg/mL), reduziu a contagem de células viáveis de biofilmes pré-formados (5 logs vs. veículo). No entanto, para efeito tópico, nenhuma solução afetou os componentes do biofilme (população viável, biomassa, componentes da matriz extracelular e organização estrutural). O perfil de sobrevivência durante o ensaio de inibição do crescimento diferiu entre CsF e AcOEt_BRA/DF. Enquanto ambos mataram a bactéria após uma hora, CsF produziu uma recuperação média constante de células sobreviventes ( 3,5 logs) até 24h (ou seja, bacteriostático). No entanto, a fração AcOEt_BRA/DF causou morte celular pronunciada e progressiva sem células recuperadas em 24h (ou seja, bactericida). CsF e AcOEt_BRA/DF causaram danos irreversíveis às células de S. mutans (imagens MEV) e influenciaram a expressão de genes de virulência de S. mutans. AcOEt_BRA/DF reduziu a expressão de eno (0,6 vezes) e induziu nox1 (8 vezes); CsF induziu gtfB ( 5 vezes). As análises cromatográficas indicam que a fração AcOEt de Brasília/DF contém uma casearina ainda não identificada. Assim, um efeito contra biofilmes de S. mutans ocorreu apenas em um modelo de exposição prolongada devido à capacidade bacteriostática e/ou bactericida de uma fração e uma molécula de C. sylvestris.
Avaliação do extrato amazônico de pracaxi (Pentaclethra macroloba) puro e associado com hidróxido de cálcio como medicação intracanal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-16) Ramos, Maria Luiza Gioster; Vaz, Luis Geraldo [UNESP]; Bezerra, Roberto Messias; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A Pentaclethra macroloba, da família Fabaceae, comumente conhecida como "pracaxi" é uma árvore nativa da Amazônia, e o seu extrato tem sido estudado quanto a suas inúmeras propriedades, tais como: anti-inflamatórias, cicatrizantes e antimicrobianas. O presente estudo tem como objetivo avaliar uma inovadora medicação intracanal contendo o extrato de pracaxi (Pentachletra macroloba), puro ou associado ao hidróxido de cálcio. Manuscrito 1: 3 grupos foram determinados: ULT (hidróxido de cálcio com metilcelulose); HCP (hidróxido de cálcio associado com extrato de Pentaclethra macroloba); e EPM (extrato de Pentaclethra macroloba puro). Para avaliar sua atividade antimicrobiana, foi realizado o teste de macrodiluição e avaliação intratubular em Microscopia Confocal de Varredura a Laser (CLSM) com cepas padrão de Enterococcus faecalis. Para a análise dos resultados obtidos o teste de Shapiro-Wilk foi aplicado com o objetivo de averiguar se houve distribuição normal da amostra, e dependendo do tipo de distribuição os testes ANOVA e Tukey ou Kruskal Wallis e Dunn, com nível de significância de 5%. O extrato em associação com hidróxido de cálcio apresentou menor Concentração Bactericida Mínima. No CLSM todas as medicações testadas foram efetivas contra E. faecalis (P >0,05). Manuscrito 2: 3 grupos foram determinados: extrato etanólico de Pentaclethra macroloba puro, associação de hidróxido de cálcio pa com o extrato e hidróxido de cálcio pa puro. Para avaliar a citotoxidade foi escolhida cultura de células de fibroblastos L929 e osteoblasts Saos-2, onde foi observado a viabilidade/metabolismo celular por ensaio de MTT, proliferação celular com alamar blue e para se analisar se a medicação é bioativa, os testes de fosfatase alcalina (ALP) e vermelho de alizarina (ARS) foram utilizados. Para a análise dos resultados obtidos o teste ANOVA One-way /teste de Dunnett e ANOVA Two-way/ Tukey foram utilizados. Em Osteoblastos Saos-2, concentrações menores das medicações foram menos citotóxicas no ensaio de MTT. Houve proliferação celular no dia 3 e 5. E observou-se presença de nódulos de mineralização nos 3 grupos. Em Fibroblastos L929 as menores concentrações não se mostraram citotóxicas no ensaio de MTT, e houve proliferação celular nos dias 3, 5 e 7. Conclusões: A nova droga intracanal à base de extrato de P. macroloba tem efeito antimicrobiano contra E. Faecalis e é pouco citotóxica às células testadas, além de serem bioativas.
Identificação de Candida spp. de usuários de próteses removíveis por Reação em Cadeia de Polimerase quantitativa (qPCR) combinada com a análise das curvas de dissociação
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-08) Vega Chacón, Yuliana Del Pilar; Mima, Ewerton Garcia de Oliveira [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Atualmente, o diagnóstico da candidíase oral (CO) associada ao uso de próteses dentária é realizado clinicamente, observando-se o grau de inflamação do palato. Os avanços da tecnologia molecular têm permitido realizar a identificação fúngica de maneira mais precisa por reação em cadeia de polimerase (PCR). A PCR combinada com a curva de dissociação têm sido reportadas para identificação fúngica de forma rápida e econômica. Entretanto, a utilização desse método para identificação fúngica em usuários de próteses não é conhecida. O objetivo deste estudo foi validar o método de qPCR com análise da curva de dissociação para a identificação de espécies de Candida isoladas de pacientes usuários de próteses. Para isso, foram utilizadas cepas padrão de C. albicans (Ca), C. glabrata (Cg), C. tropicalis (Ct), C. dubliniensis (Cd), C. krusei (Ck), C. guilliermondii (Cgl) e C. parapsilosis (Cp) e isolados clínicos de Ca (n = 13), Cg (n = 12) e Ct (n = 10) de pacientes com estomatite protética (EP). As cepas de Candida spp. foram cultivadas em CHROMAgar Candida, submetidas a extração de DNA e qPCR com análise das curvas de dissociação. Posteriormente, amostras clínicas foram coletadas de pacientes usuários de próteses com e sem EP (n = 20 cada) e submetidas aos mesmos procedimentos. Quando a identificação das amostras das próteses dos pacientes, não foi possível, essas foram cultivadas e submetidas à extração de DNA e qPCR com curva de dissociação. Os resultados foram analisados descritivamente, a concordância entre CHROMAgar Candida e qPCR-curva de dissociação foi avaliada pelo índice de kappa de Cohen (k) e os valores de sensibilidade, especificidade, preditivos positivos e negativos foram calculados para o CHROMAgar Candida. Entre os resultados, foi realizada a identificação por qPCR-curva de dissociação de 11, 10 e 4 isolados clínicos de Ca, Cg e Ct, verificando-se sensibilidade de 100% para Ca e Ct e especificidade de 100% para Cg. Com relação às amostras dos usuários de próteses, a identificação presuntiva demonstrou que em 35% de cada grupo a espécie isolada foi Ca. A identificação por qPCR-curva de dissociação foi possível em 11 amostras dos usuários de próteses de ambos os grupos (9 Ca e 2 Ct) sem cultivo prévio. Porém, não foi possível identificar as amostras de 5 e 4 pacientes com identificação presuntiva de Ca e Cg, além dos pacientes que apresentaram colonização mista. Com isso, as colônias desses pacientes foram cultivadas e identificadas por qPCR-curva de dissociação, sendo que 22 amostras foram identificadas como Ca, Cg, Ct e Cd. Entretanto, não foi possível identificar 7 amostras (1 uma espécie e 6 espécies mistas). Com isso, a concordância entre os dois métodos substancial (k=0,826), a sensibilidade de identificação por CHROMAgar Candida foi de 100% para Ca e a especificidade foi de 97% e 100% para Cg e Ct, respectivamente. Conclui-se que, com a metodologia utilizada, a qPCR-curva de dissociação permitiu a identificação de Ca e Ct de pacientes colonizados com uma espécie de Candida sem cultivo prévio, ao passo que, para identificação de Cg, Cd e espécies mistas, este método permitiu a identificação somente após o cultivo.
