Utilização de vitamina C como antioxidante na criopreservação do sêmen de Astyanax lacustris

Abstract

Astyanax lacustris é uma espécie de peixe neotropical nativa do rio Paraná, de grande importância para o ecossistema aquático e para a produção aquícola do país, sendo assim fundamental o estabelecimento de um Banco genético ou de germoplasma da espécie. Neste sentido, esta pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação da vitamina C, como substância antioxidante, na composição da solução crioprotetora utilizada na criopreservação do sêmen de A. lacustris, com vistas a melhoria da qualidade do sêmen criopreservado. Para tal, foram utilizados machos adultos e maduros de A. lacustris, sendo avaliadas as características seminais quanto a integridade de membrana dos gametas, morfologia e concentração espermática, e parâmetros cinéticos espermáticos. Para os experimentos foram utilizadas amostras seminais de quatro pools (15 animais/pool). Como diluente crioprotetor foi utilizado uma solução Ringer modificada + dimetilformamida 10% + NaCl 0,8%, suplementada com vitamina C, nas dosagens 0, 1, 2 e 4 mM. o sêmen foi diluído na proporção 1:9 (sêmen:solução), envasado em palhetas de 0,25 ml e congelados em vapor de nitrogênio em caixa de isopor, posicionados a 2 cm da superfície do nitrogênio por 10 minutos, e mantido em botijão criogênico (-196ºC). O sêmen criopreservado foi descongelado, em banho maria (40°C/5s) e submetido à avaliação das características seminais. A suplementação de vitamina C não contribuiu para a melhoria, parâmetros cinéticos espermáticos como a motilidade total 0mM (23.07 ± 8.23%), 1mM (13.88 ± 8.64%), 2mM (8.86 ± 6.46 %) e 4mM (2.83 ± 1.49) para o sêmen criopreservado. Como também as variáveis VCL, VSL e VAP não apresentaram melhoria. Também não contribuiu para a manutenção de integridade da membrana dos espermatozoides, sendo observado uma diminuição integridade, destacando-se 0mM (70,9 ± 4,15%) e 2mM (55,2 ± 11.52%) Pode se destacar que foi progressivo o aumento de danos morfológicos em relação direta ao aumento da concentração de vitamina C, sendo 1mM (81,8 ± 6,32%) e 4mM (93,2 ± 2,77%). Pode-se concluir que, a suplementação de vitamina C como um antioxidante na solução crioprotetora de A. lacustris, não propiciou uma melhora efetiva na manutenção da viabilidade dos espermatozoides em relação aos protocolos de criopreservação aplicados.

Astyanax lacustris is a Neotropical fish species native to the Paraná River, with great importance for the aquatic ecosystem and for national aquaculture production. Therefore, establishing a genetic or germplasm bank for the species is essential. ln this context, the objective ofthis study was to evaluate the effect ofvitamin C supplementation, as an antioxidant substance, in the composition of the cryoprotectant solution used in the cryopreservation of A. lacustris semen, aiming to improve the quality of cryopreserved semen. For this purpose, adult and sexually mature males of A. lacustris were used, and seminal characteristics were assessed regarding gamete membrane integrity, morphology, sperm concentration, and sperm kinetic parameters. Seminal samples from four pools (15 animais per pool) were used in the experiments. As a cryoprotectant diluent, a modified Ringer solution + 10% dimethylformamide + 0.8% NaCl supplemented with vitamin C at concentrations ofü, 1, 2, and 4 mM was used. The semen was diluted ata ratio of 1:9 (semen:solution), loaded into 0.25-ml straws, frozen in nitrogen vapor in a Styrofoam box positioned 2 cm above the nitrogen surface for 1O minutes, and stored in a cryogenic tank (-196ºC). The cryopreserved semen was thawed in a water bath (40ºC/5 s) and subjected to seminal evaluation. Vitamin C supplementation did not contribute to improvements in sperm kinetic parameters, such as total motility: O mM (23.07 ± 8.23%), 1 mM (13.88 ± 8.64%), 2 mM (8.86 ± 6.46%), and 4 mM (2.83 ± 1.49%) for cryopreserved semen. Likewise, the variables VCL, VSL, and VAP showed no improvement. Vitamin C also did not aid in maintaining sperm membrane integrity, with a decrease being observed, particularly at O mM (70.9 ± 4.15%) and 2 mM (55.2 ± 11.52%). A progressive increase in morphological damage was noted in direct relation to rising vitamin C concentrations, especially at 1 mM (81.8 ± 6.32%) and 4 mM (93.2 ± 2.77%). It can be concluded that vitamin C supplementation as an antioxidant in the cryoprotectant solution for A. lacustris did not effectively improve the maintenance of sperm viability under the applied cryopreservation protocols.