Caracterização do Pythium insidiosum por abordagem proteômica

Abstract

Pythiosis, whose etiologic agent is the oomycete Pythium insidiosum, is a disease that affects several animal species, including human, being more prevalent in horses. The disease has difficult diagnosis and treatment. Studies on protein characterization of P. insidiosum are scarce. The objective of this study was to determine the protein profile of Pythium insidiosum by mass spectrometry and bioinformatics strategies aiming to identify virulence factors. To this end, an extraction was standardized technique of total proteins of P. insidiosum, which were quantitated. From the protein extraction protocol it was obtained the profile of proteins expressed by the oomycete P. insidiosum through analysis by two-dimensional electrophoresis. The gels had 186 spots analyzed with molecular weight 12-89 kDa and an isoelectric point of 4-7, 103 of these were cut and sequenced. A total of 36 proteins were identified and grouped according to their functions, six of them were classified as proteins related to virulence - β 1,3 glucan synthase, Hsp 70, enolase, peroxiredoxin 2, G protein and the proteasome β unit. The results of this work will contribute to better understanding of the pathogenic mechanisms of P. insidiosum as well as for further studies in the therapeutic field and diagnosis.

A pitiose, cujo agente etiológico é o oomiceto Pythium insidiosum, é uma doença que acomete diversas espécies animais, incluindo-se a humana, sendo mais prevalente em equinos. A doença é de difícil diagnóstico e tratamento. Estudos sobre a caracterização proteica de P. insidiosum são escassos. O objetivo deste estudo foi determinar o perfil proteico de Pythium insidiosum por meio da estratégia espectrometria de massas e bioinformática, a fim de identificar fatores de virulência. Para isso, foi padronizada uma técnica de extração de proteínas totais de P. insidiosum, as quais foram quantificadas. A partir do protocolo de extração de proteínas foi obtido o perfil das proteínas expressas pelo oomiceto P. insidiosum por meio da análise por eletroforese bidimensional. Os géis analisados apresentaram 186 spots com massa molecular de 12 a 89 KDa, e ponto isoelétrico entre 4-7, destes 103 foram recortados e sequenciados. Um total de 36 proteínas foram identificadas e agrupadas de acordo com suas funções, seis delas foram classificadas como proteínas relacionadas à virulência - β 1,3 glucano sintetase, Hsp 70, enolase, peroxirredoxina 2, proteína G e proteassoma unidade β. Os resultados do presente trabalho contribuirão para o melhor entendimento dos mecanismos patogênicos de P. insidiosum, bem como para novos estudos no campo terapêutico e diagnóstico.