Reabilitações totais inferiores suportadas por implantes com superfície hidrofílica e diferentes macroestruturas: ensaio clínico, controlado, randomizado, cego e multicêntrico
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-30) Marcantonio, Ana Carolina Monachini; Zandim-Barcelos, Daniela Leal [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo do estudo foi comparar o desempenho de implantes com superfície hidrofílica e plataforma Cone Morse com diferentes macroestruturas, cilíndricos com roscas triangulares perfurantes (CT) e híbridos cônicos com roscas triangulares condensantes e perfurantes (TST), para carga imediata de mandíbula edêntula. Este foi um estudo multicêntrico randomizado, controlado, cego e de boca dividida. Pacientes receberam dois implantes CT e dois TST na região entre forames. A estabilidade primária dos implantes foi determinada pela inserção de torque e análise de frequência de ressonância. Os implantes foram carregados com próteses totais dentro de 24 horas após a inserção. Parâmetros clínicos, incluindo índice de placa visível, índice de sangramento marginal; sangramento à sondagem; profundidade de sondagem e nível clínico de inserção foram avaliados em 2, 6, 12 e 24 meses após o carregamento do implante. A estabilidade secundária dos implantes foi avaliada em 2, 6, 12 e 24 meses após o carregamento do implante por análise de frequência de ressonância. As alterações do nível ósseo marginal (variável primária) foram mensuradas pela comparação de radiografias padronizadas obtidas no dia da colocação do implante e 6, 12 e 24 meses depois. A sobrevida do implante foi avaliada em até 24 meses. Dos 30 pacientes tratados, 28 pacientes completaram o acompanhamento de dois anos. Os implantes TST demonstraram maior estabilidade primária do que os implantes CT (p = 0,016). Um implante CT foi perdido antes do seguimento de dois meses. As taxas de sobrevivência foram de 99,16% para implantes CT e 100% para implantes TST. Não foram encontradas diferenças significativas entre os dois tipos de implante para alterações do nível ósseo marginal e parâmetros clínicos. Apesar da maior estabilidade primária dos implantes TST, a macroestrutura dos implantes não teve influência na taxa de sobrevivência, estabilidade secundária, alterações no nível ósseo marginal e nos parâmetros clínicos avaliados. Ambos os implantes podem ser e usados com previsibilidade para carga imediata de mandíbula edêntula.
Avaliação tridimensional da precisão de moldagens convencionais e digitais utilizando diferentes escâneres
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-04) Oliveira, Lucas Portela; Mollo Júnior, Francisco de Assis [UNESP]; Arioli Filho, João Neudenir [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A moldagem sobre implante possui papel fundamental para o tratamento reabilitador. No entanto, os materiais de moldagem utilizados para a realização da moldagem possuem limitações, tais como a produção de subprodutos após o processo de presa final, gerando distorções no modelo final e forças deletérias no implante. A odontologia digital surgiu com o intuito de proporcionar tanto moldagens mais precisas, quanto eliminar etapas clínicas, porém possui limitações. Em determinadas situações clínicas, como em reabilitações anteriores, por exemplo, a estabilidade é essencial para favorecimento da estética. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a precisão entre os fluxos digital e convencional de moldagens para próteses implantossuportadas em regiões anteriores. Um modelo mestre de uma maxila parcialmente dentada com 3 análogos (dois implantes com micro pilares e um sem componente), foi escaneado utilizando o escâner de bancada Ceramill map400 (controle, n=10). Através deste modelo mestre foram realizadas moldagens convencionais (n=10) e digitais, utilizando 3 escâneres intraorais (3Shape, Sirona e Medit, n=10). Todas as 40 imagens STL obtidas (convencional e dos escâneres intraorais) foram impressas por impressora 3D FlashForge Hunter. Para a obtenção dos dados numéricos, todos os 40 modelos manufaturados aditivamente foram escaneados pelo escâner de bancada para posterior sobreposição das imagens com o modelo mestre (controle) (1). Além disso, também foram realizadas sobreposições das imagens escaneadas anteriormente ao processo de manufatura aditiva com as imagens do modelo mestre (2), pois através do processo de sobreposição, pode-se determinar as alterações dimensionais obtidas. O resultado das diferentes formas de obtenção das imagens, na precisão inicial ou final, foi identificado por Análise de Variância (ANOVA) com dois fatores. Para a obtenção na precisão antes-após manufatura aditiva, aplicou-se ANOVA para medidas repetidas. Ambos os testes realizaram comparações múltiplas com o teste de Bonferroni (α=5%). Com relação aos resultados antes da impressão dos modelos, os escâneres 3SHAPE e SIRONA apresentaram melhor precisão do que o método convencional (p=0,46 e p=0,003, respectivamente), porém o escâner MEDIT não difere de nenhum dos outros métodos de obtenção avaliados (digital ou convencional sobre implantes, p>0,05). Adicionalmente, quando a moldagem é realizada a partir de um implante ou componente, os diferentes métodos de moldagem não diferem entre si. Para a análise após a manufatura aditiva, os valores de precisão são similares entre si, e independente do método, foi observado que antes da manufatura aditiva, a precisão é similar entre as moldagens sobre implante e componente (p>0,05). Já após a impressão, a precisão é melhor para as moldagens realizadas sobre componente (p<0,001). Desta forma, tanto o fluxo convencional quanto o digital foram precisos antes da manufatura aditiva pela impressora FlashForge Hunter, não tendo diferença entre os escâneres intraorais. Além disso, apesar de não ter diferença na precisão entre moldagens realizadas na presença ou ausência de componentes sobre o modelo mestre, quando analisados após manufatura aditiva, os componentes mostraram-se mais precisos que diretamente sobre o implante.
