Efeitos da superexpressão da calreticulina na apoptose e proliferação de células displásicas

Abstract

A calreticulina (CRT) é uma proteína multifuncional do retículo endoplasmático envolvida na homeostase do cálcio, dobramento proteico e sinalização celular. Alterações em sua expressão têm sido associadas a processos de carcinogênese, incluindo regulação da apoptose e da proliferação celular. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da superexpressão de CRT sobre a apoptose e a proliferação de queratinócitos orais displásicos. A linhagem celular DOK foi transduzida com vetor lentiviral para indução de superexpressão estável de CRT e seleção por puromicina. A apoptose foi avaliada após exposição à radiação ultravioleta por meio de anexina-V/7-AAD e citometria de fluxo. A viabilidade e proliferação foram analisadas por ensaio de MTT em diferentes dias, e a distribuição do ciclo celular determinada por iodeto de propídio. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e submetidos a análise estatística (p<0,05). A superexpressão de CRT foi confirmada por qRT-PCR e Western blot. Observou-se redução significativa das proporções de apoptose precoce e tardia nas células DOK-CRT em comparação ao controle após estímulo por radiação UV. O ensaio de MTT demonstrou diminuição do sinal no grupo DOK-CRT no sétimo dia (p = 0,039), sugerindo alteração tardia na viabilidade/metabolismo. Contudo, não foram encontradas diferenças significativas na distribuição das fases do ciclo celular. A superexpressão de CRT confere tolerância ao estresse genotóxico em queratinócitos displásicos por efeito antiapoptótico. O impacto observado na viabilidade celular indica possíveis alterações metabólicas, cuja investigação adicional poderá esclarecer mecanismos envolvidos e potenciais implicações terapêuticas.

Calreticulin (CRT) is a multifunctional endoplasmic reticulum protein involved in calcium homeostasis, protein folding, and cell signaling. Altered expression of CRT has been associated with carcinogenic processes, including the regulation of apoptosis and cell proliferation. The aim of this study was to evaluate the effects of CRT overexpression on apoptosis and proliferation of dysplastic oral keratinocytes. The DOK cell line was transduced with a lentiviral vector to induce stable CRT overexpression and selected with puromycin. Apoptosis was assessed after ultraviolet radiation exposure using annexin-V/7-AAD and flow cytometry. Cell viability and proliferation were analyzed by MTT assay at different time points, and cell cycle distribution was determined by propidium iodide staining. All experiments were performed in triplicate and subjected to statistical analysis (p<0.05). CRT overexpression was confirmed by qRT-PCR and Western blot. A significant reduction in early and late apoptosis was observed in DOK-CRT cells compared with controls after UV stimulation. The MTT assay showed decreased signal in the DOK-CRT group on day 7 (p = 0.039), suggesting late alterations in viability/metabolism. However, no significant differences were detected in cell cycle distribution. In conclusion, CRT overexpression confers tolerance to genotoxic stress in dysplastic keratinocytes through an anti-apoptotic effect. The observed impact on cell viability indicates potential metabolic alterations, which warrant further investigation to elucidate the underlying mechanisms and therapeutic implications.