Botucatu - IBB - Instituto de Biociências
URI Permanente para esta coleçãohttps://hdl.handle.net/11449/253951
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ItemDissertação de mestrado Matriz polimérica extracelular bacteriana: explorando a decomposição enzimática por glicosidases em biofilmes de Escherichia coli(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-08-01) Porfirio, Julia Caroline
; Oliveira Neto, Mario de ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) Atualmente, a resistência bacteriana demonstra-se como um grande problema para a saúde pública, isso ocorre uma vez que, as bactérias anteriormente suscetíveis aos tratamentos por antibióticos, não respondem mais a esses agentes. Considerando apenas a resistência antimicrobiana, o número estimado de mortes poderá aumentar para mais de 10 milhões de mortes/ano até 2050. Os microrganismos multirresistentes são capazes de criar mecanismos que interrompem a ação de antibióticos, entre eles, destaca-se o grupo intitulado ESKAPEE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp. e Escherichia coli). O biofilme bacteriano é uma arquitetura complexa onde os patógenos florescem e propagam-se na forma aderida à superfície. As bactérias nestes arranjos aproveitam-se de diversos benefícios como a proteção contra sinais ambientais (oxigênio, pH e temperatura) e agentes nocivos. Como foco deste projeto, foi realizado o estudo de enzimas com potencial na degradação de exopolissacarídeos de biofilmes de Escherichia coli 042. As enzimas identificadas com altas porcentagens na degradação e também na prevenção da formação de biofilmes, foram combinadas com o antibiótico ampicilina. Para a metodologia utilizou-se 3 enzimas diferentes, sendo elas: (i) Beta glicosidase da família GH1, proveniente do organismo Saccharophagus degradans (SdBgl1b); (ii) dispersina B pertencente a família GH20, proveniente do organismo Actinobacillus actinomycetemcomitans (DspB) e (iii) a protease papaína. A utilização das enzimas em conjunto com o antibiótico demonstrou valores reduzidos na caracterização do biofilme de Escherichia coli 042 através da técnica de unidades formadoras de colônia (CFU), esse resultado representa-se como algo positivo para o estudo, o mesmo sugere que as enzimas foram capazes de deteriorar o biofilme de E. coli permitindo assim a ação do antibiótico. Para a análise através da coloração de cristal violeta, a papaína comercial apresentou uma degradação de 93% na concentração de 1 mg/ml e a enzima DspB uma inibição de 89% na concentração de 0,03125 mg/ml.ItemDissertação de mestrado Avaliação da eficácia de RNAs de interferência para o manejo de pragas(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-11-29) Affonso, Pedro Henrique de Andrade; Souza-Neto, Jayme Augusto de ; Velini, Edivaldo Domingues ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) O manejo de pragas é essencial para garantir não somente a produtividade e a qualidade dos cultivos agrícolas, mas também a biodiversidade nativa, uma vez que também é utilizado para o controle de espécies invasoras. No Brasil, visando um maior custo-benefício à curto prazo, utiliza-se massivamente o controle químico como principal forma de manejo de pragas. Este controle consiste na aplicação de químicos, como inseticidas, herbicidas e fungicidas. No entanto, o uso excessivo de agroquímicos pode levar, a longo prazo, ao surgimento de pragas cada vez mais resistentes, além de causar impactos negativos na saúde humana e no meio ambiente. Apesar das formas controle alternativas como o controle biológico e mecânico sejam ambientalmente mais sustentáveis, ainda não são capazes de substituir integralmente o método de controle químico, principalmente em culturas extensivas. A partir dessa problemática, recentemente tem crescido uma nova abordagem. A via de RNAi, é conservada em todos os eucariontes e é normalmente utilizada pelo próprio organismo como uma forma de regular a expressão de genes. Como forma de manejo, baseia-se no reconhecimento de moléculas efetoras desta via, os siRNAs ou dsRNAs, construídos especificamente para atingir a expressão de genes que resultem na diminuição populacional da espécie-alvo. O objetivo dessa dissertação é, portanto, encontrar e avaliar potenciais transcritos-alvos relacionados com a sobrevivência de pragas vegetais e na degradação de agroquímicos em Spodoptera frugiperda. O estudo utilizou Glycine max como espécie modelo pragas vegetais, trazendo como alvo dois genes, GmA1 e GmA2, comuns á indústria de herbicidas. O silenciamento do gene GmA1, contraintuitivamente resultou em sua superexpressão nos dois dias avaliados. Enquanto GmA2 demonstrou alta suscetibilidade ao silenciamento durante o mesmo período. Já os resultados de translocação em plantas, indicaram que o efetor de dsRNA não foi capaz de se translocar para tecidos aos quais ele não foi aplicado, como caule, raízes e folhas secundárias. Por fim, para os ensaios com Spodoptera frugiperda, foram idealizados cinco alvos relacionados a detoxificação de diferentes classes de defensivos agroquímicos, SfA1, SfA2, SfA3, SfA4 e SfA5. Entretanto, apenas a expressão basal do gene SfA2 foi alta o suficiente para permitir a continuidade do silenciamento. O gene SfA2, apresentou altos níveis de modulação negativa durante o primeiro dia pós-microinjeção dos dsRNAs, seguida por modulações divergentes, a depender do instar larval, até o quarto dia, quando a sua expressão retornou aos níveis basais. O comportamento de silenciamento das expressões de GmA2 em Glycine max e SfA2 em Spodoptera frugiperda, sugerem se tratar de genes com um alto potencial para esta abordagem, visando o manejo integrado em pragas; ainda que, haja a necessidade de estudos mais aprofundados em excipientes e coadjuvantes que confiram maior propriedades de absorção, resistência a degradação, entre outras características, para viabilizar sua aplicação prática em campo e no desenvolvimento comercial de produtos.ItemDissertação de mestrado Distribuição espaço-temporal da espécie limnoperna fortunei (Dunker, 1857) (mexilhão-dourado) nos reservatórios hidrelétricos da bacia do rio Paranapanema (SP/PR)(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-08-30) Silva, Savio de Oliveira; Nogueira, Marcos Gomes ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) As invasões biológicas estão entre as maiores causas de perda de biodiversidade no mundo atualmente e trata-se, basicamente, da introdução de espécies não-nativas em comunidades fora do seu local de origem. Seus impactos podem ser facilmente perceptíveis em ecossistemas aquáticos continentais, por serem ambientes com alto grau de endemismos, facilidade de dispersão e variações hidrodinâmicas, o que os tornam sensíveis à processos de invasão. Uma das espécies de grande importância ambiental atualmente, é o bivalve Limnoperna fortunei, popularmente conhecido como mexilhão-dourado, que desde a década de 1990, invadiu diversos rios da América do Sul. O objetivo