Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina

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dc.contributor.authorIhlaseh, Shadia Muhammad [UNESP]
dc.contributor.authorOliveira, Maria Luiza Cotrim Sartor de [UNESP]
dc.contributor.authorSilva, Glenda Nicioli da [UNESP]
dc.contributor.authorFranchi, Carla Adriene da Silva [UNESP]
dc.contributor.authorCamargo, João Lauro Viana de [UNESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2014-05-20T13:37:45Z
dc.date.available2014-05-20T13:37:45Z
dc.date.issued2007-02-01
dc.description.abstractINTRODUÇÃO: Microdissecção e captura a laser (MCL) é uma técnica de desenvolvimento recente que permite a coleta de células individuais ou pequeno conjunto de células para análise molecular. Atualmente, no Brasil, há raros microscópios para MCL, de modo que a divulgação dos procedimentos inerentes a essa técnica é oportuna para destacar seu amplo potencial para diagnóstico e investigação. OBJETIVO: Este trabalho descreve a padronização dos procedimentos de MCL e de extração de DNA de material fixado em formalina e incluído em parafina. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados o éxon 8 do gene TP53 e o gene da ciclofilina em amostras de tecido normal e de neoplasias de fígado e rim provenientes de modelo de carcinogênese química induzida em rato. A extração do DNA foi comprovada por reação em cadeia da polimerase (nested-PCR). RESULTADOS: Foram padronizados os procedimentos de preparo dos cortes histológicos, de microdissecção e captura a laser e de obtenção de seqüências gênicas pela reação de nested-PCR para tecidos incluídos em parafina. Obtivemos amplificação de 48,3% das amostras para o éxon 8 do gene TP53 e 51,7% para o gene da ciclofilina. Considerando pelo menos um dos dois segmentos gênicos, foram amplificadas 79,3% das amostras. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: A extração de DNA de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina e a técnica de nested-PCR foram adequadamente padronizadas para produtos gênicos de interesse, obtidos de material coletado por MCL. Esses procedimentos podem ser úteis para a obtenção de seqüências de DNA de arquivos para análise molecular.pt
dc.description.abstractBACKGORUND: Laser-capture micro-dissection (LCM) is a recently developed procedure that provides single cells or specific cell groups for molecular analysis. Currently, there are few LCM systems in Brazil, in such a way that it is necessary to disseminate the technical procedures inherent to the methodology, and also to characterize its enormous potential for diagnosis and research. OBJECTIVE: This study describes the standardization of LCM and DNA extraction from formalin fixed and paraffin-embedded tissues. MATERIAL and METHOD: The gene TP53 exon 8 and the cyclophilin gene were studied in normal and neoplastic liver and kidney samples from a chemical carcinogenesis model in rat. DNA extraction was confirmed by nested-PCR. RESULTS: Histological sections preparation for LCM and the nested-PCR procedures were standardized; 48.3% amplifications of the gene TP53 exon 8 and 51.7% of the cyclophilin gene samples were obtained. When at least one of the gene segments was considered, 79.3% samples presented amplification. DISCUSSION and CONCLUSION: Procedures for DNA extraction from formalin fixed and paraffin-embedded tissues collected by LCM were standardized. They can be useful for DNA collection for molecular studies.en
dc.description.affiliationUniversidade Estadual Paulista Faculdade de Medicina de Botucatu Departamento de Patologia
dc.description.affiliationUnespUniversidade Estadual Paulista Faculdade de Medicina de Botucatu Departamento de Patologia
dc.format.extent61-67
dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.1590/S1676-24442007000100012
dc.identifier.citationJornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial. Sociedade Brasileira de Patologia ClínicaSociedade Brasileira de PatologiaSociedade Brasileira de Citopatologia, v. 43, n. 1, p. 61-67, 2007.
dc.identifier.doi10.1590/S1676-24442007000100012
dc.identifier.fileS1676-24442007000100012.pdf
dc.identifier.issn1676-2444
dc.identifier.scieloS1676-24442007000100012
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/13080
dc.language.isopor
dc.publisherSociedade Brasileira de Patologia ClínicaSociedade Brasileira de PatologiaSociedade Brasileira de Citopatologia
dc.relation.ispartofJornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial
dc.relation.ispartofsjr0,143
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.sourceSciELO
dc.subjectMicrodissecção e captura a laserpt
dc.subjectExtração de DNApt
dc.subjectNested-PCRpt
dc.subjectGene TP53pt
dc.subjectGene ciclofilinapt
dc.subjectBlocos de parafinapt
dc.subjectLaser-capture microdissectionen
dc.subjectDNA extractionen
dc.subjectnested-PCRen
dc.subjectTP53 Geneen
dc.subjectCiclophilin geneen
dc.subjectParaffin-embedded tissuesen
dc.titleMicrodissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafinapt
dc.title.alternativeLaser-capture microdissection for TP53 gene analysis in paraffin-embedded tissuesen
dc.typeArtigo
unesp.author.lattes9163387140787963[4]
unesp.author.orcid0000-0002-2830-2540[4]
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Medicina, Botucatupt

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