Efeitos do hipoclorito de cálcio na interface de adesão entre a dentina radicular e o sistema de cimentação de pinos de fibra
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-05) Bravo, Giovanna Righetti; Kuga, Milton Carlos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este estudo avaliou os efeitos do hipoclorito de sódio (SH) e do hipoclorito de cálcio (CH) quando submetidos à irrigação ultrassônica passiva (PUI) ou à irrigação convencional (IC) sobre a persistência de resíduos, a resistência de união e o padrão de fratura de um sistema de cimentação resinoso à dentina intrarradicular do espaço preparado para pino de fibra. Também foi avaliado o efeito dessas substâncias na remoção de 0,01% do azul de metileno, após PDT, com um sistema de cimentação resinoso e um cimento de ionômero de vidro. Duzentos e dez incisivos bovinos foram tratados endodonticamente e preparados para pino de fibra. Dentre esses, 120 dentes foram aleatoriamente divididos em 6 grupos de acordo com o método de solução e irrigação: DW-CI, SH-ED-CI, SH-CI, SH-PUI, CH-CI e CH-PUI. Após os protocolos de irrigação a persistência de resíduos sobre a dentina intrarradicular do espaço preparado para pino foi avaliada por imagens SEM. Foi realizada então a cimentação dos pinos de fibra utilizando um cimento resinoso convencional dual (RelyX Arc) e um sistema adesivo de 2 passos. O teste de push-out foi realizado para a avaliação da resistência de união e o padrão de fratura também foi avaliado. Outros noventa dentes bovinos foram submetidos ao PDT utilizando 0,01% azul de metileno e irradiados com laser de diodo (660 nm). Três protocolos de irrigação foram testados para remover o azul de metileno por incidência de resíduos sobre dentina (n=10): água destilada (DW), hipoclorito de sódio de 2,5% (SH) e hipoclorito de cálcio de 6% (CH). Os outros setenta dentes foram usados para avaliar a resistência de união à dentina intrarradicular de acordo com o protocolo de irrigação e o sistema de cimentação utilizado (Cimento RelyX U200 (RU) e cimento ionômero de vidro GC Gold Label 1 (GC) em 6 grupos (n=10): DW-RU, SH-RU, CH-RU, DW-GC, SH-GC e CH-GC. Resultados: Os dados não paramétricos e paramétricos foram analisados a um nível de significância de 5%. SH-ED-CI, SH-PUI e CH-PUI apresentaram menor incidência de resíduos para o terço cervical e SH-ED-CI para o terço médio (p < 0,05 >). Os valores de resistência de união foram mais elevados após a irrigação com DW-CI para todos os terços (p < 0,05). Independentemente do terço radicular a DW apresentou menor incidência de resíduos do que a SH (p < 0,05), mas semelhante ao CH (p > 0,05). Por outro lado, a SH apresentou resultados semelhantes ao CH (p > 0,05). Em relação à resistência de união à dentina, CH-RU e CH-GC apresentaram valores mais elevados em relação aos outros grupos (p < 0,05), mas semelhantes entre si (p > 0,05). Não foram observadas diferenças entre os demais grupos (p > 0,05). O padrão de fratura coesiva foi predominante. Conclusões: tanto o hipoclorito de sódio quanto o hipoclorito de cálcio a 2,5% impactam negativamente a interface de adesão e apresentam maior incidência de resíduos sobre a dentina radicular no espaço preparado para pino. Contudo, o hipoclorito de cálcio a 6% na remoção de 0,01% azul de metileno após PDT favorece a resistência de união de RU e GC à dentina intraradicular do espaço preparo para pino de fibra.
Root canal irrigation: physicochemical and biological properties of calcium hypochlorite and effects of the GentleWave system in endodontic treatment
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-05) Coaguila Llerena, Eric Hernán; Faria, Gisele [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Parte 1: Na publicação 1, o objetivo foi avaliar as propriedades físico-químicas e a penetrabilidade nos túbulos dentinários do hipoclorito de cálcio [Ca(OCl)2] a 2,5% associado aos surfactantes cloreto de benzalcônio (BAK), cetrimida (CTR), tween 80 (T80) e triton X-100 (TR100), na concentração micelar crítica (CMC), em comparação ao hipoclorito de sódio (NaOCl) a 2,5%. Foram avaliados tensão superficial, pH, conteúdo de cloro livre (FAC), íons cálcio livres (Ca2+) e a penetrabilidade nos túbulos dentinários. A adição de surfactantes reduziu a tensão superficial das soluções (p<0,05), e não alterou o pH e o FAC (p>0,05). Os surfactantes, principalmente BAK, aumentaram a disponibilidade de Ca2+ em Ca(OCl)2 (p<0,05). Ca(OCl)2 apresentou menor penetrabilidade nos túbulos dentinários que NaOCl (p<0,05) e a adição de surfactantes àquele não aumentou a sua penetrabilidade nos túbulos dentinários. Na publicação 2, o objetivo foi avaliar o mecanismo de citotoxicidade da solução de Ca(OCl)2 em fibroblastos L929 e o seu efeito na biologia de osteoblastos-like (Saos-2), em comparação com NaOCl. Fibroblastos L929, expostos a Ca(OCl)2 e NaOCl, foram avaliados quanto ao metabolismo celular, integridade dos lisossomos, tipo de morte, alterações no citoesqueleto e na ultraestrutura. O efeito das soluções sobre a atividade da fosfatase alcalina (ALP) foi determinada em Saos-2. O Ca(OCl)2 promoveu maior viabilidade celular e menor porcentagem de apoptose e necrose do que o NaOCl (p<0,05). Ca(OCl)2 e NaOCl diminuíram o metabolismo celular e a integridade dos lisossomos, induziram ruptura de microtúbulos e filamentos de actina, promoveram alterações do retículo endoplasmático rugoso e nas cristas mitocondriais, e não induziram a atividade da ALP. Concluiu-se que, embora a adição de surfactantes ao Ca(OCl)2 não aumentou a sua penetrabilidade nos túbulos dentinários, eles promoveram menor tensão superficial, sem alterações nos valores de pH e FAC, além de maior disponibilidade de Ca2+ na solução. Adicionalmente, NaOCl e Ca(OCl)2 apresentaram o mesmo mecanismo de citotoxicidade e não induziram atividade de ALP, porém, Ca(OCl)2 foi menos citotóxico que NaOCl. Parte 2: Na publicação 3, o objetivo foi descrever, por meio de revisão de literatura, os efeitos do sistema GentleWave (GW) no tratamento endodôntico. GW mostrou resultados in vitro semelhantes ou melhores que a irrigação utrassônica passiva (PUI) sob diferentes aspectos. Clinicamente, embora GW tenha mostrado resultados promissores, ainda são necessários mais estudos. Na publicação 4, o objetivo foi avaliar a eficácia de remoção de biofilme multiespécie do GW e PUI. Molares inferiores humanos com configuração tipo II de Vertucci na raiz mesial foram inoculados com placa dental e incubados. As raízes mesiais foram instrumentadas até 20.06 (V-Taper) para o grupo GW, e até 35.04 (Vortex Blue) para o grupo PUI. Raspas de dentina foram obtidas pré e pós-tratamento para a análise por reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) e por sequenciamento do gene rRNA 16S (Next Generation Sequencing - NGS). Não houve diferença na remoção de biofilme entre GW e PUI (p>0,05). Pode-se concluir que mais pesquisas, principalmente clínicas, são necessárias para estabelecer se GW apresenta vantagens sobre outros métodos de irrigação.
