Análise da expressão de miRNAs 612 e 637 em câncer de cabeça e pescoço

Abstract

As abordagens terapêuticas para o carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP) ainda possuem algumas limitações, incluindo resistência terapêutica, efeitos colaterais e recorrência locoregional ou metástase distal. Dessa forma, é importante a busca por novos biomarcadores que auxiliem no diagnóstico precoce e terapias direcionadas. Os microRNAs (miRNAs ou miRs) são potenciais biomarcadores, pois regulam a expressão gênica em nível pós-transcricional, modulando a diferenciação e proliferação celular, angiogênese, apoptose, invasão e metástase. Por isso, este estudo avaliou a expressão relativa dos miRNAs 612 e 637 em amostras teciduais de CECP e linhagens celulares cancerígenas, além de comparar a expressão destes com dados clínicos e epidemiológicos. Foram utilizadas para este estudo linhagens celulares cancerígenas (HEp-2 e SCC-25) e não cancerígena (HaCat). Além disso, foram utilizados tecidos tumorais de CECP e uma amostra sanguínea sem tumor. O RNA total das linhagens celulares, amostras teciduais e sanguínea foi extraído, a síntese dos DNAs complementares foi realizada e as reações para os miRNAs 612 e 637 foram preparadas em termociclador, em duplicatas, incluindo o controle endógeno RNU48, com sondas específicas TaqMan. A quantificação relativa dos níveis de expressão dos miRNAs foi calculada pelo método 2-∆∆Ct. O miRNA-612 foi hiperexpresso em tecidos tumorais de CECP em relação ao controle (amostra sanguínea sem câncer) e hipoexpresso em linhagens celulares cancerígenas (SCC-25 e HEp-2) comparado a linhagem celular não cancerígena (HaCat). O miRNA-637 foi hipoexpresso em tecidos tumorais em relação ao controle e nas linhagens SCC-25 e HEp-2 comparado a linhagem HaCat. Não houve associação entre a expressão dos miRNAs estudados e os pacientes tabagistas e não tabagistas, e o estadiamento tumoral II/III e IV. Em conclusão, os miRNAs 612 e 637 apresentaram uma expressão diferencial em tecidos tumorais e linhagens celulares de CECP, podendo ser utilizados como possíveis biomarcadores diagnósticos e prognósticos neste tipo de câncer. Os resultados apresentados fornecem novas perspectivas para investigações futuras da potencial utilização dos miRNAs 612 e 637 como biomarcadores em CECP.

Therapeutic approaches for head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) still have some limitations, including therapeutic resistance, side effects, and locoregional recurrence or distal metastasis. Therefore, it is important to search for new biomarkers to aid in early diagnosis and targeted therapies. MicroRNAs (miRNAs or miRs) are potential biomarkers because they regulate gene expression at the post-transcriptional level and modulate cell differentiation and proliferation, angiogenesis, apoptosis, invasion and metastasis. Therefore, this study evaluated the relative expression of miRNAs 612 and 637 in HNSCC tissue samples and cancer cell lines and compared their expression with clinical and epidemiological data. For this study, cancer cell lines (HEp-2, SCC-25) and non-cancer cell lines (HaCat) were used. In addition, HNSCC tumor tissues and a tumor-free blood sample were used. Total RNA was extracted from the cell lines, tissues and blood, complementary DNA was synthesized, and the reactions for miRNAs 612 and 637 were performed in duplicate in a thermal cycler, including the endogenous control RNU48, using TaqMan specific probes. Relative quantification of miRNA expression levels was calculated using the 2-∆∆Ct method. The miRNA-612 was overexpressed in HNSCC tumor tissues compared to control (cancer-free blood sample) and underexpressed in cancer cell lines (SCC-25 and HEp-2) compared to the HaCat cell line. The miRNA-637 was underexpressed in tumor tissues compared to the control and in the SCC-25 and HEp-2 cell lines compared to the HaCat cell line. There was no association between the expression of these miRNAs and smokers versus non-smokers or tumor staging II/III and IV. In conclusion, miRNAs 612 e 637 showed differential expression in tumor tissues and cell lines of HNSCC and could be used as possible diagnostic and prognostic biomarkers in this type of cancer. The results presented provide new perspectives for future investigations into the potential use of miRNAs 612 and 637 as biomarkers in HNSCC.