Avaliação da viabilidade de células tronco mesenquimais ao longo do tempo em diferentes meios de transporte e temperatura

Abstract

A equideocultura no Brasil apresenta grande relevância econômica e esportiva. Lesões ortopédicas são comuns em equinos atletas e devido a baixa capacidade de regeneração de estruturas como a cartilagem e tendões, a medicina regenerativa, especialmente o uso de células-tronco, surge como alternativa promissora. A preservação da viabilidade celular durante transporte e armazenamento é fundamental para o sucesso terapêutico. O soro fetal bovino (SFB) é amplamente utilizado, mas apresenta riscos imunogênicos e limitações éticas, incentivando a busca por alternativas, como hemoderivados (lisado plaquetário - LP; Soro autólogo - SAU; e Soro alogênico - SAL). O objetivo do presente trabalho foi comparar a viabilidade de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (AdCTMs) equinas armazenadas em SFB e hemoderivados sob duas temperaturas (4°C e 20°C), avaliados em quatro momentos (4, 8, 12 e 24 horas), visando identificar um protocolo de transporte e armazenamento ideal. Para isso, foram utilizadas 30 x 106 de AdCTMs provenientes de três equinos hígidos, cultivadas e distribuídas em quatro grupos de meio suplementado (SFB, LP, SAU e SAL). Cada grupo foi mantido a 4°C e 20°C, com avaliação de viabilidade celular pelo método de exclusão com azul de Tripan nos tempos já citados. Foram aplicadas análises estatísticas (análise descritiva, ANOVA de medidas repetidas e teste de Tukey, p<0,05). Os resultados demonstraram que o tempo de armazenamento exerce efeito decisivo sobre a viabilidade celular, com queda acentuada em 24h. A temperatura não se mostrou determinante. Em suma, os meios hemoderivados (LP, SAU e SAL) não mostraram inferioridade ao SFB, reforçando seus potenciais como substitutos viáveis e seguros para pronta aplicação terapêutica.

Equideoculture in Brazil has great economic and sporting relevance. Orthopedic injuries are common in athletic horses, and due to the low regenerative capacity of structures such as cartilage and tendons, regenerative medicine, particularly the use of stem cells, emerges as a promising alternative. The preservation of cell viability during transport and storage is essential for therapeutic success. Fetal bovine serum (FBS) is widely used but presents immunogenic risks and ethical limitations, encouraging the search for alternatives such as blood derivatives (platelet lysate, autologous serum and allogeneic serum). The aim of the present study was to compare the viability of equine adipose-derived mesenchymal stem cells (AdMSCs) stored in FBS and blood derivatives at two temperatures (4 °C and 20 °C), evaluated at four time points (4, 8, 12, and 24 h), in order to identify an optimal protocol for cell transport and storage. For this purpose, 30 × 10⁶ AdMSCs from three healthy horses were cultured and distributed into four groups of supplemented media (FBS, platelet lysate, autologous serum and allogeneic serum). Each group was maintained at 4 °C and 20 °C, with cell viability assessed by the Trypan Blue exclusion method at the previously mentioned time points. Statistical analyses were applied (descriptive analysis, repeated measures ANOVA, and Tukey’s test, p < 0.05). The results demonstrated that storage time exerts a decisive effect on cell viability, with a marked decline after 24 h. Temperature was not a determining factor. In summary, blood derivative media (platelet lysate, autologous serum and allogeneic serum) did not show inferiority compared to FBS, reinforcing their potential as viable and safe substitutes for immediate therapeutic application.