geral deste estudo foi avaliar a dinâmica populacional dessa espécie nos oito maiores reservatórios hidrelétricos, em um sistema de cascata, do rio Paranapanema, entre os estados brasileiros de São Paulo e Paraná. Para isso, amostras de indivíduos larvais, medições de variáveis físico-químicas referentes à limnologia/qualidade de água e dados hidrodinâmicos foram obtidos em trechos lóticos, semi-lóticos e lênticos de cada reservatório nos meses de fevereiro e outubro, que consistem em períodos com picos reprodutivos da espécie em águas neotropicais, entre os anos de 2013 e 2022, e submetidos a testes estatísticos. Os dados indicam que a espécie estudada se encontra totalmente estabelecida na bacia do rio Paranapanema, sendo encontrada em todos os anos e em todos os reservatórios. Sua dinâmica é complexa, apresentando uma elevada e rápida variabilidade espaço-temporal. Ao longo dessa série histórica, foram encontradas densidades médias larvais semelhantes nos dois períodos sazonais amostrados. Reservatórios do tipo acumulação apresentaram concentrações médias um pouco mais elevadas que os de fio d’água. Já em relação aos compartimentos de cada reservatório, não foi observado padrão e todos os trechos apresentaram densidades semelhantes em todo período. Todavia, os maiores picos totais de larvas ocorreram nos trechos lóticos. As análises estatísticas evidenciaram que, para a área estudada, as variáveis condutividade elétrica, pH, transparência da água, quantidade de cianobactérias, nível altimétrico, volume de reservatório e vazão defluente estão correlacionadas negativamente com as populações de L. fortunei, enquanto nível e tempo de residência tiveram relação positiva.ItemDissertação de mestrado Miologia comparada de representantes do gênero Amphisbaena Linnaeus, 1758 (Squamata, Amphisbaenidae)(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 0024-08-30) Lima, Ingrid Lima e; Silva Filho, Ivan Sergio Nunes ; Martins, Angele dos Reis ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) Dentre os Squamata, a subordem Amphisbaenia possui indivíduos que apresentam diversas adaptações para o modo de vida fossorial, atualmente sendo representada por 202 espécies divididos em seis famílias. Apesar do recente aumento no interesse e progresso acerca do grupo, ainda nos deparamos com a falta de diversos tipos de dados. Sendo assim, devido ao número limitado de descrições miológicas conduzidas neste grupo taxonômico, o presente estudo visa fornecer uma descrição da anatomia muscular cefálica de quatro espécies de Amphisbaena – Amphisbaena dubia, Amphisbaena darwinii, Amphisbaena munoai e Amphisbaena microcephala. Além disso, incorporamos dados de espécies com descrições musculares previamente documentadas na literatura para fornecer uma comparação mais abrangente. Foram descritas variações na musculatura associada ao complexo mandibular e alterações na estrutura dos tendões que sustentam esses músculos. Além disso, foram identificadas variações na forma, origem e inserções do m. adductor mandibulae externus superficialis, medialis e profundus, na disposição das fibras do m. retractor anguli oris e do m. depressor mandibulae. Ademais, novas percepções sobre o sistema glandular das espécies, com a descrição de uma glândula rictal ainda não registrada para este grupo, juntamente com a criação de 24 de caracteres baseados nessas variações, foram fornecidas. Tais resultados traduzidos em caracteres podem ser utilizados para refinar e aprimorar futuras investigações filogenéticas, esclarecendo a evolução do grupo e suas adaptações morfológicas.ItemDissertação de mestrado Otimização do Sequence Slider: um método de elucidação de estruturas cristalográficas provenientes de fontes naturais(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-10-21) Bruno, João Paulo Ballerini; Fontes, Marcos Roberto de Mattos ; Borges, Rafael Junqueira ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) A cristalografia desempenha papel essencial na elucidação dos mecanismos de ação de proteínas, por oferecer dados em nível atômico. Para elucidar a estrutura de uma macromolécula é fundamental o conhecimento da exata composição do seu cristal, o que geralmente é o caso de proteínas obtidas de forma recombinante. Porém, em diversas áreas de estudos, como na toxinologia, as amostras são geralmente obtidas através da purificação direta de fontes naturais, como por exemplo veneno de serpentes, onde propriedades físico-químicas semelhantes de isoformas podem dificultar seu isolamento. Na incapacidade de determinar uma única sequência em um cristal e na ausência de dados cristalográficos à resolução atômica, não existem métodos que auxiliem na elucidação destas estruturas ab initio. O método SEQUENCE SLIDER foi desenvolvido para avaliar diferentes possibilidades de cadeias laterais em um modelo cristalográfico no âmbito do faseamento no software ARCIMBOLDO e da incerteza da sequência na toxinologia. Nesta última finalidade, SLIDER integra dados de cristalografia, espectrometria de massa e análises filogenéticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi otimizar SLIDER através da técnica de aprendizado de máquinas supervisionado eXtreme Gradient Boosting (XGBoost) sobre dados de análise de densidade eletrônica e do ambiente físico-químico de cada resíduo para estimar a atribuição do amino ácido correto. Foram utilizadas 41 estruturas cristalográficas de fosfolipases A2, 15 de receptores de porina e 149 metaloproteases, obtidas de fonte recombinante cuja sequência é conhecida para treinamento e teste da metodologia. Resultados obtidos apresentam acurácia de 94.3% a 98.4% para 16.919 resíduos. É esperado que a aplicação deste método a dados inéditos provenientes de proteínas purificadas a partir de fontes naturais com sequência desconhecida possa melhor caracterizar seus componentes e, consequentemente, auxiliar na compreensão de seus mecanismos de ação e estratégias de inibição. SLIDER ainda poderá auxiliar outros cristalógrafos e biologistas estruturais ao ser disponibilizado à comunidade científica e, utilizado em diferentes sistemas biológicos obtidos de fontes naturais.ItemDissertação de mestrado Produção experimental de partículas virais infectantes do PCV2b a partir de genomas sintéticos(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-06-27) Vieira, Larissa Baldo; Araújo Júnior, João Pessoa ; Magro, Angelo José ; Cruz, Taís Fukuta ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) O Circovírus suíno (PCV) é prevalente na população mundial de suínos e é notável por ser o menor vírus conhecido em termos de genoma e estrutura. Além disso, possui a capacidade de replicação autônoma, o que o torna um modelo interessante para estudos in vitro. Entre as diferentes espécies desse vírus, o PCV2 se destaca por estar associado à Síndrome da Circovirose Suína (SCS), um conjunto de sinais clínicos que afetam vários órgãos, sendo a manifestação mais comum a perda dos índices zootécnicos, levando os