Avaliação dos danos ao DNA de linfócitos humanos tratados com Piper cubeba
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Data
2023-12-11
Autores
Orientador
Costa, Karine Assis 
Coorientador
Lisoni, Flávia Cristina Rodrigues
Pós-graduação
Curso de graduação
Ilha Solteira - FEIS - Ciências Biológicas
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
Abstract
The medicinal properties of Piper cubeba are known in traditional medicine due to its effectiveness in treating diseases such as syphilis, gonorrhea and some types of tumors. Some lignans present in this plant demonstrate the ability to reduce tumor cells, as well as antibacterial and hepatoprotective action. The Comet Assay is a primary method used to evaluate the genotoxicity of these lignans. This experiment involved eight treatments: a negative control (CN), a control using the solvent dimethylsulfoxide (DM) at 50 μg/ml, cyclophosphamide in two concentrations (50 μg/ml - CP1 and 100 μg/ml - CP2), and four treatments with lignans: cubebin (C), dihydrocubebin (D), ethylcubebin (E) and hinokinin (H), all at a concentration of 50 μg/ml. The concentrated extracts were provided by the Department of Physical Chemistry at FEIS/UNESP and subsequently diluted. Each treatment was evaluated at intervals of 4h, 24h, 48h and 72h, except for the cyclophosphamide groups, which were evaluated only at 72h. The main objective was to establish a standardized Comet Test protocol for human lymphocytes, aiming to evaluate the genotoxic potential of lignans, as well as the solvent dimethylsulfoxide. To conduct the experiment, blood was collected from a volunteer and the lymphocytes were cultured with RPMI 1640 culture medium, fetal bovine serum, penicillin, phytohemagglutinin and the substance to be analyzed, after centrifugation at the designated intervals, they were collected and the Comet protocol was applied. The statistical analysis Two Way ANOVA with repeated measures performed in the GraphPad Prism10 program and the Kruskal-Wallis test with a confidence level of 95% (P≥0.05), both revealed no significant differences between treatments. There were also no statistical differences observed within each treatment in the different time intervals analyzed. Such genotoxic effects were not expected, as according to other studies that used similar compounds, these effects were not proven. These results are important as they indicate that these lignans do not have genotoxic effects on lymphocytes, suggesting their safe medicinal use. Furthermore, the solvent dimethyl sulfoxide also did not demonstrate genotoxic effects, which is relevant, given its wide use as a solvent in experiments with other organic substances.
Resumo (inglês)
As propriedades medicinais da Piper cubeba são conhecidas na medicina tradicional devido à sua eficácia no tratamento de doenças como sífilis, gonorreia e alguns tipos de tumores. Algumas lignanas presentes nessa planta demonstram a capacidade de reduzir células tumorais, bem como ação antibacteriana e hepatoprotetora. O Ensaio Cometa é um método primário empregado para avaliar a genotoxicidade dessas lignanas. Esse experimento envolveu oito tratamentos: um controle negativo (CN), um controle utilizando o solvente dimetilsulfóxido (DM) a 50 μg/ml, a ciclofosfamida em duas concentrações (50 μg/ml - CP1 e 100 μg/ml - CP2), e quatro tratamentos com as lignanas: cubebina (C), dihidrocubebina (D), etilcubebina (E) e hinoquinina (H), todos na concentração de 50 μg/ml. Os extratos concentrados foram cedidos pelo Departamento de Físico-Química da FEIS/UNESP e posteriormente diluídos. Cada tratamento foi avaliado em intervalos de 4h, 24h, 48h e 72h, exceto os grupos com ciclofosfamida, que foram avaliados apenas no tempo de 72h. O objetivo principal foi estabelecer um protocolo padronizado do Teste do Cometa para linfócitos humanos, visando avaliar o potencial genotóxico das lignanas, bem como do solvente dimetilsulfóxido. Para conduzir o experimento, foi coletado sangue de um voluntário e os linfócitos foram cultivados com meio de cultura RPMI 1640, soro fetal bovino, penicilina, fito- hemaglutinina e a substância a ser analisada, após a centrifugação nos intervalos designados, foram coletados e o protocolo do Cometa foi aplicado. A análise estatística ANOVA Two Way com medidas repetidas executado no programa GraphPad Prism10 e o teste Kruskal-Wallis com nível de confiança de 95% (P≥0.05), ambos não revelaram diferenças significativas entre os tratamentos. Também não foram observadas diferenças estatísticas dentro de cada tratamento nos diferentes intervalos de tempo analisados. Tais efeitos genotóxicos não eram esperados, pois de acordo com outros estudos que utilizaram compostos semelhantes, esses efeitos não foram comprovados. Esses resultados são importantes pois indicam que essas lignanas não possuem efeitos genotóxicos nos linfócitos, sugerindo segurança em seu uso medicinal. Além disso, o solvente dimetilsulfóxido também não demonstrou efeitos genotóxicos, o que é relevante, visto seu amplo uso como solvente em experimentos com outras substâncias orgânicas.
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português
Como citar
BARBOZA, Kelly Costa. Avaliação dos danos ao DNA de linfócitos humanos tratados com Piper cubeba. Orientadora: Karine Assis Costa. Coorientadora: Flávia Cristina Rodrigues Lisoni. 2023. 76f. : il. Trabalho de conclusão de curso (Graduação em Ciências Biológicas), Universidade Estadual Paulista (UNESP), Faculdade de engenharia, Ilha Solteira, 2023. Disponível em: URL. Acesso em: dia, mês e ano.