Avaliação da ação antifúngica da hemolinfa de Galleria mellonella previamente imunizada com Candida albicans inativada

Abstract

As infecções fúngicas têm emergido como um problema de saúde global nas últimas décadas. Espécies do gênero Candida são frequentemente encontradas nessas diferentes infecções, devido a isso, no ano de 2022 a OMS incluiu a espécie Candida albicans em sua lista de agentes patogênicos fúngicos com prioridade crítica. A resistência antifúngica desse gênero é preocupante, o que torna urgente a criação de novas alternativas. Diante disso, o objetivo desse estudo foi investigar a ação antifúngica da hemolinfa das larvas de Galleria mellonella antes e após a imunização por C. albicans. Para isso, o trabalho foi realizado em três etapas: 1) Padronização do agente antimelanizante capaz de inibir a cascata de melanização da hemolinfa das larvas de G. mellonella; 2) Padronização das concentrações de C. albicans e seleção da imunização capaz de induzir resposta imune sem comprometer a sobrevivência do hospedeiro e 3) Imunização em diferentes tempos para realização dos testes em cultura planctônica, biofilme e filamentação. Como resultado, obtivemos que a hemolinfa de larvas imunizadas por 24 h foi capaz de reduzir o número de células viáveis em cultura planctônica após 60 minutos de contato, em contraste as imunizações de 48 h e 72 h não apresentaram redução quando comparadas aos seus respectivos controles. Os biofilmes originados das padronizações de 10⁴, 10⁵ e 10⁶ cél/mL de C. albicans apresentaram reduções de 1,8; 2,5 e 3,2 log10, respectivamente, ao serem expostos à hemolinfa imunizada por 24 h. Os biofilmes tratados com a hemolinfa imunizada por 48 h e 72 h apresentaram inibições de 0,3; 0,2 e 0,3 log10 e de 3,1; 1,1 e 0,8 log10, respectivamente. No teste de filamentação, as células fúngicas expostas à hemolinfa imunizada, em todos os tempos avaliados, apresentaram menor formação de hifas, sugerindo que esse tratamento exerce efeito modulador no dimorfismo do fungo. Diante do exposto, conclui-se que a hemolinfa de G. mellonella, previamente imunizada com C. albicans, apresenta atividade antifúngica e efeito modulador frente a seu dimorfismo, gerando a necessidade de estudos adicionais para elucidar os mecanismos envolvidos nessa resposta.

Fungal infections have emerged as a global health problem in recent decades. Species of the genus Candida are frequently found in these different infections; therefore, in 2022, the WHO included Candida albicans in its list of critically important fungal pathogens. Antifungal resistance in this genus is a concern, making the development of new alternatives urgent. Therefore, the objective of this study was to investigate the antifungal action of the hemolymph of Galleria mellonella larvae before and after immunization with C. albicans. To this end, the work was carried out in three stages: 1) Standardization of the anti-melanizing agent capable of inhibiting the melanization cascade of the hemolymph of G. mellonella larvae; 2) Standardization of C. albicans concentrations and selection of the immunization capable of inducing an immune response without compromising host survival; and 3) Immunization at different times to perform tests in planktonic culture, biofilm, and filamentation. As a result, we found that hemolymph from larvae immunized for 24 h was able to reduce the number of viable cells in planktonic culture after 60 minutes of contact. In contrast, immunizations of 48 h and 72 h did not show a reduction when compared to their respective controls. Biofilms originating from standardizations of 10⁴, 10⁵, and 10⁶ cells/mL of C. albicans showed reductions of 1.8, 2.5, and 3.2 log10, respectively, when exposed to hemolymph immunized for 24 h. Biofilms treated with hemolymph immunized for 48 h and 72 h showed inhibitions of 0.3, 0.2, and 0.3 log10 and of 3.1, 1.1, and 0.8 log10, respectively. In the filamentation test, fungal cells exposed to immunized hemolymph showed less hyphal formation at all evaluated times, suggesting that this treatment has a modulating effect on fungal dimorphism. Therefore, it is concluded that the hemolymph of G. mellonella, previously immunized with C. albicans, exhibits antifungal activity and a modulating effect on its dimorphism, generating the need for further studies to elucidate the mechanisms involved in this response.