animais infectados ao definhamento e a outras lesões. O PCV2 apresenta uma molécula alvo importante, a proteína Cap, que constitui seu capsídeo e está diretamente relacionada à resposta imunológica do hospedeiro. A espécie PCV2b circula com particular relevância no Brasil. O monitoramento e a prevenção dessa infecção, bem como a melhor compreensão de aspectos essenciais à estrutura viral, podem ajudar a evitar perdas econômicas significativas aos produtores e contribuir com o melhoramento do bem-estar animal. Com isso, este trabalho teve como objetivo principal a padronização e execução de procedimentos para induzir a replicação viral autônoma do PCV2b em cultura de células a partir de um genoma viral construído artificialmente com base em um genoma viral selvagem sequenciado. Assim, o genoma viral sintético foi transfectado em células de linhagem de testículo suíno (ST), esta cultura de células foi mantida sob condições ideais e submetida a passagens para acomodar o crescimento e a renovação celular. O DNA viral desta cultura de células foi quantificado por qPCR em intervalos de 24 horas. A produção da proteína do capsídeo foi analisada por ELISA. Um ensaio de infecção em cultivo celular foi realizado com o sobrenadante das células transfectadas e mantidas. O DNA viral foi detectado em todos os intervalos de coleta, tanto nas células submetidas aos ensaios de transfecção quanto nas de infecção. A quantificação da carga viral mostrou uma relação direta à confluência celular. A presença da proteína Cap foi confirmada por ELISA. A estrutura externa das partículas virais sintéticas foi visualizada a partir de microscopia eletrônica de transmissão com coloração negativa. Portanto, a produção experimental de partículas virais infectantes do PCV2b a partir de genomas sintéticos tem como vantagem a realização de estudos experimentais com mutações específicas. A padronização da produção de partículas virais sintéticas permite a obtenção de partículas virais a partir do genoma viral desenhado com quaisquer alterações de interesse. É possível explorar alterações baseadas em simulações computacionais, o que abre caminho para pesquisas futuras que explorarão aspectos essenciais da montagem e estabilidade do capsídeo desse vírus e pode, por exemplo, nortear o desenvolvimento de futuras vacinas ou outros produtos biotecnológicos.ItemDissertação de mestrado Examinando os efeitos de estressores climáticos na motivação de forrageamento e comunicação química em crustáceos decápodes(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-07-19) Martins, Carolina Guardino; Costa, Tânia Marcia ; De Grande, Fernando Rafael ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) Os ambientes do entremarés são considerados ricos em diversidade e são frequentemente influenciados por variáveis bióticas e abióticas. Nesses habitats, as poças de maré em costões rochosos passam por variações significativas nas condições abióticas devido aos ciclos alternados de submersão e emersão. Em razão do seu tamanho reduzido, essas poças possuem baixa inércia térmica e respondem rapidamente às mudanças de temperatura, pH e níveis de oxigênio durante as marés baixas. Isso pode resultar em altas temperaturas, queda de pH e condições de hipóxia, criando ambientes próximos aos limites de sobrevivência para os organismos que as habitam. Considerando o cenário atual de mudanças do clima, é de suma importância entender como que os organismos que habitam esses ambientes irão responder a intensificação dessas variáveis. Apesar das poças de maré serem ambientes menores em relação à extensão total dos costões rochosos, é importante ressaltar que a dinâmica que ocorrem nesse habitat pode nos auxiliar no entendimento da relação entre as espécies e variáveis ambientais em diferentes níveis de complexidade dos organismos. As oscilações drásticas das variáveis abióticas fazem com que os organismos que habitam as poças de maré sejam um ótimo modelo para testarmos a interferência de estressores climáticos. As interferências negativas dessas relações podem gerar efeitos em cascata no ambiente, podendo ter impactos em níveis ecossistêmicos colocando em risco a diversidade biológica.ItemDissertação de mestrado Efeitos de heatwaves na percepção química do peixe predador Bathygobius soporator(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-07-19) Borges, Jaqueline Santos; Costa, Tânia Marcia ; De Grande, Fernando Rafael ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) No ambiente marinho um eficiente mecanismo de interação entre os organismos é através da comunicação química, usada para identificar potencial perigo, parceiro reprodutivo ou alimento. No entanto, as mudanças do clima podem alterar esse mecanismo, o que pode acarretar efeitos nocivos nas diferentes interações ecológicas. Poças de maré são bons modelos para avaliar os efeitos de eventos extremos, uma vez que apresentam grandes variações abióticas e desempenham funções ecológicas importantes. Nosso estudo teve o objetivo de avaliar como as consequências de heatwaves irão afetar as interações ecológicas entre consumidores e presas. Primeiramente foi feita a caracterização ambiental, através de coletas de dados abióticos em poças de maré. Em laboratório, foi avaliado se a percepção química do predador Bathygobius soporator aos estímulos químicos da presa Pachygrapsus transversus foi afetada pelo evento de heatwave, em um experimento com quatro tratamentos: presença e ausência de estímulo químico da presa, nas temperaturas de 31°C (controle) e 35°C (cenário SSP3-7.0, IPCC, 2021). O tempo de latência foi maior nos indivíduos expostos à heatwave (35°C) e o comportamento de forrageamento foi maior nos indivíduos expostos à temperatura controle (31°C). Na etapa de alimentação do predador, na temperatura controle (31°C), os tratamentos com e sem estímulo químico da presa, ingeriram maior quantidade de alimento, em comparação à temperatura de heatwave (35°C). Nossos resultados mostraram que B. soporator é responsivo ao estímulo químico de P. transversus e que seu comportamento de predação será afetado negativamente em cenários de heatwaves.ItemDissertação de mestrado Diversidade de espécies de Kingsleya Ortmann 1897, (Crustacea: Decapoda: Pseudothelphusidae) no nordeste brasileiro: implicações filogenéticas(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-01-26) Lupino, Lívia Martins; Santana, William Ricardo Amancio ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) Na região Neotropical, as florestas úmidas e os ecossistemas aquáticos apresentam uma grande diversidade biológica. Entre a fauna de ambientes de água doce estão os caranguejos da seção Eubrachyura (caranguejos verdadeiros), que se dividem em duas grandes famílias, sendo Kingsleyinae considerada a divisão oriental, devido à sua endemicidade na América do Sul. Kingsleyinae compreende 15 géneros, incluindo Kingsleya Ortmann, 1897, com 11 espécies válidas. Estas espécies são encontradas na região amazônica e em