Sistema de entrega de miR-200 através de vesículas extracelulares em linhagens de câncer de mama

O câncer de mama triplo-negativo (CMTN) destaca-se por sua elevada agressividade, alta capacidade metastática e escassez de terapias-alvo eficazes. Nesse contexto, a transição epitélio-mesenquimal (EMT) desempenha papel central na progressão tumoral, sendo regulada, entre outros fatores, pela família de microRNAs miR-200, reconhecida por modular a expressão dos fatores de transcrição ZEB1 e ZEB2. Considerando o potencial terapêutico desses microRNAs, o presente estudo avaliou a utilização de vesículas extracelulares (VEs) derivadas de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (MSCs) como sistema de entrega de miR-200 em modelos de linhagem celular de câncer de mama. Inicialmente, as MSCs foram cultivadas em diferentes condições e utilizadas para obtenção de vesículas extracelulares caracterizadas quanto à concentração, tamanho e morfologia por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). O carregamento dos microRNAs foi realizado por eletroporação e sua inserção foi confirmada por RT-qPCR. Adicionalmente, foi realizado ensaio de viabilidade celular por MTT para investigação de possíveis efeitos citotóxicos do tratamento. Os resultados demonstraram que as MSCs mantiveram características morfológicas compatíveis com o descrito para o tipo celular e produziram vesículas extracelulares com perfil adequado para os experimentos subsequentes. Entretanto, a eletroporação promoveu alterações nos parâmetros físicos das vesículas e apresentou eficiência limitada para o carregamento de miR-200c. A análise por RTqPCR indicou baixa incorporação do microRNA nas condições avaliadas. O ensaio de MTT demonstrou ausência de toxicidade significativa associada ao tratamento. Em conjunto, os resultados evidenciam o potencial das MSCs como fonte de vesículas extracelulares, mas indicam a necessidade de otimização dos protocolos de carregamento para aplicações envolvendo miR-200c. Estudos adicionais serão necessários para avaliar o impacto dessa estratégia sobre processos relacionados à EMT e à progressão tumoral.

Resumo (inglês)

Triple-negative breast cancer (TNBC) is characterized by high aggressiveness, elevated metastatic potential, and the lack of effective targeted therapies. In this context, the epithelial–mesenchymal transition (EMT) plays a central role in tumor progression and is regulated, among other factors, by the miR-200 family of microRNAs, which modulates the expression of the transcription factors ZEB1 and ZEB2. Considering the therapeutic potential of these microRNAs, the present study evaluated the use of extracellular vesicles (EVs) derived from adipose tissue–derived mesenchymal stem cells (MSCs) as a delivery system for miR-200 in breast cancer cell line models. Initially, MSCs were cultured under different conditions and used for EV isolation. The vesicles were characterized in terms of concentration, size, and morphology by nanoparticle tracking analysis (NTA) and transmission electron microscopy (TEM). MicroRNA loading was performed by electroporation, and its incorporation was assessed by RT-qPCR. In addition, an MTT assay was conducted to investigate possible cytotoxic effects of the treatment. The results demonstrated that MSCs maintained morphological characteristics consistent with those described for this cell type and produced extracellular vesicles with a suitable profile for subsequent experiments. However, electroporation induced alterations in the physical parameters of the vesicles and showed limited efficiency for miR-200c loading. RT-qPCR analysis indicated low microRNA incorporation under the evaluated conditions. The MTT assay demonstrated the absence of significant treatment-associated toxicity. Overall, the findings highlight the potential of MSCs as a source of extracellular vesicles, while indicating the need for optimization of loading protocols for applications involving miR-200c. Further studies will be required to evaluate the impact of this strategy on EMT-related processes and tumor progression.

Palavras-chave

Câncer de mama triplo-negativo Vesículas extracelulares Células tronco mesenquimais miR-200 Transição epitélio-mesenquimal Triple-negative breast cancer Extracellular vesicles Mesenchymal stem cells Epithelial–mesenchymal transition

Idioma

Português

Citação

LEITE, Álexia Correa Pereira. Sistema de entrega de miR-200 através de vesículas extracelulares em linhagens de câncer de mama. (Trabalho de Conclusão – Ciências Biológicas). - Universidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Biociências Letras e Ciências Exatas (Ibilce), São José do Rio Preto, 2026.