Caracterização espermática e padronização do sistema computadorizado para avaliação da cinética do Arapaima gigas (Schinz, 1822)

Abstract

Diante da importância do Arapaima gigas para a produção aquícola aliada à lacuna de conhecimentos sobre a qualidade de gametas da espécie, o objetivo foi avaliar suas características espermáticas e realizar a padronização da configuração do plugin CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) do software ImageJ para avaliação da cinética espermática. Neste sentido, 21 machos de pirarucu com massa de 38,60 ± 11,50 kg e um comprimento de 1,55 ± 0,13 m tiveram amostras coletadas. Para a coleta do sêmen, adotou se o procedimento de esvaziar a bexiga urinária com auxílio de uma sonda uretral. Em seguida, travou-se o canal urinário com uma sonda Foley. O sêmen coletado foi utilizado para avaliação dos normalidade espermatica (48,9±15,4 % de normais), concentração (5,63±1,0 x 1010 spz.mL-1) e integridade da membrana espermática (59,1±10,9 % de íntegros). Realizou-se também a ativação espermática e a captura de vídeos (100 fps) de movimentação para caracterizar a cinética espermática (CASA/ImageJ). Para isso, determinou-se os valores mínimos das velocidades em linha reta (VSL), média de deslocamento (VAP) e curvilinear (VCL) para caracterizar células como móveis. Verificou se que a combinação dos valores de VSL=10 µm.s-1; VAP=15 µm.s-1 e VCL= 40 µm.s-1 permitiu considerar as células como móveis de forma mais coerente em comparação com avaliação visual. Além disso, células espermáticas de A. gigas podem ser definidas em rápidas quando apresentam VCL> 238 µm.s-1, intermediárias entre 131 e 237 µm.s-1, lentas entre 41 e 131 e µm.s-1 e estáticas abaixo de 41 µm.s-1.

Given the importance of Arapaima gigas in aquaculture production and the existing gap of knowledge regarding gamete quality, this study aimed to evaluate its sperm characteristics and to standardize the configuration of CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) plugin in the ImageJ software for assessing sperm kinetics. Semen samples were collected from 21 males weighing 38.60 ± 11.50 kg and easuring 1.55 ± 0.13 m in length. For semen collection, the urinary bladder was first emptied using a urethral catheter, followed by the insertion of a Foley catheter to block the urinary canal. The collected semen was used to evaluate normal sperm morphology (48.9 ± 15.4 % normal), sperm concentration (5.63 ± 1.0 x 1010 spz.mL-1 ), and membrane integrity (59.1 ± 10.9 % intact). Sperm activation and video capture (100 fps) were performed to characterize sperm kinetics using CASA/ImageJ. Minimum velocity thresholds for straight-line (VSL), average path (VAP), and curvilinear (VCL) velocities were established to classify motile cells. The combination of VSL = 10 µm.s -1, VAP = 15 µm.s -1 , and VCL = 40 µm s-1 provided the most accurate identification of motile cells. Moreover, sperm cells of A. gigas can be classified as fast when VCL > 238 µm s-1 , intermediate between 131-237 µm s-1 , slow between 41-131 µm.s -1 , and static below 41 µm.s -1.