Avaliação dos tecidos periodontais de ratos submetidos a força mecânica ortodôntica em condições de saúde ou doença sistêmica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-25) Marcantonio, Camila Chierici; Cirelli, Joni Augusto [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este estudo teve como objetivo avaliar in vivo os efeitos de doenças sistêmicas (obesidade e osteoporose) na remodelação dos tecidos periodontais de molares de ratos sob força mecânica ortodôntica. No primeiro estudo, foi avaliado o efeito da obesidade no perfil proteômico do ligamento periodontal de ratos, sob força mecânica ortodôntica. Foram utilizados 10 ratos divididos em dois grupos (n=5): grupo M (movimentação ortodôntica), e grupo OM (indução de obesidade e movimentação ortodôntica). A obesidade foi induzida por meio de ração hiperlipídica durante todo o período experimental. Após 15 dias de M, os animais de todos os grupos foram eutanasiados e suas hemimaxilas foram processadas para realização de microdissecção a laser (LCM) do ligamento periodontal (LP) dos primeiros molares e imuno-histoquímica (IHC). Os tecidos microdissecados foram analisados por cromatografia líquida e espectrometria de massas de alta resolução (LC- MS/MS). Os dados estão disponíveis via ProteomeXchange (código XD033647). Dentre as 109 proteínas abundantemente expressas, 49 estavam em OM (p≤0,05, Test-t). A análise de Gene Ontology (GO) apresentou proteínas enriquecidas associadas a categoria de componente celular (p≤0,05, teste exato de Fisher seguido por Benjamini) no grupo OM. Dentre estas, proteínas que possuem associação com obesidade: Vinculina, Catepsina D e Osteopontina (Spp1) foram selecionadas e avaliadas por IHC, que confirmou a presença e localização delas. Os resultados demonstraram diferenças no perfil proteômico do LP submetido à M e OM, permitindo uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos nos processos de remodelação tecidual em situação de obesidade submetidos ao tratamento ortodôntico. No segundo estudo, foi avaliado o efeito do anticorpo monoclonal anti-esclerostina (Scl-Ab) nos tecidos periodontais de ratas ovariectomizadas sob movimentação ortodôntica. Foram utilizadas 48 ratas distribuídas em 6 grupos (n=8): C (controle – sem intervenção), OM (movimentação ortodôntica), OVX (ovariectomia), OVX+OM, OVX+Scl-Ab (ovariectomia e administração de Scl-Ab) e OVX+Scl-Ab+OM. Os animais foram submetidos a OVX ou cirurgia Sham. Após 30 dias (baseline), deu-se início à administração de Scl-Ab, mantida por todo o período experimental. 7 dias após o baseline, iniciou-se a OM e, após 15 dias, todos os animais foram eutanasiados (dia 21). A massa corporal dos animais foi registrada semanalmente e os úteros coletados na eutanásia. Foram avaliados volume (BV/TV) e densidade óssea (BMD) na tíbia e fêmur por microtomografia computadorizada (Micro-CT) previamente às cirurgias e no baseline. A movimentação dentária, BV/TV e BMD nas maxilas foi avaliada por Micro-CT. Foi avaliada a expressão gênica de Spp1, Il1b, TNFa e Rankl nos tecidos gengivais. A análise de colágeno birrefringente no LP foi realizada em três regiões da raiz distal em todos os grupos, nos lados de pressão e tensão. Os dados foram analisados estatisticamente por Shapiro-Wilk, seguido de ANOVA/Tukey (p≤0.05). Todos os animais submetidos à OVX apresentaram menor BMD e BV/TV na tíbia e fêmur 30 dias após a cirurgia, maior massa corporal e menor peso de útero. A expressão gênica de Tnfa foi significativamente maior no grupo OVX+OM em comparação com os grupos OVX e OVX+Scl- Ab+OM. No lado de pressão do LP, os animais dos grupos OM, OVX+OM e OVX+OM+Scl- Ab apresentaram uma redução no conteúdo de colágeno em comparação com os animais dos grupos não submetidos à movimentação dentária ortodôntica. Nas maxilas, os grupos OM e OVX+Scl-Ab+OM demonstraram maior tendência de movimento dentário comparados ao grupo OVX+OM. O grupo OVX+Scl-Ab+OM apresentou maior BMD e BV/TV que o grupo OVX+OM e menor que o grupo OVX+Scl-Ab. A administração de Scl-Ab reduziu os efeitos negativos da osteoporose nos tecidos periodontais submetidos à movimentação ortodôntica.
Avaliação da incorporação de Geraniol em nanoemulsões e micelas: caracterização, atividade antibiofilme e citotoxicidade
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-06-20) Pontes, Cristiano Silva; Spolidorio, Denise Madalena Palomari [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo deste trabalho foi sintetizar e caracterizar nanoemulsões lipídicas (NEs) e micelas (NMs) incorporadas com o composto natural geraniol (GE), e avaliar a atividade antimicrobiana e citotóxica in vitro destas nanopartículas sobre biofilmes de microrganismos periodontopatogênicos e células NOk-SI. A NE foi constituída de 10% de fase oleosa (colesterol), 10% de surfactantes [fosfatidilcolina de soja e polioxietileno 20-cetil éter (Brij 58®), 1:2] e 80% fase aquosa (tampão fosfato). A NM foi formulada com 5% de surfactantes (fosfatidilcolina de soja e Brij58®), 90 a 95% de fase aquosa e 1% de geraniol. A incorporação do geraniol foi realizada por sonicação e as características físico-químicas e estabilidade das nanopartículas foram analisadas após sua formulação e no período de 6 meses a 1 ano. Avaliou-se a atividade antimicrobiana das nanoemulsões contra cepas planctônicas de Candida albicans (ATCC 90028), Streptococcus mutans (ATCC 25175), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (JP2), e a atividade antibiofilme de C. albicans, S. mutans, e biofilme misto de C. albicans e Staphylococcus aureus (ATCC 25923) sobre corpos de prova de Titânio. Os resultados foram submetidos à ANOVA 1-fator com correção de Welch e pós teste de Games-Howell, com nível de significância de 5%. O geraniol incorporado à nanoemulsão (GE-NE) e à micela (GE-NM) apresentaram tamanhos médios de 230 nm e 93 nm, PDI de 0,155 e 0,151, respectivamente, com boa estabilidade e homogeneidade após 6 meses a 1 ano de formulação. As concentrações acima de 300 μg/mL do GE e GE-NE foram citotóxicas e a GE-NM reduziu 4 vezes o efeito citotóxico do GE comparado ao composto puro. Os resultados indicaram uma atividade antimicrobiana das nanoemulsões contra as cepas testadas, mas apenas biofilmes de C. albicans sofreram redução significativa (6,3 Log 10) nas concentrações não-citotóxicas da GE-NE (< 300 μg/mL) e GE-NM (< 600 μg/mL).
