Caracterização de folículos ovarianos de Astyanax altiparanae submetidos à indução hormonal in vitro com diferentes agentes indutores

Abstract

A aquicultura só é possível graças aos métodos de produção de formas jovens em cativeiro. Para as espécies nativas, que representam cerca de 30% da produção piscícola nacional, a hipofisação (método mais usado) apresenta muitas falhas e o uso de produtos sintéticos está longe de ser uma realidade nos empreendimentos que produzem alevinos. As razões para estas falhas estão em início de elucidação e uma forma de avançar neste tema seria o desenvolvimento de estudos in vitro isolando variáveis e usando os mesmos indutores hormonais usados in vivo. Neste contexto, desenvolvemos anteriormente um experimento para avaliar o efeito de duas substâncias potentes indutoras de ovulação: o 17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP) e a prostaglandina F2α (PGF2α). Observamos que todos os tratamentos que incluíam 1ug DHP mL com ou sem associação com distintas doses de PGF2α apresentaram ovulação bem-sucedida; mas de forma surpreendente, o tratamento com 5000ng PGF2α mL foi capaz de induzir a ovulação independentemente do uso de DHP. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar histologicamente e por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET) as características dos ovócitos de cada tratamento. Neste experimento, foram utilizados fragmentos de ovário de cinco fêmeas maduras e tratadas com diferentes doses de DHP e PGF2α em meio de cultura Leibovitz L-15. Todos os grupos, incluindo os controles, receberam a 1ª dose convencional in vivo de extrato bruto de hipófise de carpa EBHC (0.6 mg. Kg-1EBHC) e os folículos ovarianos foram processados para análise histológica, MEV e MET. As observações por histologia, MEV e MET confirmaram os achados obtidos por análise em líquido de Serra e permitiram conclusões mais aprofundadas. Nos tratamentos que envolveram o uso de DHP, os ovócitos eram predominantemente do tipo GVBD, com vesícula germinativa migrada e rompida, o mesmo sendo observado no tratamento que envolveu 5000ng PGF2α mL. O presente estudo confirmou a eficiência dos tratamentos com DHP associado com distintas doses de PGF2α mL ou 5000ng PGF2α mL foram capazes de induzir a maturação final e ovulação em folículos de a. altiparanae. Enquanto os controles e as doses de PGF2α mL inferiores a 500ng mL foram incapazes de induzir estes processos

Aquaculture is only possible thanks to methods for producing juvenile forms in captivity. For native species, which account for about 30% of national fish production, hypophysation (the most widely used method) presents many failures, and the use of synthetic products is still far from becoming a reality in hatchery enterprises. The reasons for these failures are just beginning to be elucidated, and one way to advance this topic would be through in vitro studies that isolate variables and use the same hormonal inducers applied in vivo. In this context, we previously developed an experiment to evaluate the effect of two potent ovulation-inducing substances: 17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP) and prostaglandin F2α (PGF2α). We observed that all treatments including 1 μg DHP/mL, with or without association with different doses of PGF2α, showed successful ovulation; however, surprisingly, the treatment with 5000 ng PGF2α/mL was able to induce ovulation independently of DHP. Thus, the objective of this study was to evaluate histologically and through scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) the characteristics of oocytes from each treatment. In this experiment, ovarian fragments from five mature females were treated with different doses of DHP and PGF2α in Leibovitz L-15 culture medium. All groups, including controls, received the first conventional in vivo dose of crude carp pituitary extract (CPE) (0.6 mg·kg⁻¹ CPE), and ovarian follicles were processed for histological, SEM, and TEM analyses. Observations by histology, SEM, and TEM confirmed the findings obtained through Serra's fluid analysis and provided more in-depth conclusions. In treatments involving DHP, oocytes were predominantly of the GVBD type, with migrated and broken germinal vesicles, the same being observed in the treatment with 5000 ng PGF2α/mL. This study confirmed the effectiveness of treatments with DHP associated with different doses of PGF2α or 5000 ng PGF2α/mL in inducing final maturation and ovulation in a. altiparanae follicles, while controls and PGF2α doses below 500 ng/mL were unable to induce these processes.