Desenvolvimento e padronização de ELISA indireto utilizando peptídeos quiméricos sintéticos para o sorodiagnóstico da anemia infecciosa equina

A Anemia Infecciosa Equina (AIE) é uma enfermidade viral crônica, incurável e de notificação obrigatória no Brasil, sendo o diagnóstico sorológico um desafio devido à natureza mutacional do lentivírus. O presente estudo visou o desenvolvimento, a padronização e a validação de um Ensaio de Imunoabsorção Enzimático Indireto (iELISA) utilizando peptídeos sintéticos quiméricos como antígenos para a detecção de anticorpos contra o Vírus da Anemia Infecciosa Equina (EIAV) em soros equinos. A estratégia molecular baseou-se na fusão de um fragmento da porção transmembrana (TM) da gp45 com um peptídeo de 42 aa da proteína p26, contendo uma cauda de Histidina (His). Os ensaios de padronização revelaram que o principal desafio metodológico residiu no efeito de fundo da amostra de soro equino, que gerou intensa interação inespecífica. Para neutralizar esse ruído analítico, estabeleceu-se um protocolo de correção baseado na subtração matemática da densidade óptica (DO) do "branco do soro" individualizado (poços sem antígeno), eliminando falsos-positivos por adsorção inespecífica. A partir de curvas ROC e critérios epidemiológicos alinhados às diretrizes de defesa sanitária do MAPA, determinou-se o ponto de corte (cutoff) definitivo de > 0,247 (J = 0,9352). Este limiar priorizou a sensibilidade diagnóstica (96,86%) em equilíbrio com a especificidade (96,66%), estabelecendo uma margem de segurança para a captura de soros com baixos títulos de anticorpos. A plataforma demonstrou reprodutibilidade e suporte diagnóstico frente à possível variabilidade genômica viral, sendo capaz de identificar anticorpos nas amostras não reagentes no teste de referência de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA/Coggins). Divergências diagnósticas investigadas por PCR revelaram que os falsos-negativos no iELISA podem corresponder a animais em fase aguda de infecção (janela imunológica). Conclui-se que o iELISA quimérico desenvolvido apresenta-se como uma promissora ferramenta nacional de triagem, demostrando acurácia analítica, potencial de automação e custo-benefício. Os resultados obtidos estabelecem uma sólida base metodológica para futuros estudos de validação em escala populacional, visando subsidiar os fluxos de vigilância epidemiológica e viabilizar a posterior transposição dos antígenos para plataformas imunocromatográficas de fluxo lateral.

Palavras-chave

EIAV Anemia Infecciosa Equina ELISA peptídeo quimérico sintético

Idioma

Português

Citação

CELIS, Eliana Leonor Hurtado. Desenvolvimento e padronização de ELISA indireto utilizando peptídeos quiméricos sintéticos para o sorodiagnóstico da anemia infecciosa equina. 2026. Tese (Doutorado em Biotecnologia) – Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, 2026.