áreas relictuais do nordeste do Brasil, tornando crucial o entendimento dos padrões de distribuição geográfica e isolamento destas espécies. Nosso objetivo foi realizar análises filogenéticas e taxonômicas, utilizando dados moleculares e morfológicos, a fim de compreender as relações entre as espécies de Kingsleya e preencher lacunas de informação sobre este grupo. As sequências obtidas neste estudo foram combinadas com publicações anteriores, juntamente com sequências externas da base de dados GenBank. As análises filogenéticas validaram o monofiletismo de Kingsleya. Além disso, 75% das relações intra-específicas deste género foram claramente evidenciadas. Além disso, foi possível identificar uma nova espécie do Piauí. A convergência de evidências morfológicas e moleculares dá suporte aos padrões de distribuição delineados neste estudo.ItemDissertação de mestrado Papel da sinalização TGF-β no nicho espermatogonial de zebrafish(Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2018-12-20) Costa, Daniel Fernandes da; Nóbrega, Rafael Henrique ; Universidade Estadual Paulista (UNESP) A via de sinalização TGF-β está presente em todos os metazoários, regulando diversas etapas do desenvolvimento embrionário e da resposta imunológica, além de estar envolvida no processo carcinogênico e regulação da espermatogênese. A espermatogênese é um processo altamente organizado, cujo funcionamento adequado garante a sobrevivência das espécies. Maiores estudos que auxiliem na compreensão dos mecanismos endócrinos e parácrinos responsáveis pelo refinamento dos processos que ocorrem no nicho espermatogonial são necessários. Visto isso, a via de TGF-β por mediar processos celulares fundamentais para a função testicular (auto-renovação e diferenciação), se torna de grande relevância para uma compreensão mais ampla do processo espermatogênico. Uma abordagem muito valiosa para o entendimento da função testicular é a utilização de inibidores específicos de vias de sinalização. Dito isso, com o intuito de avaliar o papel da subfamília TGF-β no nicho espermatogonial de zebrafish, foi utilizado o inibidor A83-01, bloqueador da ativação da subfamília TGF- β (TGF-β, Inibina, Actina e Nodal). Também, foi avaliado o papel do Fsh na via de sinalização TGF-β, de forma a agregar aspectos importantes sobre essa sinalização e sua influência no nicho espermatogonial de teleósteos. Nossos resultados mostram que o inibidor potencializou os efeitos de pró-diferenciação do Fsh, favorecendo diferenciação excessiva e reduzindo os estoques de espermatogônias tronco. Desta forma, conclui-se que os resultados aqui encontrados indicam que a subfamília TGF-β atua como fator pró-proliferação, promovendo auto-renovação espermatogonial.ItemDissertação de mestrado O papel dos hidrolisados proteicos extraídos do bycatch na fisiologia do camarão Macrobrachium rosenbergii(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-07-30) Siqueira, Ana Carolina Louzã; Augusto, Alessandra da Silva ; Universidade Estadual Paulista (Unesp) A pesca de arrasto é uma atividade de baixa seletividade e responsável por 25% das devoluções de animais mortos no mar. As devoluções são chamadas de bycatch ou fauna acompanhante, e são definidas como organismos não-alvos que são pescados com espécimes de interesse econômico. O presente trabalho buscou testar hidrolisados proteicos com potencial antioxidante extraído do bycatch do litoral de São Paulo na dieta de uma espécie importante para a aquicultura. Tal aproveitamento do bycatch pode agregar desenvolvimento econômico e social aos pescadores e à aquicultura. Os hidrolisados proteicos com potencial antioxidante foram obtidos das duas espécies de peixes (Paralonchurus brasiliensis e Micropogonias furnieri) mais abundantes do bycatch da pesca de arrasto de camarão do litoral paulista por membros do nosso grupo de pesquisa. Este estudo visa analisar a viabilidade da introdução deste hidrolisado proteico na dieta do camarão de água doce Macrobrachium rosenbergii e avaliar seu papel antioxidante em animais expostos à elevada concentração de amônia. No primeiro capítulo desta dissertação avaliamos se a inclusão de diferentes concentrações do hidrolisado proteico (0%, 2.5%, 5% e 10%) na dieta de M. rosenbergii afeta a sobrevivência, crescimento e fisiologia. Nós avaliamos a sobrevivência e uma malha de mecanismos fisiológicos (crescimento, ingestão, defecação, reservas energéticas, metabolismo e excreção). O uso do hidrolisado não afetou variáveis importantes para a aquicultura, como sobrevivência, crescimento e ingestão alimentar, embora tenha reduzido o consumo e a excreção de amônia. No segundo capítulo, investigamos os efeitos da exposição aguda a concentração de 25 mg/L de amônia total na sobrevivência, fisiologia (metabolismo, excreção de amônia, O/N, índice hepatossomático) e morfologia branquial de M. rosenbergii. Nós também testamos se a inclusão de 2,5% de hidrolisado proteico extraído do bycatch na dieta de M. rosenbergii reduz os prováveis efeitos negativos da exposição à amônia. Observamos que os efeitos da exposição à amônia incluem reduções no consumo de oxigênio e na excreção de amônia e que a inclusão do hidrolisado proteico na dieta oferece uma possível redução do efeito da amônia na estrutura branquial dos animais. Visto que as brânquias são órgãos multifuncionais e responsáveis pela respiração, excreção, osmorregulação e regulação do pH, sugerimos que tal efeito seja estudado de maneira aprofundada durante longos períodos de exposição ao poluente, pois temos indícios da sua funcionalidade na redução de efeitos negativos.ItemDissertação de mestrado Desenvolvimento de biocompósitos mecanicamente viáveis para a aplicação na indústria automotiva(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-06-05) Fernandes, Luís Guilherme Leite; Leão, Ivana Cesarino ; Leão, Alcides Lopes ; Volkswagen Brasil A descoberta dos plásticos como o polipropileno moldou a forma de consumo, presente até os dias de hoje na forma de plásticos de uso único. Contudo, da mesma forma em que os plásticos impactaram o mercado, os impactos ambientais resultantes dessa exploração se fazem presentes e constituem cada vez mais uma preocupação para a humanidade. Medidas como reciclagem, reutilização e alternativas sustentáveis têm sido cada vez mais valorizadas. Neste contexto, polímeros reforçados com fibras naturais surgem como alternativa aos materiais tradicionais como a fibra de vidro, devido ao seu menor impacto ambiental, menor densidade e boas propriedades mecânicas. O presente trabalho tem como motivação o desenvolvimento de compósitos à base de fibras naturais de bambu, eucalipto e sisal, com matriz polimérica de copolímero de polipropileno para a fabricação de peças automotivas. As formulações foram desenvolvidas com teor de 20 e 40% de fibras naturais, além de outros aditivos pertinentes, como agente compatibilizante, retardante de chamas, pigmento e modificador de impacto. A metodologia de preparo dos compósitos