Propriedades biológicas, físicas e químicas de uma medicação intracanal biocerâmica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-20) Lopes, Camila Soares; Cerri, Paulo Sérgio [UNESP]; Tanomaru, Juliane Maria Guerreiro [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo do estudo foi avaliar a biocompatibilidade e o potencial bioativo de uma medicação intracanal biocerâmica, Bio-C Temp (BIO; Angelus, Londrina, Brasil), em comparação a medicação à base de hidróxido de cálcio, Calen (CAL; SS White, Rio de Janeiro, Brasil) implantados nos tecidos do subcutâneo de 60 ratos, durante 7, 15 30 e 60 dias. Análise de propriedades físico-químicas, incluindo radiopacidade, pH, solubilidade, escoamento, alteração volumétrica (%) e capacidade de preenchimento foram conduzidas com as medicações BIO e o CAL. Publicação 1: A espessura das cápsulas, o número de células inflamatórias (CI), células imunopositivas à interleucina-6 (IL-6) e IL-10 e conteúdo de colágeno foram mensurados. Os níveis séricos da transaminase glutâmico-oxalacética (TGO) e transaminase glutâmico-pirúvica (TGP), foram avaliados 7 e 60 dias. Os dados foram submetidos à ANOVA e teste Tukey (p≤0,05). Os níveis séricos de TGO e TGP foram semelhantes (p > 0,05). BIO e CAL apresentaram maior espessura das cápsulas aos 30 dias reduzindo aos 60 dias. Em todos os períodos, o número de CI e células IL-6-imunopositivas foram maiores em CAL. O número de células IL-10-imunopositivas aumentou significantemente no decorrer do tempo em BIO E CAL. Aos 60 dias, BIO mostrou maior conteúdo de colágeno em comparação ao CAL (p < 0,0001). Os danos teciduais inicialmente provocados por BIO foram suprimidos mais rapidamente em comparação àqueles provocados por CAL, favorecendo a reparação do tecido conjuntivo. Publicação 2: Neste estudo, os níveis séricos de cálcio (Ca+2), fósforo (P-) e fosfatase alcalina (ALP), a imunoexpressão de osteocalcina (OCN) e osteopontina (OPN), o número de fibroblastos e a deposição de calcita amorfa foram avaliados. Os dados foram submetidos à ANOVA/Tukey (p≤0,05). Aos 7 e 15 dias, os níveis de Ca+2 foram maiores nas amostras do CAL enquanto que o nível de P- foi maior aos 7 dias em BIO e CAL. O nível de ALP foi alto em BIO e CAL até os 30 dias, reduzindo significantemente aos 60 dias. Em BIO e CAL, um aumento significante no número de fibroblastos, na imunoexpressão de IL-10, OCN e OPN foram detectados ao longo do tempo. BIO e CAL apresentaram estruturas von Kossa-positivas e birrefringentes enquanto que, no grupo controle (tubos vazios), estas estruturas não foram observadas. BIO, assim como CAL, causou aumento dos níveis séricos de ALP, enzima essencial na biomineralização, e induziu células do tecido subcutâneo a sintetizar OCN e OPN, além da deposição de calcita, indicando que BIO tem potencial bioativo. Publicação 3: No presente estudo, o pH, radiopacidade, escoamento, solubilidade (após 7 e 14 dias imersão em agua destilada e PBS), alteração volumétrica e capacidade de preenchimento (por micro-CT) foram avaliadas. Foram aplicados os testes estatísticos ANOVA/Tukey e teste T (p≤0,05). CAL mostrou maior pH, escoamento, alteração volumétrica e solubilidade após 14 dias de imersão em água destilada e 7 e 14 dias em PBS. BIO apresentou maior radiopacidade e capacidade de preenchimento (p<0,05). Apesar de a medicação biocerâmica apresentar menor perda volumétrica e capacidade de preenchimento satisfatória, evitando vazios e falhas, o Bio-C Temp mostrou menor alcalinidade do meio em comparação ao Calen.
Utilização de membrana de látex natural sobre o reparo de áreas doadoras para enxerto gengival livre
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-04-01) Spin, José Rodolfo; Marcantonio, Rosemary Adriana Chierici [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo desse projeto, controlado, duplo cego e randomizados foi de avaliar o reparo de feridas no palato duro provenientes da remoção de enxerto gengival livre utilizando membranas de látex natural, com e sem incorporação de compostos (cetoprofeno e própolis). Este projeto foi dividido em dois artigos: Artigo 1: teve como objetivo avaliar o efeito da membrana de látex natural sobre a ferida de palato provenientes da captação de enxerto gengival livre e o artigo 2 teve como objetivo avaliar o efeito dessa membrana com a associação de compostos (Cetoprofeno e própolis) sobre o reparo de ferida em palato resultante da remoção de enxerto gengival livre. Para a realização dos dois estudos foram selecionados 24 pacientes (estudo 1) e 44 pacientes (estudo 2) que apresentavam indicação para realização de enxerto gengival livre. Os pacientes foram submetidos ao procedimento cirúrgico para remoção do enxerto gengival livre da área de palato duro. Após a remoção do enxerto os pacientes foram randomicamente alocados. No primeiro estudo, em dois grupos (Controle e Látex) e em três grupos no segundo estudo (controle, látex + Cetoprofeno e látex + própolis). Em ambos os trabalhos foram feitas tomadas fotográficas padronizadas das regiões das feridas nos períodos de baseline, 3, 7, 15 e 30 dias. Um examinador cego aos grupos experimentais e calibrado realizou as avaliações clínicas, levando se em consideração os parâmetros: área da ferida; área de superfície epitelizada por meio da utilização de água oxigenada aplicada na região; sangramento (somente no primeiro trabalho); avaliação do autorrelato de dor por meio da aplicação de uma escala de VAS (Escala analógica visual) e avaliação de ficha sobre ingestão de medicamentos pós-operatórios (Somente no segundo trabalho). Os resultados obtidos mostraram que a utilização da membrana de látex, em ambos os estudos, não trouxe prejuízos à cicatrização quando comparadas aos grupos controles além diminuir a dor relatada pelos pacientes.
