Análises espermáticas em truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss) (Walbaum, 1792): Caracterização e padronização de configurações para o CASA/ImageJ

Abstract

A truta arco-íris é um peixe da família dos salmonídeos que habita rios e riachos com baixa temperatura. Diversas técnicas reprodutivas podem ser empregadas em laboratório para otimização da reprodução, entre elas, análises de gametas utilizando softwares CASA são comumente utilizadas. Porém, para ser assertiva, necessita-se de padronização de configurações específicas para a espécie. Nesse sentido, objetivou-se determinar as configurações para a análise espermática computadorizada utilizando CASA/ImageJ para a espécie. Para tanto, utilizou-se sêmen proveniente de dezesseis machos da coloração padrão, da linhagem landlocked mantidos em cativeiro. As amostras foram devidamente ativadas para a captura do movimento espermático por meio de vídeos (100 fps), aos quais foram editados, cortados e utilizados como base de dados para uma sequência de testes. Em seguida, realizou-se a classificação do movimento espermático, combinações de velocidades mínimas para detecção de células progressivas, máxima velocidade entre frames, quantidade de frames e o tempo de movimento dos espermatozoides. De acordo com a classificação das células espermáticas evidenciou-se as quatro categorias para VCL (µm/s): rápidos >150; intermediários>70; lentos>25; estáticos <25 e predominância de movimentos circulares das células. A partir disso, concluise que as análises espermáticas computadorizadas utilizando o software de código aberto ImageJ devem ser realizadas considerando-se as velocidades mínimas de 3, 6 e 25 (µm/s) para VSL, VAP e VCL, respectivamente, para a análise de 100 frames entre 5 e 6 segundos pós-ativação

The rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) is a salmonid species that inhabits rivers and streams with low temperatures. Various reproductive techniques can be employed in laboratory settings to optimize breeding, among which gamete analyses using CASA software are commonly applied. However, to achieve accurate results, it is necessary to standardize species-specific settings. In this context, the present study aimed to determine the optimal configurations for computer-assisted sperm analysis using CASA/ImageJ for this species. For this purpose, semen was collected from sixteen males of the standard coloration, landlocked lineage, maintained in captivity. The samples were properly activated to capture sperm motility through video recordings (100 fps), which were subsequently edited and used as a database for a sequence of tests. Sperm motility classification was then performed, including combinations of minimum velocities for progressive cell detection, maximum velocity between frames, number of frames, and sperm movement duration. According to sperm cell classification, four VCL (µm/s) categories were observed: fast >150, intermediate >70, slow >25, and static <25, with a predominance of circular cell movements. Based on these results, it is concluded that computer-assisted sperm analyses using the open-source software ImageJ should be conducted considering minimum velocities of 3, 6, and 25 µm/s for VSL, VAP, and VCL, respectively, analyzing 100 frames between 5- and 6- seconds post-activation.