Perfil global de expressão de MicroRNAs na próstata ventral de ratos submetidos à restrição proteica materna: Efeitos perinatais e reflexos no envelhecimento
Carregando...
Data
2021-05-21
Autores
Orientador
Justulin, Luis Antonio 
Coorientador
Pós-graduação
Biologia Geral e Aplicada - IBB
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
Nas últimas décadas, foi observado aumento na incidência de câncer na população. Estudos mostram que o câncer pode se originar de insultos sofridos por indivíduos durante a vida intrauterina, visto que que este período é caracterizado pela capacidade do embrião/feto em se adaptar às mudanças ambientais, alterando a expressão gênica por mecanismos pós-transcricionais. Já foi demonstrado que a restrição proteica materna promove a carcinogênese da próstata em ratos idosos; No entanto, há falta de informações sobre o mecanismo molecular envolvido nesse processo. Assim, objetivamos identificar os possíveis microRNAs desregulados em ratos jovens programados e localizar seus possíveis alvos associados à carcinogênese da próstata. Para isso, ratos machos Sprague Dawley nascidos de mães alimentadas com dieta padrão (17% de proteína), grupo controle (CTR), ou dieta pobre em proteínas (6% de proteína), grupo gestational and lactational low protein diet (GLLP), durante a gestação e lactação foram sacrificados no dia pós-natal 21. O sangue foi coletado para analises hormonais e a próstata ventral foi processada para morfologia e por sequenciamento, HigSeq -2500 Illumina, para determinar o perfil do microRNoma. Dados de sequenciamento de miRNAs de pacientes com câncer de próstata, oriundos do the cancer genome atlas (TCGA), foram reanalisados para comparação com os resultados de ratos. Além disso, foi realizada a transfecção do miR-33 em células PNT-2 para avaliar a expressão de seus alvos e a viabilidade celular após tratamento através da técnica de MTT. Assim, foi observado atraso no desenvolvimento da próstata ventral e aumento dos níveis de testosterona e expressão de estrogênio em ratos GLLP. Além disso, 20 miRNAs foram identificados como diferencialmente expressos, 6 down regulados e 14 up regulados. Os resultados de enriquecimento para miRNAs down regulados estão relacionados às vias do câncer e da angiogênese, enquanto os miRNAs up regulados estão enriquecendo vias de retículo endoplasmático e de carcinoma. A reanálise do sequenciamento de miRNA de TCGA revelou 7 em comum com o grupo GLLP. Um deles é o miR-33 que, além de ser down regulado na próstata, também é desregulado no testículo, na glândula adrenal e no fígado, dados gerados através do RTq-PCR. Sua supra expressão nas células transfectadas causou uma diminuição na viabilidade celular e seu alvo, CYP1B1, é uma enzima importante no metabolismo do estrogênio, que pode levar à carcinogênese mediada por mudanças nos níveis hormonais e transformação do estradiol. Concluímos que o miR-33 é um alvo importante para explicar as alterações causadas pela LPD materna podendo, ser considerado um considerável biomarcador por ser desregulado em vários órgãos analisados.
Resumo (inglês)
In the last decades, there has been an increase in the incidence of cancer in the population. Studies show that cancer can originate through insults suffered by individuals during intrauterine life, a condition known as Fetal Programming. (PF). The perinatal period is characterized by the ability of the embryo / fetus to adapt to environmental changes, altering gene expression by post-transcriptional mechanisms. Recently, we demonstrated that maternal protein restriction promotes prostate carcinogenesis in elderly rats; However, information about the molecular mechanism involved in this process is lacking. Thus, we aimed at identifying possible deregulated microRNAs in young programmed rats and locate their possible targets associated with prostate carcinogenesis. For this, male Sprague Dawley rats born to mothers fed a standard diet (17% protein) - a control group (CTR) or a low protein diet (6% protein) - a gestational and lactational low protein diet (GLLP), during pregnancy and lactation were sacrificed on the postnatal day 21. We observed a delay in the development of the ventral prostate and increased levels of testosterone and estrogen expression in GLLP rats. In addition, 20 miRNAs were identified as differentially expressed, 6 downregulated and 14 upregulated. The enrichment results for downregulated miRNAs are related to cancer and angiogenesis pathways, while upregulated miRNAs are enriching endoplasmic reticulum and carcinoma pathways. The reanalysis of miRNA sequencing from TCGA revealed 7 in common with the GLLP group. One of them is miR-33 which, in addition to being down regulated in the prostate, is also unregulated in the testis, adrenal gland and liver. Their overexpression in transfected cells caused a decrease in cell viability and your target, CYP1B1, which is an important enzyme in estrogen metabolism, leading to carcinogenesis mediated by changes in hormone levels. We concluded that miR-33 is an important target to explain the changes caused by maternal LPD and can also be considered the biomarker because it is unregulated in several organs.
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português