Caracterização biofísica da proteína Grb2 e primeiras comparações após sua liofilização

Abstract

A proteína Grb2 (Growth factor Receptor-Bound protein 2), é uma importante proteína adaptadora presente na via MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase), responsável por eventos de proliferação e diferenciação celular. A importância da proteína Grb2 se dá pela regulação desta via, por meio de seu equilíbrio entre a forma dimérica e monomérica, onde o monômero dá sequência a via, e o dímero inibe o processo. Estudos sobre essa proteína são de extrema importância, dado que a via pode ser relacionada com patologias como o câncer, por meio da proliferação acelerada e descontrolada de células, e esta proteína pode ser um importante alvo, visando regular a via da MAPK. Neste estudo, a proteína Grb2 foi expressa e purificada, foram obtidos os parâmetros de desenovelamento térmico da proteína por meio de calorimetria diferencial de varredura, avaliado o diâmetro hidrodinâmico por Espalhamento dinâmico de luz e a estrutura secundária por espectroscopia de dicroísmo circular. Os mesmos procedimentos foram realizados após a liofilização e ressuspensão da proteína para comparação. Os resultados mostram que, antes da liofilização, a Grb2 possui um enovelamento estável, com diâmetro e temperaturas definidas de desnaturação e melting. Após a liofilização, observou-se uma incompatibilidade nos dados, indicando uma alteração estrutural na proteína. Portanto, serão repetidas as análises e realizados novos testes para confirmar essas alterações.

The Grb2 protein (Growth Factor Receptor-Binding Protein 2) is an important adaptor protein present in the MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase) pathway, responsible for cell protection and differentiation events. The importance of the Grb2 protein lies in the regulation of this pathway, through its balance between the dimeric and monomeric forms, where the monomer continues the pathway and the dimer inhibits the process. Studies on this protein are extremely significant, since the pathway can be related to pathologies such as cancer, through the accelerated and uncontrolled cell division, and this protein can be an essential target, regularly passing through the MAPK pathway. In this study, the Grb2 protein was expressed and purified, the thermal unfolding parameters of the protein were obtained using differential scanning calorimetry, the hydrodynamic diameter was evaluated by dynamic light scattering, and the secondary structure by circular dichroism spectroscopy. The same procedures were performed after lyophilization and protein resuspension for comparison. The results show that, before lyophilization, Grb2 has a stable fold, with defined diameter and denaturation and melting temperatures. After lyophilization, a mismatch in the data was observed, suggesting a structural change in the protein. Therefore, the analyses will be repeated, and new tests performed to confirm these changes.