Publicação: Atividade antibiofilme do extrato de Psidium guajava L. sobre Enterococcus faecalis e Candida albicans
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Data
2025-02-21
Autores
Orientador
Oliveira, Luciane Dias de 
Coorientador
Domiciano-Meccatti, Vanessa Marques
Pós-graduação
Ciências Aplicadas à Saúde Bucal - ICT
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Dissertação de mestrado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
A resistência microbiana é um fator preocupante na saúde mundial, inclusive no campo da odontologia. Os microrganismos Enterococcus faecalis e Candida albicans estão normalmente relacionados ao insucesso do tratamento endodôntico devido à resistência aos meios de descontaminação. Esse trabalho objetivou: I) produzir e avaliar fitoquimicamente o extrato de Psidium guajava L. (goiabeira); II) Avaliar a ação antimicrobiana e antibiofilme sobre cepas ATCC e clínicas de Enterococcus faecalis e Candida albicans, comparando com hipoclorito de sódio e clorexidina; III) avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade do extrato em linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT). Para tanto, o extrato foi preparado e caracterizado fitoquimicamente por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-DAD), a ação antioxidante foi avaliada e o teor de flavonoides e fenóis determinados. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de microdiluição em caldo (CLSI M27-S4 para C. albicans) e (CLSI M7-A9 para E. faecalis) para determinar concentração inibitória mínima (CIM) e concentração microbicida mínima (CMM). As concentrações mais efetivas foram analisadas em biofilmes monotípicos formados em 48 horas que foram tratados com o extrato de P. guajava L. pelo tempo de contato de 10 minutos e quantificada a viabilidade pelo teste colorimétrico de MTT. A linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT) foi utilizada para avaliação de citotoxicidade e genotoxicidade, com o emprego do teste colorimétrico de Alamar Blue e micronúcleos, respectivamente. Os dados foram analisados por Anova one-way e Tukey ou Kruskal Walis e Dunn considerando o nível de significância (p≥0,05), de acordo com o teste de normalidade. A análise cromatográfica mostrou picos de rutina, quercitina e kaempeferol no extrato vegetal e para eliminar 50% dos radicais livres é necessário 10,39 µg/mL do mesmo. O teor de sólidos solúveis foi quantificado em 3,35%, a concentração de flavonoides foi de 0,130 mg/mL e 1,770 de fenóis. O extrato apresentou ação bactericida e antifúngica contra todas as cepas estudadas, sendo a CMM de 1,0 mg/mL para E. faecalis ATCC e clínica (cepa 4), de 2,0 mg/mL para E. faecalis clínica (cepa 2), C. albicans clínica (cepas 14 e 60) e 8,3 mg/mL para C. albicans ATCC. Na análise antibiofilme a concentração de 8,3 mg/mL demonstrou porcentagens de redução acima de 50% para todas as cepas estudadas. Sendo as melhores porcentagens de redução de biofilme obtidas na concentração de 8,3 mg/mL que reduziu 69,27% do biofilme e 2 mg/mL que reduziu 61,24% ambos para E. faecalis clínica (cepa 4). O extrato de P. guajava L. não foi citotóxico e nem produziu alteração no material genético dos queratinócitos. Portanto é possível concluir que o extrato de P. guajava L. possui ação antimicrobiana e antibiofilme sobre E. faecalis e C. albicans, possui boa ação antioxidante e não é citotóxico,nem genotóxico para queratinócitos humanos (Hacat).
Resumo (inglês)
Antimicrobial resistance is a concern in global health, including in the field of dentistry. The microorganisms Enterococcus faecalis and Candida albicans are usually related to the failure of endodontic treatment due to resistance to decontamination agents. This study aimed to: I) produce and phytochemically evaluate the extract of Psidium guajava L. (guava); II) evaluate the antimicrobial and antibiofilm action on ATCC and clinical strains of Enterococcus faecalis and Candida albicans, comparing it with sodium hypochlorite and chlorhexidine; III) evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of the extract in human keratinocyte cell lines (HaCaT). For this purpose, the extract was prepared and phytochemically characterized by high-performance liquid chromatography (HPLC-DAD), the antioxidant action was evaluated, and the content of flavonoids and phenols were determined. The antimicrobial activity was analyzed by the broth microdilution test (CLSI M27-S4 for C. albicans) and (CLSI M7-A9 for E. faecalis) to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum microbicidal concentration (MMC). The most effective concentrations were analyzed in monotypic biofilms formed in 48 hours that were treated with P. guajava L. extract for a contact time of 10 minutes and the viability was quantified by the MTT colorimetric test. The human keratinocyte cell line (HaCaT) was used to evaluate cytotoxicity and genotoxicity, using the Alamar Blue colorimetric test and micronucleus, respectively. The data were analyzed by one-way ANOVA and Tukey or Kruskal Walis and Dunn considering the significance level (p≥0.05), according to the normality test. The chromatographic analysis showed peaks of rutin, quercitin and kaempeferol in the plant extract and to eliminate 50% of the free radicals, 10.39 µg/mL of the same is necessary. The content of soluble solids was quantified at 3.35%, the concentration of flavonoids was 0.130 mg/mL and 1.770 of phenols. The extract showed bactericidal and antifungal action against all the strains studied, with the MMC of 1.0 mg/mL for E. faecalis ATCC and clinical (strain 4), 2.0 mg/mL for E. faecalis clinical (strain 2), C. albicans clinical (strains 14 and 60) and 8.3 mg/mL for C. albicans ATCC. In the antibiofilm analysis, the concentration of 8.3 mg/mL demonstrated reduction percentages above 50% for all strains studied. The best biofilm reduction percentages were obtained at the concentration of 8.3 mg/mL, which reduced 69.27% of the biofilm, and 2 mg/mL, which reduced 61.24%, both for clinical E. faecalis (strain 4). The P. guajava L. extract was not cytotoxic and did not produce changes in the genetic material of keratinocytes. Therefore, it is possible to conclude that the P. guajava L. extract has antimicrobial and antibiofilm action on oral microorganisms, has good antioxidant action and is not cytotoxic or genotoxic for human keratinocytes (Hacat).
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português
