Efeitos da edição de ebv-miR-BARTs do vírus de Epstein-Barr em vias do checkpoint imune e linfomagênese em células de Linfoma de Burkitt.

Abstract

O presente trabalho apresenta sobre os efeitos da edição de ebv-miR-BARTs do vírus de Epstein-Barr em vias do checkpoint imune e linfomagênese em células de Linfoma de Burkitt. O objetivo será investigar os efeitos da supressão de miRNAs virais em linhagens de células humanas infectadas pelo EBV (genoma selvagem ou editado) em relação a diferentes parâmetros avaliados in vitro, tais como migração, clonogênese e expressão de genes do checkpoint imune. Para este presente trabalho foram usadas amostras para os experimentos da linhagem de células Akata-Cas9, ocorreu a extração do DNA e as linhagens de células EBV que foram positivas, foram submetidas à extração de RNA. As amostras foram tratadas para RT-PCR e, delas, foi produzido o cDNA. Na etapa de clonagem, foram usados construtos para a expressão de RNAs guias dirigidos aos miR-BART-7 e miR-BART-9. O vetor foi purificado e utilizado para a transformação da bactéria DH5α, uma cepa de E. coli. As colônias antibiótico resistente foram crescidas e submetidas à PCR colony e sequenciamento. Com base nestas informações, espera-se ao final deste estudo contribuir no entendimento da importância dos miR-BARTs 7 e 9 do EBV na manutenção do fenótipo maligno e modulação de vias de sinalização intracelular envolvidas na linfomagênese.

The present work presents the effects of editing Epstein-Barr virus ebv-miR-BARTs on immune checkpoint pathways and lymphomagenesis in Burkitt's lymphoma cells. The objective will be to investigate the effects of suppression of viral miRNAs in human cell lines infected by EBV (wild-type or edited genome) in relation to different parameters evaluated in vitro, such as migration, clonogenesis and expression of immune checkpoint genes. For this present work, samples were used for the experiments of the Akata-Cas9 cell line, DNA extraction took place and the EBV cell lines that were positive were subjected to RNA extraction. The samples were treated for RT-PCR and, from them, the cDNA was produced. In the cloning step, constructs for the expression of guide RNAs directed to miR-BART-7 and miR-BART-9 were used. The vector was purified and used for the transformation of DH5α bacteria, a strain of E. coli. Antibiotic resistant colonies were grown and subjected to colony PCR and sequencing. Based on this information, the end of this study is expected to contribute to the understanding of the importance of EBV miR-BARTs 7 and 9 in maintaining the malignant phenotype and modulation of intracellular signaling pathways involved in lymphomagenesis.