Criopreservação de sêmen bovino com dois diluentes comerciais suplementados com astaxantina

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dc.contributor.advisorGimenes, Lindsay Unno [UNESP]
dc.contributor.advisorArruda, Rubens Paes de [UNESP]
dc.contributor.authorCarrer, Alessandra Regina
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2022-05-25T19:53:12Z
dc.date.available2022-05-25T19:53:12Z
dc.date.issued2022-04-14
dc.description.abstractNeste estudo o objetivo foi avaliar a suplementação com astaxantina em meios diluidores comerciais de criopreservação de sêmen bovino, à base de gema de ovo (Experimento 1) e à base de lipossomas (Experimento 2), quanto à motilidade, morfologia, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e estresse oxidativo. Foram utilizados seis touros da raça Nelore e colhidos sete ejaculados de cada animal (N=42). Cada ejaculado foi dividido para receber um dos seguintes tratamentos: diluidor comercial (C-GEMA ou C-LIPO), diluidor comercial suplementado com 0,5 µM astaxantina (GEMA + AST ou LIPO + AST) e diluidor comercial com 0,009% de dimetilsulfóxido (C-GEMA DMSO ou C-LIPO DMSO). Este último grupo foi incluído como um controle negativo, uma vez que o DMSO foi a substância utilizada para dissolver a astaxantina. Após a diluição, os espermatozoides foram submetidos ao sistema de análises computadorizado da motilidade espermática (CASA), além de serem analisados quanto à morfologia espermática, sob microscopia de contraste de interferência diferencial. Após a criopreservação, as células espermáticas foram reavaliadas para características de motilidade e morfologia espermática, além de mensurar a porcentagem de células com integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e estresse oxidativo, sob citometria de fluxo. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média e foram analisados por ANOVA, utilizando modelo misto (PROC MIXED), considerando o efeito aleatório do ejaculado de cada touro e os efeitos fixos de tratamento, touro e interação. No experimento 1, os espermatozoides dos grupos C-GEMA, GEMA + AST e C-GEMA DMSO apresentaram, respectivamente, os seguintes resultados: velocidade progressiva (VSL) 79,2a ± 1,3, 75,3b ± 1,3 e 75,4b ± 1,3 (P = 0,02); frequência de batimento (BCF) 32,7ª ± 0,4, 30,9b ± 0,4 e 31,3b ± 0,4 (P < 0,01); retilinearidade (STR) 88,9ª ± 0,3, 87,3b ± 0,4 e 87,5b ± 0,4 (P < 0,01); defeitos menores 2,4b ± 0,3, 3,2a ± 0,3 e 2,2b ± 0,2 (P = 0,01); e intensidade média do potencial de membrana mitocondrial 9796,1a ± 495,5, 8028,3b ± 441,3 e 8732,8ab ± 370,7 (P = 0,04). As demais características não diferiram entre os grupos (P > 0,05). De forma inesperada nas características em que a astaxantina foi superior ou inferior ao grupo C-GEMA, os resultados foram semelhantes ao grupo C-GEMA DMSO, indicando que os efeitos observados não foram propiciados pela astaxantina. No experimento 2 não houve diferença entre os tratamentos. Com isso, apesar de não se ter realizado a comparação entre os diluidores, pode-se inferir que possivelmente eles atuem de formas distintas. Conclui-se que a astaxantina, na concentração utilizada, quando adicionada aos diluidores à base de gema de ovo ou de lipossomas não reduz o estresse oxidativo e, portanto, não preserva a motilidade espermática e o potencial mitocondrial.pt
dc.description.abstractIn this study the object was to evaluate the supplementation with astaxanthin in commercials extenders for cryopreservation of bovine semen, based on egg york (Experimet 1) and based on liposome (Experimet 2) for motility, morphology, plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential and oxidative stress. Were used six Nelore bulls and seven ejaculates from each (N=42). Each ejaculate was divided to receive one of following treatmens: commercial extender (C-YOLK or C-LIPO), commercial extender supplemented with 0,5 µM astaxanthin (YOLK + AST or LIPO + AST) and commercial extender with 0,009% of dimethylsulfoxide (C-YOLK DMSO or C-LIPO DMSO). This last group was included as a negative control, since DMSO was the substance used to dissolve the astaxanthin. After dilution, the spermatozoa were submitted to the computerized sperm motility analysis system (CASA), as well to be analyzed for sperm morphology under differential interference contrast microscopy. After cryopreservation, sperm cells were reevaluated for sperm motility characteristics and morphology, besides measuring plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential and oxidative stress under flow cytometry. The results were expressed as mean ± standard error of the mean and were analyzed by ANOVA, using mixed model (PROC MIXED), considering the aleatory effect of ejaculate of each bull and fixed effects of treatment, bull and interaction. In experiment 1, spermatozoa from C-YOLK, YOLK + AST and C-YOLK DMSO groups showed the following results, respectively: progressive velocity (VSL) 79.2a ± 1.3, 75.3b ± 1.3 and 75.4b ± 1.3 (P = 0.02); beat frequency (BCF) 32.7a ± 0.4, 30.9b ± 0.4 and 31.3b ± 0.4 (P < 0.01); straightness (STR) 88.9a ± 0.3, 87.3b ± 0.4 and 87.5b ± 0.4 (P < 0.01); minor defects 2.4b ± 0.3, 3.2a ± 0.3, and 2.2b ± 0.2 (P = 0.01); and mean mitochondrial membrane potential intensity 9796.1a ± 495.5, 8028.3b ± 441.3, and 8732.8ab ± 370.7 (P = 0.04). The other characteristics did not differ between groups (P > 0.05). Unexpectedly, in the characteristics in which astaxanthin was above and below to the C-YOLK group, the results were similar to the C-YOLK DMSO, indicating that the observed effetcs were not caused by astaxanthin. In experiment 2 there was no difference between treatments. Thus, although there was no comparison between the extenders, it can be presumed that possibly they act in different ways. It is concluded that astaxanthin, at the concentration used, when added to egg yolk or liposome-based extenders does not reduce oxidative stress and, therefore, does not preserve sperm motility and mitochondrial potential.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipId88887.486991/2020-00
dc.identifier.capes33004102072P9
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/234898
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.subjectAntioxidantept
dc.subjectCarotenoidept
dc.subjectEstresse oxidativopt
dc.subjectGema de ovopt
dc.subjectLipossomaspt
dc.titleCriopreservação de sêmen bovino com dois diluentes comerciais suplementados com astaxantinapt
dc.title.alternativeCryopreservation of bovine semen with two commercial extenders supplemented with astaxanthinen
dc.typeDissertação de mestrado
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Jaboticabalpt
unesp.embargoOnlinept
unesp.examinationboard.typeBanca públicapt
unesp.graduateProgramMedicina Veterinária - FCAVpt
unesp.knowledgeAreaReprodução animalpt
unesp.researchAreaFatores que influenciam a eficiência das biotécnicas reprodutivas em bovinos.pt

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