inclui a pesagem dos componentes, mistura mecânica, homogeneização, moagem e injeção dos corpos de prova. Os ensaios mecânicos realizados foram os ensaios de tração, de flexão, de resistência ao impacto Izod e os de dureza Shore D, seguindo as determinações das respectivas normas ASTM. Os resultados encontrados foram analisados um a um, comparando- se as propriedades das composições com as de um material de referência fornecido pela indústria, por meio de testes estatísticos adequados. Os resultados apontaram diferenças estatísticas significativas entre as composições e os materiais de referência na grande maioria das análises. As composições mostraram bons resultados para os ensaios de resistência à tração, à flexão e dureza, mas foram inferiores nos ensaios de resistência ao impacto. No que se refere à processabilidade, as fibras de bambu e de eucalipto não apresentaram dificuldades expressivas. As fibras de sisal, entretanto, se mostraram desafiadoras durante as etapas de fabricação.ItemDissertação de mestrado Taxonomia integrativa das espécies de Myloplus (Characiformes: Serrasalmidae) da bacia do Prata(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-05-29) Silva, Victória Dandara Pereira e; Oliveira, Claudio de ; Ota, Rafaela Priscila ; Instituto de Biociências Myloplus possui, atualmente, 15 espécies válidas, das quais, apenas M. tiete e M. levis ocorrem no sistema Paraná-Paraguai. Ambas são descritas com base em apenas um espécime e possuem descrições originais breves, tendo M. levis já sido considerada um sinônimo júnior de M. tiete. Filogenias moleculares recentes sugerem que as duas espécies são proximamente relacionadas. Para verificar se essas duas espécies realmente correspondem a táxons distintos, conduzimos uma abordagem integrativa, usando análises morfológicas e moleculares (COI). Nossos resultados demonstraram que M. tiete e M. levis são espécies distintas. Myloplus tiete pode ser diagnosticado de M. levis por: maior distância entre o término da nadadeira dorsal até o término da nadadeira anal (21,8– 25,3% SL vs. 17,0–20,0), base da nadadeira adiposa mais longa (4,1–5,8% SL vs. 2,6– 3,8), último raio da nadadeira anal curto e estreito (vs. longo e largo) e espinhos da quilha ventral curtos (vs. longos). Resultados moleculares recuperaram as espécies como táxons distintos, com distância interespecífica de 8,5%. Por hora, a atual classificação de M. tiete como uma espécie ameaçada (EN) de acordo com os critérios da IUCN pode ser devido à falta de uma definição apropriada da espécie. Esse estudo demonstra como a aplicação de abordagens integrativas podem ser úteis para melhorar a compreensão de táxons com históricos taxonômicos complexos, com descrições originais insuficientes e com grande similaridade morfológica.ItemDissertação de mestrado Atividade antibacteriana de peptídeos antimicrobianos (PAMs) nisina e melitina e óleos essenciais de copaíba e pitanga sobre bactérias causadoras de infecções na pele(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-05-27) Zapata, Tatiane Baptista; Fernandes Junior, Ary ; Pereira, Ana Flávia Marques ; Instituto de Biociências de Botucatu A resistência aos fármacos antibacterianos tem aumentado e mostrado a necessidade das pesquisas que visam novas opções terapêuticas para tratamento de doenças infecciosas. As piodermites como impetigo, ectima, erisipela, síndrome da pele escaldada estafilocócica, foliculite e acne representam um desafio clínico. Os produtos naturais, como os óleos essenciais e peptídeos antimicrobianos, são alternativas para o desenvolvimento de novas opções terapêuticas considerando a ampla atividade biológica destes produtos. Este estudo visa avaliar a atividade antibacteriana dos óleos essenciais de pitanga (Eugenia uniflora) e copaíba (Copaifera langsdorffi), do óleo resina de copaíba (Copaifera reticulata), além de dois peptídeos antimicrobianos: a nisina, uma bacteriocina produzida por Lactococcus spp., e a melitina, uma fração do veneno da abelha Apis mellifera. Os antimicrobianos foram testados sobre linhagens padrões ATCC (American Type Culture Collection) de Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA), Streptococcus pyogenes (S. pyogenes) e Cutibacterium acnes (C. acnes) utilizando a metodologia da microdiluição (REMA – Resazurin Microtiter Assay) para determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Na sequência, foram realizados ensaios utilizando os produtos antimicrobianos com as melhores atividades inibitórias sobre as bactérias testadas, com o objetivo de verificar o sinergismo com fármacos de uso convencional pela metodologia da curva de inibição do crescimento. Além disso, foram avaliadas a ação antibiofilme da nisina, melitina e as suas associações com fármacos antimicrobianos, bem como o efluxo de íons potássio e fosfato. A citotoxicidade desses produtos sobre queratinócitos (linhagem HaCaT) utilizando metodologia do vermelho neutro e citometria de fluxo também foram verificadas. Enquanto os óleos essenciais de pitanga, copaíba e óleo resina de copaíba apresentaram ação antimicrobiana com CIM podendo chegar até 8.000 μg/mL, a nisina e a melitina apresentaram eficácia frente às bactérias testadas com os menores valores de CIM. A nisina apresentou uma CIM de 3,1 μg/mL para MRSA, de 6,25 μg/mL para S. pyogenes e de 0,2 μg/mL para C. acnes. A melitina apresentou CIM de 62,5 μg/mL para MRSA, 15,6 μg/mL para S. pyogenes e de 3,91 μg/mL para C. acnes. A associação de 25% da CIM obtida para nisina e melitina com 25% da CIM dos fármacos oxacilina, cefalotina e clindamicina demonstrou ser sinérgica, principalmente sobre C. acnes. As concentrações subinibitórias da combinação da nisina e melitina com os antimicrobianos foram capazes de reduzir a formação de biofilme de MRSA e C. acnes. A melitina e a nisina demonstraram ter ação sobre o efluxo de íons potássio e fosfato, indicando uma possível ação sobre a membrana plasmática das bactérias testadas. Além disso, não foram observados efeitos citotóxicos da nisina e melitina sobre as células de queratinócitos HaCaT com viabilidade celular próxima à concentração de CIM sendo de 98% e 96%, respectivamente. A combinação de nisina com clindamicina também não demonstrou efeito citotóxico, na concentração de 3,125 μg/mL e 1,56 μg/mL, respectivamente, apresentando viabilidade celular de 98,21%. A nisina, na concentração de 25,0 µg/mL, não induziu apoptose ou morte tardia significativa em células de queratinócitos HaCaT. Como conclusão do estudo, a nisina e melitina, bem como as associações com fármacos antibacterianos, demonstraram potencial para se tornarem candidatas ao desenvolvimento de novas opções terapêuticas contra MRSA, S. pyogenes e C. acnes.ItemDissertação de mestrado Investigação da resposta inflamatória disparada pela proteína não-estrutural 1 (NS1) do vírus da Zika (ZIKV) e da Dengue (DENV) em modelos experimentais de epididimite murina(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-05-24) Camargo, Isabela