Detecção e caracterização molecular de cryptosporidium spp. em canários (serinus canaria) mantidos em cativeiro por meio de diferentes métodos de diagnóstico

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dc.contributor.advisorMeireles, Marcelo Vasconcelos
dc.contributor.advisorNakamura, Alex Akira
dc.contributor.authorCamargo, Vinicius da Silva
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2018-02-07T13:04:54Z
dc.date.available2018-02-07T13:04:54Z
dc.date.issued2017-12-15
dc.description.abstractEste trabalho teve como objetivos determinar a ocorrência e realizar a caracterização molecular de Cryptosporidium spp. e comparar três métodos de detecção deste protozoário em amostras fecais de canários (Serinus canaria) criados em cativeiro nas regiões Sul e Sudeste do Brasil. Um total de 498 amostras foi purificado por centrífugo-flutuação em solução de Sheather. A detecção de Cryptosporidium spp. foi realizada utilizando três métodos de diagnóstico: análise microscópica pela coloração negativa com verde malaquita, nested PCR (gene 18S rRNA), seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados, e PCR em duplex em tempo real (gene 18S rRNA) específica para detecção de Cryptosporidium galli e Cryptosporidium genótipo III de aves. A positividade para Cryptosporidium spp. (total de amostras positivas em pelo menos um método de diagnóstico) obtida pela análise microscópica, nested PCR e PCR duplex em tempo real foi de 13,3% (66/498). As taxas de positividade para Cryptosporidium spp. foram 2,0% (10/498) e 4,6% (23/498) por microscopia e nested PCR, respectivamente. O sequenciamento de 20 amostras amplificadas pela nested PCR identificou C. galli (3,0%;15/498), Cryptosporidium genótipo I de aves (0,8%; 4/498) e Cryptosporidium avium (0,2%; 1/498). A PCR duplex em tempo real revelou positividade de 7,8% (39/498) para C. galli e 2,4% (12/498) para Cryptosporidium genótipo III de aves. A análise microscópica diferiu significativamente da nested PCR para detecção de Cryptosporidium spp. A PCR duplex em tempo real apresentou maior sensibilidade que a nested PCR/sequenciamento para detectar as espécies/genótipos gástricos de Cryptosporidium.pt
dc.description.abstractThis study used several diagnostic methods to examine the occurrence of and molecularly characterize Cryptosporidium spp. in captive canaries (Serinus canaria) in southern and southeastern Brazil. A total of 498 samples were purified by centrifugal-flotation using Sheather's solution. Cryptosporidium spp. diagnosis was performed using three diagnostic methods: malachite green negative staining, nested PCR targeting the 18S rRNA gene, followed by sequencing the amplified fragments, and duplex real-time PCR targeting the 18S rRNA specific to detect Cryptosporidium galli and Cryptosporidium avian genotype III. The overall positivity for Cryptosporidium spp. (total samples positive in at least one protocol) from the microscopic analysis, nested PCR and duplex real-time PCR protocol results was 13.3% (66/498). The positivity rates were 2.0% (10/498) and 4.6% (23/498) for Cryptosporidium spp. by microscopy and nested PCR, respectively. Sequencing of 20 samples amplified by nested PCR identified C. galli (3.0%; 15/498), Cryptosporidium avian genotype I (0.8%; 4/498) and Cryptosporidium avium (0.2%; 1/498). Duplex real-time PCR revealed a positivity of 7.8% (39/498) for C. galli and 2.4% (12/498) for avian genotype III. Malachite green negative staining differed significantly from nested PCR in detecting Cryptosporidium spp.. Duplex real-time PCR was more sensitive than nested PCR/sequencing for detecting gastric Cryptosporidium in canaries.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.description.sponsorshipIdFAPESP: 15/26334-8
dc.identifier.aleph000896642
dc.identifier.capes33004021075P8
dc.identifier.lattes0903513897615274
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/152687
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.relation.isnodouble182029*
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.subjectCriptosporidiosept
dc.subjectavespt
dc.subjectReação em cadeia da polimerasept
dc.subjectEpidemiologiapt
dc.subjectBirdsen
dc.subjectcryptosporidiosisen
dc.subjectPolymerase chain reactionen
dc.subjectepidemiologyen
dc.titleDetecção e caracterização molecular de cryptosporidium spp. em canários (serinus canaria) mantidos em cativeiro por meio de diferentes métodos de diagnósticopt
dc.title.alternativeDetection and characterization of cryptosporidium spp. In canaries (serinus canaria) kept in captivity using different diagnosis methodsen
dc.typeDissertação de mestrado
unesp.author.lattes0903513897615274
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Medicina Veterinária, Araçatubapt
unesp.embargoOnlinept
unesp.graduateProgramCiência Animal - FMVApt
unesp.knowledgeAreaMicrobiologiapt
unesp.researchAreaEpidemiologia, Etiopatogenia, diagnóstico e controle das enfermidades dos animaispt

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