Metilação global genômica relacionada à resistência parasitária em bovinos

Abstract

O objetivo do trabalho foi caracterizar um rebanho de 72 novilhas ½ Angus x ½ Nelore, identificando os animais resistentes, resilientes esuscetíveis a endo e ectoparasitas, correlacionando a metilação global do DNA desses animais e o grau de parasitismo, que foi avaliado a partir da contagem de ovos por grama de fezes (OPG), moscas-dos-chifres e carrapatos. Essas contagens foram submetidas a análise de variância (ANOVA) para agrupamento em resistentes, resilientes e suscetíveis pelo teste Scott-Knott (p<0,05) noprograma SISVAR e agrupamento hierárquico no programa GENEs. O conteúdo de metilação foi analisado a partir do DNA extraído do sangue das novilhas, por meio dekit de metilação, e a quantificação feita por leitora de microplacas. Os valores absolutos médios de absorbância dos três grupos foram submetidos à ANOVA e análises pelo Tukey (p<0,05). Observou-se 36,11% de animais resistentes, 52,78% resilientese 11,11% suscetíveisa infecção por helmintos gastrintestinais, com contagens de 86, 392 e 1087 OPG, e 0,238, 0,225 e 0,197 do DNA metilado, respectivamente. Para a infestação por carrapatos, 26,39% dos animais foram classificados como resistentes, 59,72% resilientes e 13,98% suscetíveis, com contagensde 3, 8 e 19 carrapatos e 0,295, 0,216 e 0,151 do DNA metilado, respectivamente. E para a infestação por mosca-dos-chifres observou-se 54,17% de novilhas resistentes e 45,83% suscetíveis, com contagensde 17 e 32 moscas e 0,245 e 0,205 do DNA metilado, respectivamente. Na classificação pelo programa GENEs, 33,33% dos animais foram classificados como resistentes, 51,39% como resilientes e 15,28% como suscetíveis a parasitas, com contagens de: 307, 205 e 988 OPG; 3, 10,4 e 10,2 carrapatos; 19, 26 e 24 moscas; e 0,247, 0,227 e 0,185 do DNA metilado. Observou-se uma ligação entre a resistência à parasitas e o conteúdo da metilação do DNA nas duas classificações. Assim, as metodologias utilizadas possibilitaram a identificação das 72 novilhas quanto ao grau de infecção por helmintos gastrintestinais e infestação por carrapatos e mosca-dos-chifres, sendo possível relacionar o grau de resistência dos bovinos à parasitas com a quantidade de metilação global do DNA.

The objective of the work was to characterize a herd of 72 heifers ½ Angus x ½ Nellore, identifying the resistant, resilient and susceptible animals to endo and ectoparasites, correlating the overall DNA methylation of these animals and the degree of parasitism, which was evaluated from the egg count per gram of feces, horn flies and ticks.These counts were submitted to analysis of variance ANOVA for grouping in resistant, resilient and susceptible by the Scott-Knott test (p <0.05) in SISVAR and hierarchical grouping in the GENEs program. The methylation content was analyzed from the DNA extracted from the blood of the heifers, using a methylation kit and quantification by a microplate reader. The mean absolute values of absorbance of the three groups were submitted to ANOVA and analysis by Tukey (p <0.05). There were 36.11% of resistant animals, 52.78% resilient and 11.11% susceptible to gastrointestinal helminth infection, with counts of 86, 392 and 1087 OPG, and 0.238, 0.225 and 0.197 of methylated DNA, respectively. For tick infestation, 26.39% of the animals were classified as resistant, 59.72% resilient and 13.98% susceptible, with counts of 3, 8 and 19 ticks and 0.295, 0.216 and 0.151 of methylated DNA, respectively. And for the horn fly infestation, 54.17% of resistant and 45.83% susceptible heifers were observed, with counts of 17 and 32 flies and 0.245 and 0.205 of methylated DNA, respectively. In the second classification, 33.33% of the animals were classified as resistant, 51.39% as resilient and 15.28% as susceptible to parasites, with counts of: 307, 205 and 988 OPG; 3, 10.4 and 10.2 ticks; 19, 26 and 24 flies; and 0.247, 0.227 and 0.185 of methylated DNA. A link was observed between resistance to parasites and the content of DNA methylation in the two classifications. Thus, the methodologies used enabled the identification of 72 heifers as to the degree of infection by gastrointestinal helminths and infestation by ticks and horn flies, making it possible to relate the degree of resistance of cattle to parasites with the amount of overall DNA methylation.