Andrade de; Silva, Erick José Ramo da Os Arbovírus formam um grupo de vírus taxonomicamente diverso. Do ponto de vista epidemiológico e clínico, o vírus da dengue (DENV), o Zika (ZIKV) e o Chikungunya (CHKV), transmitidos pelo mosquito Aedes spp., são considerados os arbovírus de maior relevância, pois estima-se que cerca de 3,9 bilhões de pessoas, vivendo em 120 países, estão susceptíveis a infecções por pelo menos um deles. O DENV e ZIKV codificam a proteína não estrutural 1 (NS1), que possui papel fundamental nas manifestações clinicas dessas infecções virais, além de ser um potencial marcador para o diagnóstico de infecção aguda precoce. Estudos em células endoteliais e macrófagos em cultura demonstraram que a NS1 da DENV atua como agonista do receptor Toll-like 4 (TLR4), induzindo a secreção de citocinas, o que contribui para a gravidade da dengue. Nesse contexto, sabe-se que infecções virais podem causar inflamações no epidídimo, um órgão do sistema reprodutor masculino fundamental para a maturação dos espermatozoides e fertilidade masculina. Estudos utilizando o modelo experimental de epididimite murino demonstraram que o ZIKV coloniza e se multiplica no epidídimo, causando um quadro inflamatório conhecido como epididimite. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos da infecção por DENV no sistema reprodutor masculino. No presente estudo investigamos se as isoformas de NS1-ZIKV e NS1-DENV desencadeiam resposta inflamatória no epidídimo de camundongos, e se essa resposta é mediada pela ativação do TLR4. Utilizamos o modelo experimental de epididimite ex vivo, no qual as regiões proximal (segmento inicial) e distal (cauda do epidídimo) de camundongos C57BL/6 machos (90-120 dias) foram isoladas e incubadas por 3 h (34°C e 5%/95% de CO2/ar) com salina estéril (controle negativo), LPS ultrapuro de E. coli (50 ng/ml, controle positivo), NS1-DENV e NS1-ZIKV [1, 10 e 20 μg/ml]. Após as incubações, os tecidos e meio de cultura organotípica foram coletados e processados para ensaios de RT-qPCR e Multiplex, para avaliação da expressão de mediadores inflamatórios (Il6, Il1b, Tnf, Il10, Ccl2, Ccl3, Ccl4, Ccl5, Cxcl2 e Cx3cl1), elementos da via de sinalização TLR (Tlr4, Cd14, Myd88, Trif e Tlr3), enzimas envolvidas na resposta inflamatória (Ptgs1, Ptgs2 e Ido1) e genes envolvidos na função do epidídimo (Gja1, Cdh1, Cldn1, Cldn3 e Cldn8). O desafio inflamatório mediado por NS1-ZIKV e NS1-DENV regulou positivamente a expressão relativa de transcritos que codificam citocinas pró e anti-inflamatórias (Il1b, Il10, Ifnb1 e Ifng), quimiocinas (Ccl3, Ccl4, Ccl5 e Cxcl2), enzimas e adesão celular (Ptgs2, Icam1 e Vcam1) no segmento inicial e na cauda do epidídimo. A pré-incubação do segmento inicial e cauda do epidídimo com CLI-095 (3 μM), um inibidor da via TLR4, demonstrou que as regiões proximais e distais do epidídimo respondem diferencialmente à inflamação induzida pelas isoformas de NS1 dos flavivírus ZIKV e DENV, sendo parcialmente dependente da via TLR4 na cauda do epidídimo. Ambas as proteínas NS1 promovem regulação da expressão de genes envolvidos na inflamação aguda do epidídimo, sendo possivelmente essenciais para o reconhecimento do ZIKV e DENV pelo epidídimo. Afim de determinar se a infecção por DENV induz resposta inflamatória no epidídimo, investigamos se a infecção com DENV-2 cepa NGC por via intracerebral em camundongos machos Balb/c (8 semanas, dose referente a carga viral de 40 x LD50) ou meio 199 (controle negativo) induz expressão de mediadores inflamatórios. Os animais foram eutanasiados após 4, 5 e 7 dias da infeção, seus epidídimos coletados, segmentados em 4 diferentes regiões (segmento inicial, cabeça, corpo e cauda do epidídimo) e processados para ensaios de RT-qPCR. Os resultados demonstraram aumento dos níveis de citocinas (Tnf) e interferons (Infg e Infb1) nas diferentes regiões do epidídimo de camundongos. Portanto, o desafio de infecção de DENV-2 intracerebral, demonstrou que o vírus DENV é capaz de mediar a regulação gênica e no aumento das moléculas envolvidas na inflamação aguda do epidídimo. Em conclusão, nossos resultados demonstram que a NS1 atua como um padrão molecular associado à infecção por ZIKV e DENV no epidídimo, participando da resposta do órgão contra essas infecções virais. O presente estudo amplia o entendimento da fisiopatologia epididimite viral e suas implicações na fertilidade.ItemDissertação de mestrado Efeitos de diferentes ácidos graxos na expressão de transcritos envolvidos na síntese de PGF2α e PGE2 e no reconhecimento materno fetal em células trofoblásticas e embriões bovinos(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-06-07) Bezerra, Lucas Oliveira ; Membrive, Claudia Maria Bertan; Maldonado, Mariangêla Bueno Cordeiro A mortalidade embrionária precoce (MEP) ocasionada por falhas no reconhecimento materno da prenhez (RMP), entre os dias 15 e 17 após a fecundação, constitui uma das maiores causas de falhas reprodutivas em fêmeas bovinas. Estratégias para favorecer o RMP durante tal período crítico, baseiam-se na redução da síntese de prostaglandina F2α (PGF2α) pelo endométrio materno e/ou na maximização do estímulo anti-luteolítico induzido pelo concepto, incluindo o aumento da síntese de prostaglandina E2 (PGE2) e interferon-tau (IFNT). A PGE2 sintetizada pelo endométrio materno, embrião e células trofoblásticas desempenha efeitos luteotróficos e anti-luteolíticos; favorecendo o RMP. A adição de diferentes ácidos graxos em cultivos celulares modifica a biossíntese de eicosanóides, inclusive da PGE2 e PGF2α. A hipótese é que a suplementação com ácido linoleico conjugado (CLA), ácido linoleico (AL), ácido oleico (AO) e ácido eicosapentanóico (EPA) associado ao ácido docosahexaenóico (DHA) aumenta a síntese de PGE2, diminui a síntese de PGF2α e aumenta a razão PGE2/PGF2α em células trofoblásticas bovinas (CT-1); modifica a expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de PGE2 e PGF2α em CT-1 e embriões bovinos produzidos in vitro; altera a expressão de transcritos que favorecem o RMP em CT-1 e embriões, além de favorecer o nível de metilação do DNA nos embriões. Assim, objetivou-se com o Experimento 1: a) avaliar os efeitos da suplementação com 100 µM CLA, 100 µM AL, 100 µM AO ou 50 µM EPA + 50 µM DHA na síntese de PGE2, PGF2α e na razão PGE2/PGF2α em CT-1; b) avaliar a expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de prostaglandinas (PTGER4, PTGS2, PTGES2, PTGES, AKR1B1) e no RMP (IFNT) em CT-1. Assim, objetivou-se com o Experimento 2: a) avaliar os efeitos da suplementação com 100 µM CLA, 100 µM AL, 100 µM AO ou 50 µM EPA + 50 µM DHA na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de prostaglandinas (PTGS2, PTGES e AKR1B1), no RMP (IFNT) e no nível de metilação do DNA (DNMT3A) em embriões bovinos produzidos in vitro e b) avaliar a taxa de produção embrionária com 7 e 9 dias de cultivo. No Experimento 1, CT-1 em placas de 6 poços contendo meio acrescido com 10% de soro fetal bovino (SFB), onde foram cultivadas a 38,5°C com 5% CO2 por 5 dias. As CT-1 receberam meio de cultivo isento de SFB por 24 horas. Em seguida, os poços receberam meio sem SFB contendo 100 µM de CLA, 100 µM de AL, 100 µM de AO ou 50 µM de EPA + 50 µM de DHA durante 5 minutos e 24, 48 e 72 horas. Ao término do cultivo o meio foi coletado e as CT-1 foram lisadas com 1mL/poço de Trizol para posterior extração do RNA. As concentrações de PGE2 e PGF2α mensuradas por ELISA e os transcritos foram avaliados pela técnica de RT-PCR. Foram realizadas 5 repetições experimentais. A análise estatística foi realizada pelo PROC MIXED do SAS, considerando o poço a unidade experimental. No Experimento 2, folículos ovarianos de 2 a 10 mm provenientes de fêmeas Nelore abatidas, foram aspirados utilizando seringa de 10 mL e agulha 18G. Oócitos com citoplasma homogêneo e múltiplas camadas de células do cumulus foram submetidos à maturação in vitro (MIV) em gotas de 100 μL contendo meio MIV com 5% de soro fetal bovino (SFB) sob óleo mineral, em incubadora a 38,5oC em atmosfera umidificada a 5% de CO2 por 24 horas. Após a MIV, os oócitos foram submetidos a fertilização in vitro (FIV), com sêmen de uma única partida de mesmo touro Nelore, durante 18 horas nas mesmas condições da MIV (D0 = dia da FIV). Após a FIV, os prováveis zigotos (n = 1117) foram alocados em placas de 4 poços com 700 L de meio de cultivo/poço com 1,25% de SFB, acrescidos dos seguintes tratamentos: 100 μM de ácido linoleico conjugado (Grupo CLA; n = 223 oócitos); 100 μM de ácido linoleico (Grupo AL; n= 227); 100 μM de ácido oleico (Grupo AO; n = 225) ou 50 μM de ácido eicosapentaenóico - EPA + 50 μM ácido docosahexaenóico – DHA (Grupo EPA + DHA; n= 219); além de meio não acrescido de AG (Grupo Controle; n = 223). A produção embrionária foi avaliada no D7 e D9. Os embriões foram coletados no D9 e os transcritos foram avaliados pela técnica de RT-PCR. Foram realizadas 10 repetições experimentais. A análise estatística foi realizada utilizando o software PROC MIXED do SAS. No experimento 1, não houve diferença para a síntese de PGE2 e PGF2α no tempo de 5 min entre os diferentes grupos. Os grupos tratados com AL quando comparado ao controle apresentou maior (P < 0,001) síntese de PGE2 com 24 horas (301,19 61,83 vs. 45,59 4,00 ng/mL; respectivamente), 48 horas (272,42 56,82 vs. 48,15 6,59 ng/mL; respectivamente) e 72 horas (310,58 81,54 vs 97,40 22,40 ng/mL; respectivamente). A síntese de PGF2α foi maior (P < 0,001) nos grupo AL e AO quando comparados ao controle nos tempos de 24 horas (151,67 17,01 e 105,71 30,86 vs. 45,89 9,86 ng/mL; respectivamente), 48 horas (112,94 40,95 e 159,41 43,67 vs 80,10 19,10 ng/mL; respectivamente) e 72 horas (317,67 55,52 e 200,81 20,39 vs 98,77 21,81 ng/mL; respectivamente). A síntese de PGF2α foi menor (P < 0,001) no grupo EPA + DHA quando comparado ao controle com 48 horas (7,28 0,54 vs 45,89 9,86 ng/mL; respectivamente) e 72 horas (11,07 0,71 vs 98,77 21,81 ng/mL; respectivamente). A razão PGE2/PGF2α foram maiores (P = 0,007) nos grupos CLA, AL, EPA + DHA comparados ao grupo controle para 24 (2,23 + 0,31; 2,04 + 0,40 e 2,32 + 0,31 vs 1,11 + 0,15; respectivamente), 48 (3,16 + 0,68; 2,42 + 0,29 e 2,77 + 0,50 vs 0,74 + 0,15; respectivamente) e se manteve por 72 horas apenas no grupo EPA + DHA comparado ao controle (4,19 + 1,44 vs 1,09 + 0,18; respectivamente). Não foi observada diferença entre os grupos para os transcritos PTGES (P = 0,7799), PTGES2 (P = 0,8107) e PTGS2 (P = 0,4183). Foi observada uma tendência na abundância de PTGR4 ser maior (P = 0,1565) no grupo AL quando comparado ao EPA + DHA (0,0020 0,0002 vs 0,0008 0,0002; respectivamente). Também foi observada uma tendência na abundância de AKR1B1 ser maior (P = 0,1618) no grupo AO quando comparado ao CLA (0,2625 0,0265 vs 0,1512 0,0314; respectivamente). Com 72 horas de cultivo observou-se uma maior (P = 0,0044) expressão relativa de PTGS2 no grupo AL comparado ao controle (7,4253 ± 0,5671 vs 4,4689 ± 0,4454). Observou-se maior expressão relativa para o IFNT no grupo AL quando comparado ao controle nos tempos de 24 horas (0,1374 0,0090 vs 0,0990 0,0125 respectivamente; P = 0,0216) e 72 horas (0,2336 ± 0,0126 vs 0,1293 ± 0,0103, respectivamente, P = 0,0031). No tempo de 48 horas, a expressão de IFNT foi maior nos grupos AL, AO, EPA + DHA quando comparados ao controle (0,1699 ± 0,0294; 0,2989 ± 0,1391 e 0,2332 ± 0,0438 vs 0,0899 ± 0.0179, respectivamente, P = 0,0103). No Experimento 2, a produção embrionária foi reduzida no grupo EPA + DHA no D7 e D9 (3,98 1,43 vs 14,94 3,13 vs 2,34 1,29 vs 12,86 3,10). Não foi observada diferença entre os grupos para a expressão relativa do PTGES (P = 0,5496) e AKR1B1 (P = 0,1794). A expressão relativa de PTGS2 foi maior (P = 0,0286) no grupo AO comparado ao grupo controle e AL (1,1090 ± 0,0833 vs 0,7109 ± 0,0748 e 0,7068 ± 0,0577; respectivamente) e o grupo CLA não diferiu dos demais grupos. A expressão de IFNT tendeu (P = 0,1148) a ser maior nos grupos CLA e AO comparado ao controle (0,1544 ± 0,0293 e 0,1750 ± 0,0465 vs 0,0344 ± 0,0073 respectivamente). A expressão de DNMT3A tendeu a ser maior (P = 0,0797) nos grupos CLA e AO comparado ao controle (0,0009 ± 0,0001 e 0,0012 ± 0,0005 vs 0,0001 ± 0,00008 respectivamente). No Experimento 1, conclui-se que a suplementação com AL no meio de cultivo das CT-1 aumenta síntese de PGE2 com 24, 48 e 72 horas de cultivo; aumenta síntese de PGF2 com 24 e 72 horas de cultivo e aumenta razão PGE2/PGF2 com 24 e 48 horas e aumenta a abundância relativa dos transcritos PTGS2 com 72 horas de cultivo e de IFNT com 24, 48 e 72 horas de cultivo, podendo ser um grande aliado no RMP. No Experimento 2, conclui-se que a suplementação no meio de cultivo de embriões com AO aumentou a abundância de transcrito para PTGS2 e o CLA e AO tenderam a aumentar os transcritos para IFNT e DNMT3A, enquanto a suplementação com EPA + DHA afetou negativamente as taxas de produção embrionária.ItemDissertação de mestrado Morfologia de cerdas do exoesqueleto de Kingsleya attenboroughi Pinheiro & Santana, 2016 (Crustacea: Decapoda: Brachyura: Pseudothelphusidae)(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-04-30) Lima, Janaína Caldeira de ; Santana, William Ricardo Amâncio; Zara, Fernando José Este estudo representa a primeira descrição abrangente e ilustração da morfologia das cerdas em caranguejos braquiúros de água doce. Aqui, apresentamos uma análise detalhada dos vários tipos de cerdas encontradas no exoesqueleto de Kingsleya attenboroughi Pinheiro & Santana, 2016, uma espécie que habita as florestas relictuais da Chapada do Araripe em Barbalha, CE, Brasil. Através da microscopia eletrônica de varredura e exame histológico, identificamos uma morfologia de cerdas mais diversa e intrincada do que se pensava anteriormente. Classificamos oito tipos distintos de cerdas, cada um com subtipos específicos. O tipo denominado “brush” tipo 1, destaca-se significativamente diferente daqueles descritos anteriormente na