Influência do alendronato e ranelato de estrôncio na reparação de alvéolos pós extração e na progressão/tratamento da periodontite: estudo em ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-04-01) Gonçalves, Fernanda Castanheira; Marcantonio, Rosemary Adriana Chierici [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo foi avaliar o efeito preventivo da administração do Ranelato de Estrôncio sobre o processo de osteonecrose induzida por bisfosfonatos, e o efeito do alendronato e estrôncio na modulação da doença periodontal experimental. Na avaliação da influência do estrôncio na osteonecrose induzida por bisfosfonato, foram utilizados 60 ratos, divididos em 6 grupos: Grupo CTR –administração de soro fisiológico diária por 60 dias, posteriormente foi realizada cirurgia para extração dos primeiros molares inferiores, e continuação da aplicação de soro por mais 30 dias; Grupo ALN – administração alendronato de sódio (1 mg/kg/dia) durante 60 dias antes da extração dentária e a mesma foi continuada por 30 dias; Grupo ALN/S –administração de alendronato por 60 dias e feita a extração, continuação de soro por 30 dias; Grupo ALN/STR –alendronato durante 60 dias e posteriormente foi interrompida a sua administração por 30 dias previamente a extração. Em seguida a extração, foi administrado o ranelato de estrôncio por 30 dias (625 mg/kg/dia); Grupo ALN/S60– alendronato foi administrado por 60 dias e sua administração interrompida por 30 dias até o momento da extração. Posteriormente, foi administrado soro por mais 30 dias após a cirurgia.; Grupo ALN/STR 60 – administração alendronato por 60 dias, após esse período a administração do alendronato foi interrompida e iniciado o ranelato de estrôncio, por 30 dias. Após esse período os dentes foram extraídos e a aplicação do ranelato de estrôncio foi continuada por mais 30 dias. Foram realizadas análises microtomográfica, análises histológica/estereométrica e histológicas. Os resultados mostraram uma melhora nos efeitos colaterais da osteonecrose por bisfosfonatos nos grupos em que foram administrados estrôncio, mesmo na presença de tecido necrótico ocorreu a formação da matriz de tecido ósseo na porção basal dos alvéolos. Para avaliar a progressão da doença periodontal foram utilizados 21 ratos, divididos em 3 grupos: Grupo CTR – administração de soro fisiológico subcutânea diariamente; Grupo ALD – administração de alendronato de sódio (1 mg/kg/dia); Grupo STR – administração de ranelato de estrôncio (625 mg/kg/dia. Em todos os grupos os medicamentos foram administrados durante 60 dias, sendo que após 45 dias de início da administração foram colocadas ligaduras nos segundos molares superiores. Para avaliar a influência desses medicamentos no tratamento da doença periodontal foram utilizados 42 animais que foram divididos em 3 grupos, cada grupo com 2 sub-grupos cada (7 animais em cada sub-grupo; n=14 ligaduras/sub-grupo) de acordo com o seguinte protocolo: 1) Controle (CTR), indução da doença periodontal e administração de soro fisiológico 1 mg/kg/dia até o momento da eutanásia. 2) Alendronato (ALD), indução da DP por 15 dias, juntamente com a administração diária bisfosfonato 1 mg/kg/dia até o momento da eutanásia. 3) Estrôncio (STR), indução da DP e administração diária de Ranelato de Estrôncio aplicado 625 mg/kg/dia por gavagem até o momento da eutanásia. Cada grupo teve 2 sub-grupos onde o subgrupo RR recebeu tratamento periodontal após a indução da DP e o subgrupo NR os animais não receberam nenhum tipo de tratamento. Os animais foram eutanasiados nos períodos de 7, 15 e 30 dias. Em ambos os estudos foram realizadas análises microtomográfica, histológica, histométrica, estereométrica. Foi observado que os medicamentos não impediram o aparecimento da doença periodontal. O ALN foi capaz de minimizar a perda óssea alveolar, porém nas regiões interproximais tinham pequenas áreas de tecido necrótico, já os animais tratados com STR continham uma maior área de tecido de reparação, matriz de tecido conjuntivo, fibras colágenas organizadas e matriz osteóide. O ALD e o STR influenciaram na modulação da periodontite, ALD diminuindo a perda óssea alveolar e o STR aumentando o tecido de reparação nas áreas em que ocorreu reabsorção óssea.
Reação tecidual e bioatividade de materiais endodônticos biocerâmicos reparadores em subcutâneo de ratos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-29) Queiroz, Marcela Borsatto; Cerri, Paulo Sérgio [UNESP]; Tanomaru Filho, Mário [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo foi avaliar a reação tecidual e o potencial bioativo causado por materiais biocerâmicos implantados no tecido conjuntivo do subcutâneo de ratos adultos. Para isso, tubos de polietileno preenchidos com um dos materiais ou vazios (grupo controle, GC) foram implantados no subcutâneo de ratos (n=8/grupo por período). Após 7, 15, 30 e 60 dias, os implantes e os tecidos circundantes foram removidos e processados para inclusão em parafina para análise dos seguintes parâmetros: número de células inflamatórias (CI) e de fibroblastos (Fb), espessura das cápsulas (EC), quantidade de colágeno birrefringente, imuno-histoquímica para detecção de interleucina-6 (IL-6) e osteocalcina (OCN), a reação de von Kossa e análise de cortes não corados sob luz polarizada. Os dados foram submetidos ao ANOVA two-way seguido pelo teste de Tukey (p<0,05). Publicação 1: Avaliar a biocompatibilidade e o potencial bioativo de um material reparador experimental à base de silicato tricálcico com 30% de tungstato de cálcio (TCS + CaWO4) em comparação ao MTA Repair HP (MTA HP; Angelus, Brasil) e ao Bio-C Repair (Bio-C; Angelus, Brasil). Em todos os períodos, não houve diferenças significantes no número de CI, número de células IL-6-imunopositivas e no conteúdo de colágeno entre os materiais biocerâmicos (p>0,05). De 7 para 60 dias, ocorreu uma redução significante no número de CI, na imunoexpressão de IL-6 e na EC, acompanhada por um aumento significante no número de Fb e na quantidade de colágeno. Estruturas positivas ao von Kossa e birrefringentes, além de células imunopositivas à OCN foram observadas nas cápsulas ao redor de todos os materiais, exceto no GC. O TCS + CaWO4 é biocompatível e apresentou potencial bioativo. Publicação 2: Comparar a resposta tecidual dos materiais à base de silicato tricálcico Bio-C Pulpo (Angelus, Brasil), Biodentine (Septodont, França) e MTA branco (WMTA; Angelus, Brasil). Aos 7 e 15 dias a EC dos materiais Bio-C Pulpo e Biodentine foram iguais e não houve diferença significativa (p>0,05), sendo maiores em comparação ao WMTA (p<0,05); as cápsulas ao redor de todos os materiais foram significantemente mais espessas em comparação ao GC (p<0,05). Aos 30 e 60 dias, a EC ao redor dos materiais não apresentou diferenças significantes em comparação à do GC. Apesar do maior número de CI observado aos 7 dias nas cápsulas do Biodentine em comparação ao Bio-C Pulpo e WMTA espécimes (p<0,05), diferenças significantes não foram observadas entre os grupos contendo os materiais (p>0,05), nos períodos de 15 e 30 e 60 dias. De 7 para 60 dias, ocorreu uma redução significante na EC, no número de CI e de células IL-6-imunopositivas que foi acompanhada por um aumento significante no número de Fb e na quantidade de colágeno nas cápsulas de todos os grupos. As cápsulas ao redor de todos os materiais apresentaram estruturas von Kossa-positivas e birrefringentes, e células OCN-imunopositivas, enquanto que estas estruturas bem como células imunopositivas à OCN não foram encontradas no GC. O Bio-C Pulpo, semelhantemente ao Biodentine e WMTA, é biocompatível e permite a reparação do tecido conjuntivo, além de induzir a imunoexpressão de osteocalcina e a deposição de calcita sugerindo que este material deve apresentar um potencial bioativo. Assim, o Bio-C Pulpo pode ser uma alternativa de material reparador em diferentes procedimentos clínicos de pulpotomia, capeamento pulpar direto e indireto, em dentes decídíduos e dentes permanentes jovens.
