Efeito imunomodulador da vitamina D e silibinina sobre subpopulações de células T CD4+ em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Abstract

Vitamin D (VD) is a multifunctional prohormone and low VD status in pregnancy may contribute to the risk of adverse perinatal outcomes, such as preeclampsia (PE). This molecule may modulate the polarization of T cell subsets during gestation. This study evaluated the in vitro immunomodulatory effect of VD on the gene expression of transcription factors and on cytokine production by T cell subsets. Twenty pregnant women with PE and twenty normotensive (NT) pregnant women were studied. Plasma concentration of VD, 25(OH)D3, was evaluated by chemiluminescence. PBMCs from preeclamptic and NT pregnant women were cultured in the absence or presence of VD to determine gene expression of T-bet (Th1), GATA-3 (Th2), RORγt, and Runx1 (Th17), FoxP3 (regulatory T cell- Treg), and the receptors of VD (VDR) and IL-23 (IL-23R) by quantitative PCR. The concentration of cytokines in the PBMC supernatant culture was determined by cytometric bead array and ELISA immunoassay. The results showed that plasmatic levels of VD were significantly lower in the PE group. The treatment of PBMCs from preeclamptic women with VD induced downregulation of genes related to inflammatory profiles (Th1 and Th17), as well as an increase of anti-inflammatory and regulatory profiles (Th2 and Treg). Thus, VD treatment decreased the release of TNF-α, IL-17, IL-6, and IL-23 while it increased the levels of IL-10 in the PE group. VD induces an immunomodulatory effect in T cell subsets from pregnant women with PE, polarizing these cells to an anti-inflammatory and regulatory profile

Na pré-eclâmpsia (PE) ocorre um estado de má adaptação da tolerância imunológica, caracterizado por ativação anormal do sistema imune inato e adaptativo. A ocorrência de uma resposta inflamatória sistêmica parece ser devida ao desbalanço das subpopulações de células T CD4, causado por aumento do número de células de perfis inflamatórios T helper 1 (Th1) e Th17 e diminuição das células características dos perfis anti-inflamatório e regulador, Th2 e T reg respectivamente. Portanto, o desbalanço entre as subpopulações de células T pode ser crítico para a tolerância ao feto e para prevenção da PE. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito imunomodulador, in vitro, da vitamina D (VD) e da silibinina (SB) sobre células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de gestantes pré-eclâmpticas, com ênfase em subpopulações de células Th. Foram estudadas 20 gestantes portadoras de PE e 20 gestantes normotensas (NT), pareadas pela idade gestacional. Sangue periférico foi obtido das gestantes de ambos os grupos para determinação da concentração plasmática de VD [25(OH)D]. O efeito imunomodulador da VD e da SB sobre as subpopulações de células T CD4+ (Th1, Th2, Th17 e Treg) foi avaliado quanto à expressão dos transdutores de sinal e ativadores de transcrição (STATs) para as células Th1 (STAT1 e STAT4), Th2 (STAT6), Th17 (STAT3) e Treg (STAT5) e dos fatores de transcrição intracelulares para células Th1 (T-bet), Th2 (GATA-3), Th17 (RORγt e Runx1) e Treg (FoxP3) por PCR quantitativo (qPCR) e/ou citometria de fluxo. As citocinas relacionadas às subpopulações de células Th, as pró-inflamatórias, IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-17, IL-22 e IL-23 e as anti-inflamatórias IL-10 e TGF-β, produzidas por PBMCs de gestantes pré-eclâmpticas e NT foram determinadas pelos métodos de cytometric bead array (CBA) e/ou Elisa. De maneira geral, os resultados mostraram que o tratamento in vitro com VD e SB é capaz de modular o desbalanço das subpopulações de células T presente na PE, diminuindo os fatores de transcrição, os ativadores de transcrição e citocinas característicos dos perfis inflamatórios e aumentando os relacionados aos perfis anti-inflamatório e regulador. Assim, o entendimento da modulação das subpopulações de células T por agentes com ações imunomoduladoras e anti-inflamatórias, como VD e SB, poderá contribuir para a melhor compreensão do envolvimento da imunidade adaptativa na fisiopatologia da PE e possivelmente propor formas alternativas para o tratamento dessa importante patologia da gestação.