Avaliação da ação antineoplásica da crotoxina sobre linhagem de câncer de próstata canino

Abstract

Crotoxin is one of the main toxins found in the rattlesnake Crotalus durissus terrificus' venom, with antineoplastic and immunomodulatory activity. This study aimed to purify crotoxin and evaluate its antitumor action on the canine prostate cancer cell line PC1 in vitro. Prostate cancer is the most commonly diagnosed cancer in men in more than 100 countries, also affecting other animal species. Current therapies have several adverse effects on patients. Thus, investigating crotoxin as an antineoplastic agent may be advantageous, since it is selective for tumor cells rather than healthy cells. The canine species represents a model for human cancer studies due to factors such as genetic variability, exposure to common environmental factors, biological and morphological tumor characteristics in common with human tumors, and spontaneous development of neoplasms. Therefore, this study seeks to provide relevant results for both veterinary and human medicine. For this purpose, the cell line was cultivated in vitro. Initially, different concentrations (250 µg/mL, 125 µg/mL, 62,5 µg/mL, 31,25 µg/mL, 15,62 µg/mL e 7,8 µg/mL) of crotoxin were tested through the MTT colorimetric assay, analysis of which allowed the calculation of the IC50 inhibitory concentration (85,52 µg/mL), used in subsequent experiments. The Wound Healing and Transwell assays were performed to analyze the ability to inhibit cell migration, with statistically significant ability detected in the second assay. Flow cytometry was performed to analyze the ability to induce apoptosis. Crotoxin was able to reduce cell viability in a concentration-dependent manner and was effective in inhibiting cell migration. However, no significant induction of apoptosis was observed after treatment for 24 hours with the calculated IC50 concentration. Further experiments are therefore necessary to provide a more robust understanding of the mechanisms of action of crotoxin on this cell line, especially regarding the induction of cell death.

A crotoxina é uma das principais toxinas encontradas no veneno da cascavel *Crotalus durissus terrificus*, apresentando atividade antineoplásica e imunomoduladora; este estudo teve como objetivo purificar a crotoxina e avaliar sua ação antitumoral, in vitro, sobre a linhagem de câncer prostático PC1 de origem canina. O câncer de próstata é o tipo mais comumente diagnosticado em homens em mais de cem países, afetando também outras espécies animais, e as terapias atuais apresentam diversos efeitos adversos ao paciente. Nesse contexto, o estudo da crotoxina como agente antineoplásico pode trazer vantagens, uma vez que a toxina apresenta seletividade por células tumorais em detrimento de células saudáveis. A espécie canina representa um importante modelo para estudos do câncer em humanos devido à variabilidade genética, à exposição a fatores ambientais em comum, às características tumorais biológicas e morfológicas semelhantes e ao desenvolvimento espontâneo de neoplasias, o que torna os resultados relevantes tanto para a medicina veterinária quanto para a humana. Para isso, a linhagem celular foi cultivada in vitro e submetida a diferentes concentrações de crotoxina (250 µg/mL, 125 µg/mL, 62,5 µg/mL, 31,25 µg/mL, 15,62 µg/mL e 7,8 µg/mL), avaliadas pelo teste colorimétrico MTT, cuja análise permitiu o cálculo da concentração inibitória IC50 (85,52 µg/mL), utilizada nos experimentos subsequentes. Os ensaios Wound Healing e Transwell foram empregados para análise da capacidade de inibição da migração celular, sendo observada significância estatística no segundo ensaio, enquanto a citometria de fluxo foi utilizada para avaliar a indução de apoptose. Os resultados demonstraram que a crotoxina reduz a viabilidade celular de forma concentração-dependente e é eficaz na inibição da migração celular; entretanto, não foi observada indução expressiva de apoptose a partir da concentração IC50 após 24 horas de tratamento. Assim, torna-se necessária a realização de novos experimentos para elucidar, com maior robustez, os mecanismos de ação da crotoxina sobre essa linhagem celular, especialmente no que se refere à indução de morte celular.