literatura científica. Ele apresenta uma haste curta a média, robusta, com inserção infracuticular em pequenas “fossas” discretas, exibindo um padrão consistente em todas as cerdas “brush” tipo 1 observadas. Além disso, na cerda “brush” tipo 1, a haste é uniformemente lisa, exceto na extremidade apical, onde é adornada com setúlas densas e flexíveis. Os critérios para classificação das cerdas incluem características da haste, como relação comprimento/largura, localização e visibilidade do ânulus, formato do ápice, presença ou ausência de poros e sua posição, bem como a distribuição e tipo de setúlas e dentículos. Além disso, nossas descobertas morfológicas nos permitem inferir diversas funções potenciais para essas cerdas, estabelecendo assim uma base para pesquisas adicionais sobre o papel biológico e funcional dessas estruturas em caranguejos de água doce.ItemDissertação de mestrado Prospecção de inibidores para toxinas envolvidas na mionecrose em acidentes botrópicos por análises estruturais(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-05-16) Moraes, Ivan Rossi ; Fontes, Marcos Roberto de Mattos; Salvador, Guilherme Henrique Marchi Acidentes causados pelas serpentes peçonhentas do gênero Bothrops geram um grande problema médico e social no Brasil, devido ao proeminente dano local que pode levar à amputação do membro atingido. Algumas proteínas presentes no veneno botrópico estão diretamente relacionadas ao proeminente dano local, entre elas estão as fosfolipases A2, fosfolipases A2-like, metaloproteinases, serino proteases, L-aminoácido oxidases, lectinas tipo C e lectinas tipo C-like que atuam diretamente nos tecidos musculares. Considerando que os efeitos locais do veneno não são completamente neutralizados pelo soro antiofídico, há necessidade da busca por compostos que possam complementar a soroterapia. Desta forma, neste trabalho, são propostos estudos de termoforese em microescala e de bioinformática (Docking molecular e simulação de dinâmica molecular) com miotoxinas botrópicas e moléculas candidatas a inibi-las. Os experimentos de termoforese em micoescala foram realizados com fosfolipases A2-like e inibidores conhecidos, já os experimentos de bioinformática foram realizados com diversas classes de proteínas das serpentes Bothrops e os inibidores. Com os resultados obtidos neste trabalho, poderá se compreender melhor as interações e possíveis modificações estruturais que podem ser causadas pelos inibidores, além de também entender as bases estruturais que levam à inibição destas proteínas. Além disso, pretende-se verificar a possibilidade de moléculas inibidoras agirem de maneira simultânea em diferentes classes de toxinas.ItemDissertação de mestrado Reanálise do sequenciamento de célula única do câncer cervical HPV positivo como estratégia para identificação de novas abordagens terapêuticas(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-02-29) Brugnerotto, Laíza ; Delella, Flávia KarinaO câncer cervical (CC) é predominante em mulheres de países com baixo índice de desenvolvimento, estabelecendo este como o quarto câncer mais comum atualmente. Os fatores de risco incluem uso prolongado de contraceptivos, alto número de gestações e de parceiros sexuais, porém o mais predominante é a infecção pelo papilomavírus humano (HPV), vírus sexualmente transmissível. Os HPVs mais propensos a desenvolverem a doença são os 16 e 18, sendo denominados como HPVs de alto risco. O tratamento inicial para CC é a cirurgia, mas em estágios mais avançados da doença, o padrão de terapia é a quimiorradioterapia concomitante à base de cisplatina. Como existe a grande possibilidade de resistência/intolerância à cisplatina, outros fármacos vêm sendo estudados como novas alternativas de tratamento e também como combinação para aperfeiçoamento da resposta. Entretanto, mesmo com estes avanços, as taxas de cura de CC ainda permanecem baixas, principalmente em casos de CC recorrente e associados à metástase. Neste cenário, a biologia computacional vem sendo utilizada como forma de analisar comportamentos, identificar e validar possíveis biomarcadores terapêuticos por meio de ferramentas, plataformas e bancos de dados de pacientes disponíveis online, a fim de trazer melhorias no âmbito oncológico através da medicina de precisão e predição de novas drogas. Portanto, nosso estudo adaptou uma metodologia que proporciona uma pesquisa a nível celular da histologia e expressão gênica do tecido tumoral de CC HPV positivo, através da análise de sequenciamento de RNA de célula única (scRNA-seq), para identificar possíveis genes marcadores tumorais e novas potenciais drogas para o tratamento personalizado do CC.ItemDissertação de mestrado Detecção molecular de Cryptococcus spp. em amostras de fezes de pombos coletadas em Botucatu(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-07-29) Scherrer, Pablo Henrique ; Bosco, Sandra de Moraes GimenesA alta concentração de pombos (Columba livia) é um problema comum em metrópoles. No entanto, mesmo em cidades interioranas e relativamente pequenas, a presença dessas aves em praças, edificações e outros locais cuja estrutura oferece condições para abrigo, reprodução e alimentação, preocupa. A escassez de programas voltados para o controle, bem como a ausência de trabalhos de educação ambiental favorece a proliferação de pombos na área urbana, já que o ser humano potencializa a disponibilidade de alimento a esses animais. A criptococose ou popularmente doença do pombo, contraída principalmente por meio da inalação de poeira contendo células fúngicas associada às fezes secas, constitui uma ameaça à saúde pública. Seu agente etiológico, leveduras encapsuladas do gênero Cryptococcus spp., possui relevância na quantidade de mortes de pessoas imunodeprimidas no mundo todo. Nosso objetivo foi investigar a ocorrência de Cryptococcus neoformans em amostras de fezes de pombos, no município de Botucatu, Estado de São Paulo, coletadas em hospitais, praças ou escolas e seus arredores, onde a presença, concentração e aninhamento de pombos é facilmente verificada e o acúmulo de fezes notório. Para tanto, foram coletadas 5 amostras de fezes em 6 hotspots distintos na zona urbana e rural do município. Após extração de DNA realizou-se PCR com primers universais para fungos ITS-4 e ITS-5 e a seguir nested PCR com os primers CN4 e CN5, específicos para C. neoformans. Dos 06 hotspots avaliados, 5 foram positivos, sendo o único resultado negativo pertencente à zona rural do município de Botucatu. Dessa forma, podemos afirmar que 100% dos pontos urbanos analisados foram positivos para a presença de C. neoformans, o que é um dado preocupante, pois são áreas de grande circulação de pessoas que possam ser vulneráveis a infecções. Este achado deve trazer à tona a necessidade urgente da implementação de políticas coordenadas de monitoramento, de controle da proliferação de pombos e de educação ambiental e em saúde para difusão do conhecimento sobre a criptococose e como evitá-la.