Hidrolisados parciais de soro proteínas lácteas bovina e bubalina obtidos com proteases imobilizadas: ensaios de transporte e absorção de peptídeos através das técnicas da dialisabilidade e cultura de células caco-2
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Data
2015-10-06
Autores
Bassan, Juliana Cristina [UNESP]
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Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
Proteases are important industrial enzymes with wide range of application. They catalyze the hydrolysis of proteins and are widely exploited in the production of protein hydrolysates from milk protein (casein and whey), soy and fish, generating high value-added products. In this work, trypsin (EC 3.4.21.4) and pepsin (EC 3.4.23.1) were immobilized on a low cost alternative support, corn cob powder (CCP) to obtain partial hydrolysates of bovine and buffalo cheese whey, the main by-product of the dairy industry. The pretreated support was activated with glyoxyl and IDA-glyoxyl groups (trypsin) and glutaraldehyde (trypsin and pepsin). The derivatives showed immobilization yields higher than 80% and 90% for trypsin and pepsin, respectively, and recovered activities higher than 85% for trypsin derivatives and 94% for pepsin derivative. The derivative trypsin-glyoxyl-CCP showed excellent thermal stability at 65 ° C, which was 1111 times higher that obtained with free enzyme, followed by derivative trypsin-IDA-glyoxyl-CCP (900-fold) and trypsin-glutaraldehyde-CCP (5.38-fold). For the derivative pepsin-glutaraldehyde-CCP the thermal stability was held at 45 ° C and was 1.42 times greater than the free enzyme. Stabilized derivatives trypsin-glyoxyl-CCP and pepsin-glutaraldehyde-CCP were used in a packed bed reactor for the hydrolysis of bovine and buffalo cheese whey. The relationship derivative/working volume was 1:2 and the process was conducted at 45 ° C with a flow of 10.1mL/h. For the hydrolysis, bovine and buffalo cheese whey were dialyzed and treated with kaolin to reduce lactose and fats, respectively. The hydrolysates were fractionated by gel filtration chromatography (Sephadex G25) to obtain 5kDa peptide pools. The transport and absorption of each peptide pools were evaluated by in vitro methods simulating the gastrointestinal digestion/dialysability and by Caco-2 cell ...
As proteases são importantes enzimas industriais com vasta área de aplicação. Como catalisam a hidrólise de proteínas, são amplamente exploradas na produção de hidrolisados proteicos a partir das proteínas do leite (caseínas e soro de queijo), soja e peixe, gerando produtos de alto valor agregado. Neste trabalho, a tripsina (EC 3.4.2.1.4) e pepsina (EC 3.4.23.1) foram imobilizadas em suporte alternativo de baixo custo pó de sabugo de milho (SM) para a obtenção de hidrolisados parciais do soro de queijo bovino e bubalino, principal subproduto da indústria de laticínios. O suporte pré-tratado foi ativado com grupos glioxil e IDA-glioxil (tripsina) e glutaraldeído (tripsina e pepsina). Os derivados apresentaram rendimentos de imobilização maiores que 80% para a tripsina e 90% para a pepsina com atividades recuperadas maiores que 85% e 94%, respectivamente. O derivado de tripsina-glioxil-SM exibiu uma excelente estabilidade térmica a 65 ° C, que foi 1111 vezes maior em comparação à enzima livre seguido pelos derivados tripsina-IDA-glioxil-SM (900 vezes) e tripsina-glutaraldeído-SM (5,38 vezes). Para o derivado pepsina-glutaraldeído-SM a estabilidade térmica foi realizada em 45ºC e foi 1,42 vezes maior com relação à enzima livre. Os derivados estabilizados tripsina-glioxil-SM e pepsina-glutaraldeído-SM foram empregados em um reator de leito empacotado para hidrólise do lactosoro bovino e bubalino. A relação derivado enzimático/volume útil foi de 1:2 e o processo foi conduzido a 45ºC com uma vazão de 10,1mL/h. Para a hidrólise, os soros de queijo bovino e bubalino foram dialisados e tratados com caulim para a redução dos teores de lactose e gordura, respectivamente. Os hidrolisados foram fracionados por cromatografia de filtração em gel (Sephadex G25) para obtenção de pools de peptídeos ˂5kDa. O transporte e a absorção de cada um dos pools de peptídeos foram avaliados pelos métodos in vitro da...
As proteases são importantes enzimas industriais com vasta área de aplicação. Como catalisam a hidrólise de proteínas, são amplamente exploradas na produção de hidrolisados proteicos a partir das proteínas do leite (caseínas e soro de queijo), soja e peixe, gerando produtos de alto valor agregado. Neste trabalho, a tripsina (EC 3.4.2.1.4) e pepsina (EC 3.4.23.1) foram imobilizadas em suporte alternativo de baixo custo pó de sabugo de milho (SM) para a obtenção de hidrolisados parciais do soro de queijo bovino e bubalino, principal subproduto da indústria de laticínios. O suporte pré-tratado foi ativado com grupos glioxil e IDA-glioxil (tripsina) e glutaraldeído (tripsina e pepsina). Os derivados apresentaram rendimentos de imobilização maiores que 80% para a tripsina e 90% para a pepsina com atividades recuperadas maiores que 85% e 94%, respectivamente. O derivado de tripsina-glioxil-SM exibiu uma excelente estabilidade térmica a 65 ° C, que foi 1111 vezes maior em comparação à enzima livre seguido pelos derivados tripsina-IDA-glioxil-SM (900 vezes) e tripsina-glutaraldeído-SM (5,38 vezes). Para o derivado pepsina-glutaraldeído-SM a estabilidade térmica foi realizada em 45ºC e foi 1,42 vezes maior com relação à enzima livre. Os derivados estabilizados tripsina-glioxil-SM e pepsina-glutaraldeído-SM foram empregados em um reator de leito empacotado para hidrólise do lactosoro bovino e bubalino. A relação derivado enzimático/volume útil foi de 1:2 e o processo foi conduzido a 45ºC com uma vazão de 10,1mL/h. Para a hidrólise, os soros de queijo bovino e bubalino foram dialisados e tratados com caulim para a redução dos teores de lactose e gordura, respectivamente. Os hidrolisados foram fracionados por cromatografia de filtração em gel (Sephadex G25) para obtenção de pools de peptídeos ˂5kDa. O transporte e a absorção de cada um dos pools de peptídeos foram avaliados pelos métodos in vitro da...
Descrição
Palavras-chave
Enzimas proteoliticas, Hidrolisados de proteina, Peptídeos, Celulas - Cultura e meios de cultura, Peptides
Como citar
BASSAN, Juliana Cristina. Hidrolisados parciais de soro proteínas lácteas bovina e bubalina obtidos com proteases imobilizadas: ensaios de transporte e absorção de peptídeos através das técnicas da dialisabilidade e cultura de células caco-2. 2015. 119 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho Faculdade de Ciências Farmacêuticas, 2015.