Avaliação da biocompatibilidade, potencial bioativo, alteração volumétrica e interface dentina/material de novos cimentos reparadores e obturadores biocerâmicos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-22) Inada, Rafaela Nanami Handa; Tanomaru Filho, Mário [UNESP]; Cerri, Paulo Sérgio [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Materiais biocerâmicos são desenvolvidos para utilização como cimentos reparadores e para obturação de canais radiculares. Publicação 1: Avaliação da biocompatibilidade, potencial bioativo, porosidade e interface dentina/material dos cimentos: Bio-C Sealer (BIOC), Sealer Plus BC (SP), TotalFill BC Sealer (TF) em comparação com AH Plus (AHP). A resposta tecidual no subcutâneo de ratos foi avaliada por meio da implantação de tubos de dentina humana com cimentos e tubos vazios (grupo controle-GC) por 7, 15, 30 e 60 dias. Cortes histológicos foram corados com hematoxilina e eosina (HE) para análise de espessura de cápsula e densidade numérica de células inflamatórias/mm2(CIs). Interleucina-6 (IL-6) e osteocalcina (OCN) também foram avaliadas. von Kossa foi realizado para identificação de depósitos de cálcio. Porosidade e interface dentina/material foram analisados por meio de micro tomografia computadorizada (Micro-CT). Os dados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey, com significância de 5%. Em todos os grupos, a espessura de cápsula diminuiu com o decorrer do tempo. AHP exibiu mais CIs e células IL-6-imunopositivas comparado com outros cimentos (P <0,05). Aos 7 dias, o BIOC mostrou mais CIs e células IL-6-imunopositivas em comparação com SP e TF (P <0,05). Aos 15 e 30 dias, nenhuma diferença significativa para CIs e células IL-6-imunopositivas foram detectadas entre SP e TF (P> 0,05). BIOC, SP, TF e GC não apresentaram diferenças significativas (P> 0,05) após 60 dias. Estruturas von Kossa-positivas e birrefringentes foram observadas ao redor de todos os materiais. BIOC, SP e TF exibiram células OCN- imunopositivas em todos os períodos. BIOC apresentou maior porosidade que SP e TF (P<0,05). BIOC, SP, TF e AHP apresentaram similar porcentagem de espaços vazios na interface (P>0,05). Conclui-se que BIOC, SP, TF são biocompatíveis e apresentam bioatividade, e vazios de interface similar ao AHP. Publicação 2: Avaliação da biocompatibilidade, potencial bioativo, porosidade e interface dentina/material de materiais biocerâmicos reparadores: Bio-C Repair (BIOC-R) e MTA repair HP (MTAHP) em comparação ao cimento à base de óxido de zinco e eugenol (IRM). A avaliação da biocompatibilidade e potencial bioativo foram realizadas por meio da implantação de tubos de dentina preenchidos com os materiais e tubos vazios como grupo controle (GC). Após 7, 15, 30 e 60 dias, os tubos e tecidos adjacentes foram removidos para mensuração da capsula, contagem das células inflamatórias/mm2(CIs), detecção das células IL-6 e OCN imunopositivas e von Kossa para identificação de depósitos de cálcio. Análise de micro-CT foi realizada para avaliação da porosidade e interface. Os dados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey, com significância de 5%. As cápsulas de IRM apresentaram maior espessura, CIs e células IL-6- imunopositivas, aos 7 e 15 dias (P<0,05). As cápsulas de BIOC-R exibiram maior espessura e CIs do que MTAHP em 7 dias (P<0,05) e mais células IL-6 -imunopositivas em 7 e 15 dias (P<0,05). Aos 30 e 60 dias, não foram observadas diferenças significativas no número de CIs, espessura da cápsula e número de células IL-6- imunopositivas entre os grupos (P>0,05). Células OCN-imunopositivas, von Kossa positivo e estruturas birrefringentes foram observadas apenas em BIOC-R e MTAHP. BIOC-R e IRM apresentaram baixa porosidade e vazios (P>0,05). O MTAHP apresentou maior porosidade e vazios na interface (P<0,05). Conclui-se que BIOC-R, MTAHP e IRM são materiais biocompatíveis, porém apenas BIOC-R e MTAHP possuem potencial bioativo. MTAHP apresentou maior porosidade e presença de vazios na interface.
Análise de estágios de mineralização dentária de indivíduos brasileiros e elaboração de tabela para estimativa de idade
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-29) Kuhnen, Barbara; Serra, Monica da Costa [UNESP]; Fernandes, Clemente Maia da Silva; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Este estudo realizou o levantamento de diferentes métodos utilizados para a estimativa da idade e analisou os estágios de mineralização dentária de indivíduos brasileiros a partir de exames imaginológicos. Através das bases de dados, verificou se a confiabilidade de análise de estágios de mineralização dentária para a estimativa da idade e que alguns dos métodos utilizados para esta finalidade não foram testados em indivíduos brasileiros, como no caso, o método de Moorrees et al. (Publicação 1). Assim, analisamos radiografias panorâmicas digitais de 1.100 indivíduos brasileiros vivos, de ambos os sexos, com idades entre 2 e 25 anos, nascidos entre 1990 e 2018 (Publicação 2) e 493 (248 homens e 243 mulheres), com idades entre 15 e 25 anos (Publicação 3). As imagens radiográficas de todos os dentes (Publicação 2) e apenas dos terceiros molares (Publicação 3) foram avaliadas de acordo com o grau de desenvolvimento da coroa e da raiz, e classificadas de acordo com os estágios propostos por Moorrees et al. adaptado. Somente os caninos superiores e inferiores apresentaram diferenças significativas entre os sexos (p<0,05), sendo as idades médias maiores em homens e os resultados foram apresentados em tabelas (Publicação 2). A faixa etária entre 18 e 25 anos apresentou associação entre o estágio de mineralização dos dentes 28 e 38 e o sexo. A maioria dos indivíduos apresentou os dentes 28 e 38 com formação radicular completa (ápice fechado) e nas idades entre 15 e 17, esse estágio ocorreu na minoria (Publicação 3). Esses dados poderão auxiliar a justiça e a sociedade.
Análise de medidas lineares e volumétricas de seios paranasais de indivíduos brasileiros com vistas à identificação humana
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-31) Barros, Franciéllen De [UNESP]; Serra, Monica da Costa [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Foram avaliadas as possibilidades de identificação humana por meio da análise dos seios paranasais, e na estimativa do sexo, idade e ancestralidade (Publicação 1), de imagens 2D e 3D dos seios frontais e o papel do ortodontista nesse contexto (Publicação 2). Através do software DDS-Pro®, foram realizadas mensurações volumétricas dos seios maxilar (Publicação 3) e esfenoidal (Publicação 5), e mensurações lineares dos seios maxilar (Publicação 4), esfenoidal (Publicação 6) e frontal (Publicação 7), utilizando imagens de tomografia computadorizada de feixe cônico de indivíduos brasileiros, verificando a existência de diferenças entre os lados, e a correlação das medidas com sexo, idade, cor da pele e estado nutricional. A análise dos seios é uma ferramenta útil para a identificação e estimativa de sexo, idade e ancestralidade (1). A análise 2D e 3D dos seios frontais são de grande valia para a identificação (2). Não houve diferenças entre os lados, os sexos e o IMC, mas houve diferenças entre as idades e na cor de pele (3). Houve diferenças entre os lados, os sexos, as idades, todavia não houve diferenças entre a cor de pele e o IMC (4). Não houve diferenças entre os lados, os sexos e a cor de pele, mas houve diferenças entre as idades e IMC (5). Não houve diferença entre os lados, a cor de pele e o IMC, entretanto houve diferenças entre os sexos, as idades (6). Houve diferenças entre os lados, os sexos, as idades, contudo não houve diferenças entre cor de pele e IMC (7).
TGF-beta derivado de células neoplásicas como mediador da modulação do fenótipo de macrófagos e da invasão em câncer de cabeça e pescoço (HNC): intersecção com expressão e atividade de GALR2 em células neoplásicas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-03-10) González Maldonado, Laura Andrea; Rossa Junior, Carlos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Macrófagos são as células imunes mais abundantes em carcinomas espinocelulares de cavidade bucal, podendo representar cerca de 50% da massa do tumor. A quantidade de macrófagos infiltrando a lesão tumoral é inversamente relacionada ao prognóstico e sobrevida dos pacientes. Os macrófagos presentes no microambiente tumoral (TME) são denominados macrófagos associados ao tumor (TAM) e tem seu fenótipo influenciado por moléculas presentes no TME, incluindo os produtos secretados pelas células neoplásicas. No processo de vigilância imune, os macrófagos têm a função de detectar células tumorais e ativar a imunidade adaptativa para eliminação destas, além de participar no processo de reparo tecidual / restabelecimento da homeostasia. O Fator de Transformação de Crescimento (TGF)-β e o Fator Estimulador da Formação de Colônia (CSF)-1 afetam diretamente o fenótipo de macrófagos, e sua expressão em tumores epiteliais está associada à maior agressividade / progressão. Estas proteínas favorecem a polarização de macrófagos para um fenótipo semelhante ao M2, que é associado à tumores mais agressivos. O receptor 2 de galanina (GALR2) é considerado um oncogene em HNC, favorecendo a proliferação e sobrevivência celular e também a invasão; no entanto as influências da expressão de GALR2 pelas células tumorais na modulação macrófagos e na expressão de TGF-β e CSF-1 são desconhecidas. O objetivo geral do projeto foi determinar o efeito do TGF-β secretado pelas células tumorais na biologia de macrófagos, assim como determinar o efeito da expressão/atividade de GALR2 por células tumorais no fenótipo de macrófagos e sua possível interação com a expressão de TGF-β e CSF-1 pelas células tumorais. O desenvolvimento do projeto foi baseado em três objetivos específicos e os resultados foram divididos em 3 artigos. O primeiro objetivo foi determinar a influência dos produtos secretados pelas células de linhagens neoplásicas com alta (H314, carcinoma de células escamosas de assoalho de boca) e baixa (SCC-9, carcinoma de células escamosas de língua) expressão constitutiva de TGF-β no fenótipo de macrófagos; assim como na migração, quimiotaxia e invasão de células tumorais em co-cultura com macrófagos in vitro. O fenótipo de macrófagos foi determinado pelo RT-qPCR e análise multiplex e indicou um perfil pró-tumoral/reparo (M2) de macrófagos estimulados com o secretoma de H314 e um perfil com tendência ao perfil pró-tumoral/inflamatório (M1) em macrófagos estimulados com o secretoma das células SCC-9. Produtos secretados por macrófagos aumentaram a quimiotaxia de ambas as linhagens neoplásicas, porém apenas o secretoma de H314 foi quimiotático para macrófagos. Macrófagos condicionados com o secretoma das células tumorais favoreceram a invasão da linhagem menos invasiva (H314) e inibirão a invasão da linhagem mais invasiva (SCC9). O segundo objetivo foi avaliar a influência específica do TGF-β secretado pelas linhagens SCC-9 e H314 no fenótipo de macrófagos pelo RT-qPCR e ELISA, assim como na quimiotaxia e invasão (in vitro e in vivo, em modelo de membrana corio-alantóica do ovo de galinha) das células neoplásicas em co-cultura com macrófagos. A inibição do efeito do TGF-β como componente do secretoma das linhagens neoplásicas foi realizada com o tratamento dos macrófagos com inibidor bioquímico da quinase associada ao receptor de TGF-β tipo I (TGF-bRIk) previamente ao estímulo com o secretoma das linhagens neoplásicas. O bloqueio da atividade biológica de TGF-β atenuou a expressão de IL-10 (marcador M2) avaliada por RT-qPCR e ELISA. A inibição de TGF-β em macrófagos também reduziu a invasão de células H314 in vivo e in vitro e reduziu a quimiotaxia de macrófagos para esta linhagem. Por outro lado, a inibição de TGF-bRIk aumentou a quimiotaxia recíproca entre macrófagos e a linhagem SCC-9. O terceiro objetivo foi determinar a influência da expressão/atividade de GALR2 nas linhagens neoplásicas sobre o fenótipo de macrófagos e a possível interação de GALR2 com a expressão de TGF-β e CSF-1 como mediadores importantes para macrófagos. Utilizamos quatro linhagens celulares transgênicas derivadas das mesmas linhagens neoplásicas parentais (SCC-9 e H314), incluindo duas linhagens com alta expressão de GALR2 e as respectivas linhagens-controle (transfectadas com o mesmo vetor plasmidial de expressão - pcDNA3.1 - 'vazio'). A expressão constitutiva de TGF-β e CSF-1 e a meia-vida dos mRNAs foram determinados por ELISA e RT-qPCR, respectivamente. O perfil fenotípico de macrófagos foi determinado usando RT-qPCR e análise multiplex; e a invasão de células tumorais em co-cultura com macrófagos foi avaliada in vitro. A superexpressão de GALR2 reduziu a produção de TGF-β e CSF-1, bem como a meia-vida do RNAm tanto na linhagem H314 quanto SCC-9. A maior expressão de GALR2 nas células neoplásicas influenciou o perfil fenotípico dos macrófagos regulando a expressão de genes-alvo de forma dependente da linhagem celular neoplásica. Em geral, a maior expressão de GALR2 nas linhagens neoplásicas H314 e SCC-9 tendeu a acentuar o perfil pró-tumoral dos macrófagos. A invasão de H314 com alta expressão de GALR2 na presença de macrófagos foi discretamente acentuada, enquanto a expressão de GALR2 reduziu a invasão da linhagem SCC-9 na presença e ausência de macrófagos. Como conclusão geral do trabalho, os dados suportam que o secretoma de células de carcinoma oral de células escamosas (OSCC) influencia o fenótipo de macrófagos. A modulação do fenótipo de macrófagos pode afetar positiva ou negativamente diversos processos da biologia tumoral, como quimiotaxia e invasão, de maneira dependente da linhagem celular neoplásica específica. A inibição de TGF- como um componente do secretoma das linhagens H314 e SCC-9 tem efeito atenuador no fenótipo M2 de macrófagos e pode favorecer ou inibir a quimiotaxia e invasão de diferentes linhagens celulares tumorais. A expressão de GALR2 em células OSCC influencia a expressão gênica e a produção de proteínas pelos macrófagos de uma maneira específica da linhagem celular. O aumento de GALR2 diminui a invasão de células tumorais.

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